張家港地區14 242例女性人乳頭瘤病毒27種分型檢測和感染情況分析*

周勤峰，陳媛媛，翟麗華，王 蓉

南京中醫藥大學附屬張家港醫院檢驗科，江蘇蘇州 215600

宮頸癌是我國女性生殖系統最常見的惡性腫瘤之一，幾乎90%的宮頸癌病例是由人乳頭瘤病毒(HPV)感染引起[1]。HPV幾乎是所有宮頸癌的發病原因，此外，它還會引發其他部位的癌癥，比如陰莖、陰道、外陰、肛門和口咽等[2]。目前已知的HPV有170多種[3]，根據其致癌潛力將其分為高危型和低危型兩類[4]。由于宮頸癌發病率位居高位，HPV的感染率也因地區和人群而異，因此，制訂完善的防治策略，開展HPV分型檢測的流行病學分析，對臨床宮頸癌的防治具有重要指導意義。

1 資料與方法

1.1一般資料 標本來源于南京中醫藥大學附屬張家港醫院2018年1月至2020年8月婦科、婦產科、皮膚科及體檢中心等的14 242例女性，年齡16～86歲。其中，陽性病例共3 187例，根據患者年齡分為3組，其中<30歲555例；30～45歲1 526例；>45歲1 106例。

1.2儀器與試劑 試劑為上海透景生命科技股份有限公司提供的HPV核酸分型檢測試劑盒，PCR儀為杭州博日公司生產，多功能流式點陣儀為美國Luminex公司生產。

1.3方法

1.3.1標本采集 醫護人員以窺陰器暴露宮頸口，用無菌棉拭子擦去宮頸口分泌物，將宮頸刷伸入宮頸口處，順時針輕柔轉動4～5周，慢慢取出宮頸刷，將其放入裝有細胞保存液的取樣管中，旋緊管蓋，并保持標本取樣管直立放置，立即送實驗室檢查或4 ℃短期保存，或-20 ℃長期保存。

1.3.2標本檢測 采用HPV核酸分型檢測試劑盒(流式熒光雜交法)進行模板制備。(1)DNA模板的提取：標本振蕩混勻，取200 μL樣本混合液加入1.5 mL EP管內，置于高速離心機內14 000 r/min離心5 min，棄上清液。加入200 μL核酸提取液，混勻，100 ℃干浴15 min，14 000 r/min離心5 min，吸取5 μL上清液作為PCR的模板，同時設立陰性、陽性對照。(2)PCR反應液的配置：每個PCR反應液的總體積為15.8 μL,組成為預混液10.0 μL、引物混合液5.0 μL，聚合酶0.8 μL，試劑混勻備用。(3)加樣：在PCR反應管內每孔加入15 μL配置好的PCR反應液，再加入相應5 μL DNA模板，蓋緊蓋子后瞬時離心使反應液集中在PCR反應管的底部。(4)PCR擴增：將PCR管放入普通PCR儀器，按照試劑說明書指定的擴增反應條件溫度進行循環擴增。(5)雜交檢測：加入混勻的22 μL微球雜交液，每個標本吸取3 μL PCR擴增產物并加入到相應的雜交孔中，封膜，按照說明書的指示溫度和時間進行變性和雜交過程。小心將封膜撕下，每孔快速加入鏈霉親和素-藻紅蛋白75 μL。加完后將封模重新貼好，48 ℃繼續孵育15 min。將微孔雜交板迅速轉移至預熱的多功能點陣儀上進行檢測。(6)結果判讀：當標本內標(Globin)信號>150，且HPV型別特異性探針信號>150時，判斷該探針對應的HPV型別為陽性。

1.4統計學處理 應用SPSS26.0軟件對所得數據進行統計學分析，計數資料用例數或百分比表示，組間比較采用χ2檢驗，P<0.05表示差異有統計學意義。

2 結 果

2.1張家港地區HPV27種亞型的陽性率和在陽性標本中所占比例情況比較 14 242份標本中檢出HPV陽性3 187例，總陽性率為22.38%(3 187/14 242)。HPV高危型中，陽性率前3位的分別是HPV52、HPV16、HPV58；HPV低危型中，陽性率前3位的分別是HPV61、HPV81、HPV44。見表1。

2.2HPV多重感染分布情況 HPV單一感染最多見，其構成比為71.16%，二重感染構成比為18.45%，三重感染構成比為6.97%，四重感染構成比為2.73%，五重感染構成比為0.56%，五重以上感染構成比為0.13%。見表2。

表2 HPV多重感染分布情況(n=3 187)

2.3不同年齡段HPV單一感染和多重感染的分布情況比較 3 187份陽性標本中，<30歲組共有555份，30～45歲組共有1 526份，>45歲組共有1 106份，3個年齡段均以單一感染多見，各個年齡段間單一感染比較，差異無統計學意義(P >0.05),各個年齡段間多重感染比較，差異無統計學意義(P>0.05)。見表3。

表3 不同年齡段HPV單一感染和多重感染的檢出情況比較[n(%)]

3 討 論

近年來，宮頸疾病的發病率越來越高，且發病人群也越來越年輕化。如果沒有及時發現宮頸異常，很可能會造成治療時機的延誤。尤其是在宮頸癌疾病的早期，大多數患者臨床癥狀表現不明顯，給臨床診斷帶來困難[5]。宮頸癌的進展與多種因素相關，其中最主要的誘因為 HPV 感染[6]。因此，有效的篩查女性HPV感染分型檢測及恰當的干預，對降低宮頸癌的發病率和病死率至關重要。

根據與宮頸良惡性腫瘤發生的相關性，HPV感染可分為低危型和高危型，前者常導致低度鱗狀上皮內病變及良性生殖器疣，后者能導致高度鱗狀上皮內病變及宮頸癌。本研究結果顯示，張家港地區女性主要感染的HPV高危亞型是HPV52、HPV58、HPV16、HPV53，在陽性標本中所占比例分別為16.35%、11.48%、11.48%、10.45%，這與歐陽敏秀等[7]報道的珠海市女性HPV感染的主要高危亞型為HPV52、HPV16、HPV53基本一致，以及與楊怡艷等[8]報道的廣西梧州女性HPV感染的主要高危亞型結果相似。

此外，本研究顯示，張家港地區14 242份標本中HPV陽性率為總22.38%(3 187/14 242),且HPV感染以單一感染為主，其構成比為71.16%(2 268/3 187)。不同年齡段HPV單一感染和多重感染的檢出情況比較發現，感染人數最多的年齡段集中于30～45歲，其次為>45歲以上。主要原因有可能為30～45歲女性處于性生活活躍期，而45歲之后，由于女性開始進入絕經期，陰道微生態變化及自身免疫力開始降低，從而導致HPV感染[9]。因此，應該重視和倡導不同年齡段女性及時進行HPV基因感染篩查工作，做到早發現早治療。

HPV感染分型分布情況具有一定的地區差異性，開展HPV感染27種分型檢測及感染情況分析有助于發現本地區HPV感染的主要型別，為臨床治療提供有力依據，同時也將會對我國宮頸癌疫苗的研發具有指導性意義。