減少人乳頭瘤病毒實驗復查率研究

羅金秀,劉冬霞,胡新年,歐陽慧

廣東省清遠市婦幼保健院優生與遺傳實驗診斷中心,廣東清遠 511500

人乳頭瘤病毒(HPV)是一種DNA病毒，高危型HPV感染者如果持續感染，有可能會轉變為宮頸癌。本實驗室HPV檢測陽性率約為17.70%，其中存在一定的復查率，HPV檢測復查降低了實驗室工作效率，浪費人力、物力、財力，也導致患者治療延誤和承受重新檢測的痛苦。本研究旨在降低HPV檢測復查率，提高實驗室工作效率和質量，降低檢測成本，讓患者能夠準確及時地了解自身健康狀況，做到早發現早治療。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2018年7月9-20日來廣東省清遠市婦幼保健院進行HPV檢測的229例女性宮頸標本和2018年10月30日至11月17日的250例女性宮頸標本，年齡23～55歲。第一階段研究時間段較短，是因為復查率太高，本實驗室及時查找原因，并很快找到了原因并采取相應措施；第二階段研究時間較長是為了更好地觀察改進措施的成效。為了減少兩個研究時段氣溫差異對檢測結果的影響，所有研究對象均在同溫度空調房取材，在恒溫PCR實驗室操作。

1.2儀器與試劑 潮州凱普生物有限公司生產的人乳頭瘤病毒21分型檢測試劑盒、HBNP-4801A自動DNA提取儀和HBHM-3000s自動雜交儀；美國ABI公司生產的Real-time PCR system擴增儀。

1.3方法 對2018年7月9-20日來廣東省清遠市婦幼保健院進行HPV檢測的229例女性宮頸標本，采用反向點雜交方法檢測HPV-DNA并分型，對需要復查的兩大原因繪制柏拉圖進行分析，列出復查原因匯總表，針對各復查原因制訂相應對策，經過兩個多月的整改后，統計2018年10月30日至11月17日進行HPV檢測的250例女性宮頸標本的復查率，對兩階段需要復查情況列出比較表，繪制柏拉圖。

1.4統計學處理 采用SPSS17.0統計軟件進行數據處理及統計分析，計數資料以頻數或百分比表示，P<0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1HPV檢測復查原因匯總 2018年7月9-20日229例進行HPV檢測的女性需要復查的有55例，復查原因包括6個，見表1。

表1 HPV檢測復查原因匯總表(%)

2.2出現非特異點原因 出現非特異點原因有6個，見表2。

表2 出現非特異點原因匯總表(%)

2.3相鄰位點間多次出現相同陽性位點原因 相鄰位點間多次出現相同陽性位點原因有4個，見表3。

表3 相鄰位點間多次出現相同陽性原因匯總表(%)

2.4兩時段需要復查情況比較 經過對2018年7月9-20日需要復查的55例女性進行原因分析并采取應對措施后，2018年10月30日至11月17日復查率由24.02%降至6.80%，兩時間段需要復查率比較差異有統計學意義(χ2=129.05，P<0.01)，見表4。

表4 兩時段需要復查情況比較(n)

3 討 論

HPV感染率在我國女性中為16.8%，有70%～80%的女性一生中至少感染過一次HPV，大部分的HPV感染都是暫時性的，會在一定時間內自行消退，一般在2年內HPV會被人體的免疫系統清除掉，感染的平均持續時間為8～12個月[1-2]，年齡越大病毒清除時間越長[3]，其中HPV16是我國女性HPV感染最普遍的型別，感染率與宮頸病變呈正相關[4]。通過檢測HPV16的A4家族基因，可以預測HPV16陽性的女性患宮頸癌的風險，從而確定高危人群，給宮頸癌的預防工作提供幫助[5]。

我國宮頸癌發病率在全球女性惡性腫瘤的發病率中已高居第2位[6],且呈上升趨勢，并且存在地域差異，這種差異與HPV感染和篩查的普及性有關，但隨著社會的進步和時間的推移，這種地域差異將會逐步縮小[7-8]。HPV分子生物學檢測方法是宮頸病變的篩查方法之一，篩查對于惡性腫瘤的防治具有重要意義，可以認為是防治的第一步[9],目前發現的HPV型別已有200余種[10],HPV-DNA病毒載量檢測可以作為預測宮頸病變的常規檢查手段和病情追蹤及治療后隨診等工作的預測手段，對于預防宮頸高度病變具有重要價值[11]。對于 25 歲以上的女性，高危型人乳頭瘤病毒(HR-HPV)檢測為初篩方案[12]，但HPV-DNA檢測中存在一定的復查率，有些是無法避免的。本研究為了盡可能減少HPV檢測的復查率，找出了多方面的原因，針對各種原因采取相應應對對策，取得了良好效果。從本研究可知，出現非特異點和相鄰位點間多次出現相同陽性位點是需要復查的兩大重要原因。針對出現非特異點的原因，本實驗室采取了以下措施。(1)儀器清洗不徹底:對儀器各部件實時清洗消毒，對儀器器材用次氯酸鈉進行浸泡、實驗后5 min之內用去離子水至少沖洗6次、用酒精進行浸泡，用潔凈紙對儀器進行全方位擦拭；對重復使用的儀器設備用特定刷子進行刷洗，向凱普總公司要求派遣工程師進行質量監督。(2)操作細節不注意：每次實驗時進行陰性質控，將須注意的細節整理成手冊進行提醒，采取移位加樣，制作操作流程圖，每一步進行雙人操作制度。針對相鄰位點間多次出現相同陽性的不同原因，本實驗室采取了以下措施。(1)實驗人員操作不熟練：定期進行卷面考試、HPV操作培訓，請凱普試劑公司人員進行儀器原理和解決簡單問題的培訓，定期進行實驗心得和經驗的交流。(2)氣溶膠污染：每次實驗前后對生物安全柜紫外消毒0.5 h，每晚實驗室固定消毒1 h，雜交儀試驗后紫外消毒1 h。(3)移液槍污染：對移液槍使用人員進行嚴格培訓，配備實驗室專用移液槍，使用后及時消毒。(4)實驗槽壓片不緊：請工程師對雜交儀進行調試。對于無法避免的影響因素，可采取HR-HPV與液基薄層細胞試驗(TCT)聯合檢測提高宮頸癌及癌前病變診斷的準確性，TCT檢測中對于病理形態學診斷的不足可由HR-HPV檢查來彌補，而TCT可補充HR-HPV在細胞形態和治療方案上的認知與選擇，二者具有相互補充和完善的作用[13]。

綜上所述，為了減少HPV檢測的復查率，必須針對各影響因素采取相應對策，這樣才能做到對疾病早發現早治療，滿足患者和臨床的需要。