P53、KRAS在肺腺癌患者的表達及意義

云洪巖

摘要：目的：探討p53、KRAS在肺腺癌患者中的表達及意義。方法：選擇2018年5月-2020年12月肺腺癌患者45例作為對象，所有患者均行手術治療，取病灶組織及癌旁組織（距離病灶≥3cm）。采用二代測序技術測定患者KRAS突變基因;采用免疫組織化學法測定患者p53蛋白表達。結果：45例肺腺癌患者均完成基因突變測定，結果表明：28例發生基因突變，突變率為62.22%。基因突變類型排在前三位分別為：EGFR、P53和KRAS，分別占：36.36%、22.73%和18.18%;肺腺癌患者病灶組織中p53高于癌旁組織（P<0.05）。結論：肺腺癌患者基因中存在多種基因突變和共突變，且患者常伴有p53、KRAS表達異常，能為臨床診療提供參考依據。

關鍵詞：肺腺癌;基因突變;基因譜;KRAS;二代測序技術;免疫組織化學法

肺腺癌屬于肺癌的一種，是非小細胞肺癌。但是，肺腺癌不同于鱗狀細胞肺癌，更容易發生在女性、不吸煙人群中[1]。目前，臨床上對于肺腺癌發病機制尚未闡明，普遍認為與吸煙、電離輻射及多環形方向化合物有關，發病早期臨床癥狀缺乏典型性，導致臨床診療難度較大。既往研究表明：肺腺癌的發生與多種因素有關，而基因改變的遺傳多樣性及易感性在疾病的發生、發展中發揮了重要作用。P53作為重要的抑癌基因，在誘導細胞周期捕獲、凋亡與DNA修復等多種生理功能中發揮了重要作用。鼠類肉瘤病毒癌基因（KRAS）屬于原癌基因RAS家族成員之一，是表皮生長因子受體（EGFR）信號通路下游重要調節位點，能直接參與細胞生長增殖與分化的調節[2]。因此，本研究以肺腺癌患者為對象，探討肺腺癌基因譜及p53、KRAS的表達及意義，報道如下。

1.資料與方法

1.1臨床資料

選擇2018年5月-2020年12月肺腺癌患者45例作為對象，男26例，女19例，年齡（43-75）歲，平均（58.95±6.49）歲;腫瘤直徑（1-6）cm，平均（3.23±0.61）cm;TNM分期：I-II期31例，III-IV期14例;淋巴結轉移：是21例，否24例;分化程度：高分化18例，中分化20例，低分化7例。納入標準：（1）符合肺腺癌診斷標準，均經病理組織檢查確診;（2）均能完成腺癌基因譜及p53、KRAS檢查，且患者均可耐受;（3）具有完整的基線及隨訪資料。排除標準：（1）精神異常、認知功能異?；蚱髻|性疾病者;（2）伴有自身免疫系統疾病、行放化療治療者。

1.2 方法

1.2.1 肺腺癌基因譜

采用二代測序法測定不同組織中KRAS基因突變位點，具體方法如下。試劑盒購置于Illumina提供的人類肺癌相關26個基因突變檢測試劑盒。KRAS基因檢測位點主要檢測外顯子2號12個密碼子的16個不同的基因位點，并完成位于13密碼子的1個突變位點，分析兩種不同組織中KRAS基因突變情況。

1.2.2 P53蛋白

采用免疫組織化學法測定不同組織中P53蛋白表達水平，具體方法如下：將制備并獲得的標本進行常規石蠟切片，常規脫蠟、水化后給予抗原進行熱修復處理，去除內源性生物酶后、染色。P53工作液，常規采用DAB液（購自于基因科技有限公司）顯色后，采用自來水進行沖洗，終止反應后進行蘇木精1min染色，并利用鹽酸乙醇分化。上述操作完畢后進行再沖洗、返藍。梯度乙醇對標本脫水后再二甲苯的輔助作用下處理，中性樹膠封固（免疫組化測定時，以鹽酸鹽緩沖液作為一抗陰性對照，利用已知陽性組織切片作為陽性對照）在400倍顯微鏡下對不同標本切片隨機取5個視野，每個視野選擇細胞200個計數。②判定方法。不同組織測定完畢后，采用半定量方法進行測定及判斷。0分：陽性細胞占0%-10%;1分：陽性細胞占10.0%-25.0%;2分：陽性細胞占25%-50.0%;3分：陽性細胞占50.0%-75.0%;4分陽性細胞>75.0%。對于得分>3分視為陽性[3]。

1.3統計分析

采用SPSS24.0軟件處理，計數資料行χ2檢驗，采用n（%）表示，計量資料行t檢驗，采用（ ）表示，P<0.05差異有統計學意義。

2結果

2.1 肺腺癌患者基因突變類型及構成比

45例肺腺癌患者均完成基因突變測定，結果表明：28例發生基因突變，突變率為62.22%?；蛲蛔冾愋团旁谇叭环謩e為：EGFR、P53和KRAS，分別占：36.36%、22.73%和18.18%，見表1。

2.2 肺腺癌患者不同組織中p53蛋白陽性率比較

肺腺癌患者病灶組織中p53蛋白陽性率均高于癌旁組織（P<0.05），見表2。

3 討論

本研究中采用二代測序法對肺腺癌患者完成基因譜分析，結果表明：基因突變類型排在前三位分別為：EGFR、P53和KRAS，分別占：36.36%、22.73%和18.18%。EGFR基因突變主要集中在19和21號外顯子上，突變率較高，可發生共突變。而KRAS基因突變主要集中在2號外顯子上。而p53基因突變多集中在4-8號外顯子上。本研究中，肺腺癌患者病灶組織中p53、KRAS蛋白陽性率均高于癌旁組織（P<0.05），說明p53、KRAS蛋白在肺腺癌患者中表達異常。因此，臨床上肺腺癌患者應加強基因突變、p53、KRAS蛋白測定，評估患者預后，指導臨床治療。

綜上所述，肺腺癌患者基因中存在多種基因突變和共突變，且患者常伴有p53、KRAS蛋白表達異常，能為臨床診療提供參考依據。

參考文獻

[1]柴榮，范銀星，趙家義，等.非小細胞肺癌中KRAS基因突變與PD-1/PD-L1信號通路相關性的研究進展[J].國際呼吸雜志，2019，39（23）：1822-1826.

[2]陳瓏，王琳，何冬雷，等.T790M基因突變陽性的肺腺癌并骨轉移患者個體化治療遠期療效及預后的相關因素分析[J].中國腫瘤生物治療雜志，2019，26（2）：200-205.

[3]鄭瑞鋒，文海英，羅俊波，等.非小細胞肺癌Kras基因突變相關因素及其與一線同步放化療療效相關性研究[J].中華腫瘤防治雜志，2020，27（5）：47-52.

（佛山市禪城區中心病理科 ?廣東 ?佛山 ?528000）