改良涂片法復核血小板計數減少

關麗君

遼寧省沈陽市婦嬰醫院檢驗科，遼寧沈陽 110011

血小板是血液有形成分之一，是出血后止凝血的重要參與者，因此，快速而準確地判定血小板減少可為臨床診治血小板減少相關疾病提供有利幫助。目前，臨床上計數血小板的方法主要有血小板電阻抗法(PLT-I)、血小板光學法(PLT-O)、血小板熒光法(PLT-F)及顯微鏡法(PLT-M)[1]。前3種都屬于儀器法，具有重復性好、檢測速度快、精密度高等優點，但是當儀器檢測血小板出現異常血小板的情況時，各計數方法間差異較大，仍需使用PLT-M進行復核，因此，PLT-M是世界衛生組織推薦的具有較高精確度的血小板計數“金標準”[2-3]。但傳統的PLT-M操作步驟相對繁瑣，影響因素較多，對于血小板計數極低的危急重癥患者結果回報耗時較長。因此，為更有效地爭取臨床診治時間，筆者在此基礎上建立改良涂片法進行復核血小板減少的標本。

1 資料與方法

1.1一般資料 收集本院2015年3-12月門診及住院患者血常規結果血小板<100×109/L的94份標本，所得血小板計數為A組。其中男4例，女90例，年齡2 d至80歲；主要集中于22～36歲，以孕產婦為主(72例)。

1.2儀器與試劑 邁瑞BC-6800全自動血液細胞分析儀及原裝配套試劑，儀器按要求維護保養、校準、質控、參與室間質評確保儀器穩定可靠，OLINPUS CX31顯微鏡，改良Neubauer計數板，珠海貝鎖生物技術有限公司提供劉氏染色液A液、B液，血小板計數稀釋液等。

1.3方法

1.3.1傳統目視計數法計數 根據《臨床檢驗基礎》復檢規則要求，對儀器檢測血小板<100×109/L的94份標本即時進行傳統目視計數法計數[4-5]，所得相應血小板計數為B組。

1.3.2改良涂片法計數

1.3.2.1改良血涂片制備和染色 將儀器檢測血小板<100×109/L的94份血常規標本即時制備成血涂片[6]，制備過程需注意將血滴0.05 mL調整為10 μL，推片角度要依據血細胞比容(HCT)做相應調整，即HCT越大推片角度應越小，按照劉氏染液操作說明進行劉氏染液染色，以備鏡檢。

1.4統計學處理 利用SPSS21.0統計軟件進行統計學分析。非正態分布的計量數據以M(P25，P75)表示，組間比較采用秩和檢驗。P<0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1篩選標本 94份血細胞分析儀檢測結果顯示，血小板<100×109/L的標本經手工復核發現，其中6例為假性血小板減少(其中5例為血小板聚集，1例為巨大血小板，經采集末梢血預稀釋模式下檢測及顯微鏡復核后血小板均在正常范圍)，余88例為真性血小板減少。

2.2秩和檢驗分析 88份真性血小板減少標本采用上述3種方法計數血小板，A組為83.500(61.500×109/L，91.750×109/L);B組為84.000×109/L(67.250×109/L，92.000×109/L)；C組為83.000×109/L(66.250×109/L，92.000×109/L)。A、B、C 3組結果比較，差異無統計學意義(P>0.05)。

3 討 論

血小板減少包括假性減少和真性減少，血小板假性減少主要由于穿刺不順、輸入血液制品、乙二胺四乙酸依賴、脂血及藥物的影響等[8]；血小板真性減少主要由于如惡性血液系統疾病、自身免疫性疾病、感染、藥物、妊娠晚期等原因導致的生成減少、消耗或破壞增加、血液稀釋等[9-10]。作為婦產專科醫院的醫生，筆者比較關注妊娠期血小板減少，妊娠期血小板減少是常見的僅次于妊娠期貧血的血象異常合并癥[11-12]。引起妊娠期血小板減少的病因很多，無論哪種病因都提示，可能發生妊娠期女性血栓栓塞、產科出血、內臟出血，新生兒早產、凝血異常等不良母嬰結局[11,13-14]，因此，為臨床提供快速而準確的血小板計數結果，是檢驗科醫生不可推卸的重要職責。

目前，隨著檢測技術的不斷進步，血小板計數方法多種多樣[1]，其復核方法亦層出不窮。眾多研究顯示，PLT-O、PLT-F可對PLT-I檢測出的血小板減少標本進行復核[15-17]，其中PLT-O已被廣泛用于復核PLT-I檢測異常結果[18]；此外，還有自動血細胞形態分析系統復核法[19]，但是儀器復核方法成本都相對較高，且對于血小板聚集的標本，仍需采用人工鏡檢法進行確認[15-16]。有研究顯示，脂肪乳注射液(C14-24)輸注后的標本經PLT-I提示低值后用PLT-O復核，結果顯示正常，其原因在于脂肪乳顆粒在體內分解代謝成血小板體積的大小，經核酸熒光染料染色后會呈現與血小板類似的熒光強度，易被儀器誤認成血小板而進行計數[20]。因此，儀器復核法不僅費用高，且對血小板聚集和脂肪乳干擾等特殊情況的標本仍需結合手工復核方法進行確認。手工復核方法除了傳統的目視計數法外，現有高倍鏡估測法[21]、血小板與紅細胞/白細胞比值法[22-23]、R值估測法[24]。傳統的目視計數法為手工復核的“金標準”，但是操作步驟繁瑣，耗時較長，整個復核過程在15～20 min，并且對于疑似血小板聚集的標本仍需涂片觀察確認；其余幾種方法都未被廣泛應用于臨床，可能仍存在一些問題有待解決。為此，本研究針對血小板減少標本，結合眾多手工復核方法建立改良涂片法進行復核，結果顯示，改良涂片法可成功復核血小板減少標本，計數結果與傳統目視計數法比較差異無統計學意義(P>0.05)。該方法從制備血涂片到鏡檢結束耗時約5 min，并且鏡檢的同時可觀察是否有血小板聚集、巨大血小板、紅細胞碎片等干擾因素存在。改良涂片法可大大彌補傳統復核方法的不足，能夠提升回報血小板復核結果的速度，為危急重癥患者的搶救爭取時間。但是用此方法復核時應注意：(1)復核人員要具備快速制備血涂片的能力及扎實的形態學基礎；(2)要結合HCT調整推片的角度；(3)計數視野下紅細胞應均勻分布且不重疊，計數的視野數應≥10個；(4)由于是主觀判斷，人員間差異可能相對較大，因此實驗室要定期進行人員間比對等。

綜上所述，任何一種血小板復核方法都不存在絕對的優勢，本研究有效地將傳統手工復核方法與血涂片復核方法的結合，成功地建立改良涂片法復核血小板減少標本，在提高準確回報血小板結果速度的同時節約了檢測成本，為臨床及時診治血小板減少及相關疾病提供了可靠有利的依據，為檢驗科工作提供了便利。作為婦產特色專科醫院，及時準確地回報血小板結果，對血小板減少的母嬰來說有可能是改善不良結局的重要前提之一。本研究的不足在于納入標本數量相對較少，有待于擴大標本量做進一步驗證。