細菌性食物中毒實驗室檢測的研究分析

蘇小蕓，張春蕾

1.山東省青島市黃島區疾病預防控制中心質管科，山東青島 266000；2.山東省青島市黃島區疾病預防控制中心檢驗科，山東青島 266000

細菌性食物中毒屬于食物中毒的一種，多發生在夏季和秋季，在濕度和溫度比較高的環境中也極易發生細菌性食物中毒，我國在近幾年關于細菌性食物中毒的報道有很多。對于細菌性食物中毒來說，致病菌主要包括變形桿菌、副溶血性弧菌、腸桿菌屬、克雷伯菌屬、沙雷菌屬等，早期的診斷和治療十分關鍵，如果患者的病情較重，會引發多種并發癥，嚴重威脅患者的生命健康[1]。在檢測細菌性食物中毒致病菌時常需要進行實驗室檢測，實驗室檢測能夠明確致病菌的種類，保證檢測結果的準確性，讓醫生對癥治療，提升患者的生活質量，該次研究采取實驗室檢測的方法在2017年11月—2018年11月對80份細菌性食物中毒標本進行檢測，報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

該次研究的主體是疾病預防控制中心收到的80份細菌性食物中毒標本。可疑食物、肛拭子及廚房用具涂抹樣分別為28、30、22份。

1.2 方法

利用細菌鑒定卡和全自動細菌鑒定儀鑒定并檢測標本中的各種細菌，包括變形桿菌、副溶血性弧菌、金色葡萄球菌、蠟樣芽孢桿菌、沙門菌和致瀉性大腸埃希菌等。將標本放置于對應的選擇性平板中增殖，之后分離到不同的平板上，按照菌落的特點開展血清凝集鑒定與生化試驗等一系列檢測活動。

該次試驗中使用到的儀器主要有冰箱、電子天平、顯微鏡、保溫箱、檢測試劑盒、革蘭陰性細菌生化板、HE平板、MMA平板、兔血漿平板等。該次試驗中使用到的試劑主要有濃度是3%的H2O2溶液，動力硝酸鹽培養基、乳糖膽鹽發酵管、肉湯培養基和緩沖葡萄糖蛋白胨水等[2]。

在該次試驗中，一切檢查嚴格施行質量控制。

1.3 觀察指標

對該次研究檢測的結果及不同標本中致病菌的檢出率進行比較。

1.4 統計方法

使用SPSS 23.0統計學軟件分析該次研究中的各項臨床數據，計數資料應用[n（%）]表示，使用χ2值進行檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 致病菌檢出分布的結果

在80份樣本中，共檢測出致病菌170株，其中變形桿菌和副溶血性弧菌的檢出率遠遠大于金色葡萄球菌、蠟樣芽孢桿菌、沙門菌和致瀉性大腸埃希菌的檢出率，差異有統計學意義（P＜0.05），見表1。

表1 檢出致病菌種類分布的結果

2.2 不同標本中致病菌檢出率比較

肛拭子標本中的致病菌檢出率比可疑食物中致病菌及廚房涂抹樣中的致病菌檢出率更高，差異有統計學意義（P＜0.05），見表2。

表2 不同標本中致病菌檢出率比較

3 討論

食物中毒的病因調查是一項比較復雜的工作，影響因素非常多，包括運輸、加工、生產、儲存等眾多環節，每個環節都有可能引發食物中毒，人在食用帶有致病菌的食物后，會出現食物中毒反應。實驗室檢測能夠檢測出致病菌的類型，醫生可以根據檢測結果為患者提供針對性的治療，有效控制患者病情的發展，避免二次中毒事件的發生。通過實驗室檢測，還可以讓工作人員總結不同致病菌的中毒體征，研制高效的治療藥物。在實驗室檢測工作中，對儀器和試劑的選擇非常嚴格，為了確保檢測結果的準確性，需要采取廣泛取樣的方式，保證檢測結果的可信度。

3.1 細菌性食物中毒檢測結果分析

細菌性食物中毒在全年都有發生的可能，是一種發生率比較高的食物中毒類型，掌握細菌性食物中毒致病菌的分布特點有利于此類型食物中毒的預防。在夏季、秋季或濕度與溫度比較高的環境下，食物中以變形桿菌為首的致病菌會快速的增殖。在我國，人們主要食用米飯和面食，這兩種食物如果長時間放置，變形桿菌和其他致病菌的數量會明顯增多。食用保存時間過長的米飯或面食時，如果加熱不徹底，很容易引發變形桿菌性的食物中毒。副溶血性弧菌這種致病菌大多出現在海產品中，如果人們食用沒有煮熟的海產品，容易令人們出現副溶血性弧菌中毒現象。

在我國，食物中毒大多集中在夏季和秋季，體現出比較明顯的季節性，第3季度是食物中毒的高峰期，這是由于7、8、9月份的氣溫比較高，適宜微生物的生長和繁殖，在這樣的環境下，無論是食品還是食品原料都容易出現變質的問題；部分食品生產的經營單位沒有嚴格地按照衛生要求運輸、保存、加工或銷售食品，極易引發細菌性食物中毒事件[3]。

在進行食物中毒檢測時，通常會比較關注那些常見致病菌的檢測，對易引發食物中毒的細菌重視程度不足，除了那些對人體致病的致病菌以外，還包括一些條件致病菌，包括腸桿菌屬、克雷伯菌屬、沙雷菌屬等，這些致病菌廣泛存在于自然界中的土壤和水中，是人與動物以及呼吸道的長居菌。這幾年，條件致病菌導致的食物中毒也時有發生，但是因為這些致病菌引起的臨床反應比較輕微，檢測致病菌時常常會忽視這些致病菌[4]。為保證致病菌檢測的效果，還需要考慮條件致病菌因素。如果留樣的食品、肛拭子和環節樣本中同時發現某類優勢菌，需要加強對這種細菌的鑒定，以免漏診。

在細菌性中毒檢測中，有時會遇到原因不明的細菌性食物中毒情況，導致這一情況發生的原因有很多，比方說食品經營單位不配合調查取樣工作、采樣期間患者應用抗生素或拒絕采樣、食物中毒的緩報和遲報……還有可能是留樣流于形式或留樣的制度不完善，取樣無法反映整個過程，缺乏環節導致的污染，且保存的方法不科學，通常為冷凍保存，此種保存環境不利于致病菌的生存[5]。除此之外，還有可能是樣品的采集或檢驗技術等因素導致的檢測結果不佳。

該次試驗的結果表明，肛拭子標本的致病菌檢出率是53.33%，可疑食物標本的致病菌檢出率是10.71%，廚房用具涂抹樣的致病菌的檢出率是27.27%，明顯肛拭子的致病菌檢出率更高（P＜0.05）。肛拭子屬于直接采集患者的標本，能夠較為確切地反映患者的致病菌感染情況，此種采樣的方式比較簡單，能夠隨時采樣，而可疑食物和廚房用具涂抹樣標本受外界因素的影響較大，增菌期間應用的增菌液會引起雜菌的大量繁殖，進而影響致病菌檢測的準確率[6]。在細菌性食物中毒的檢測中，變形桿菌和副溶血性弧菌的占比較高，而且采用肛拭子檢測的方式檢出效果更理想，在今后的細菌性食物中毒檢測中需要充分掌握細菌性食物中毒致病菌的分布特點，科學地采集標本，采用正確的檢測技術和手段，加強質量監控，保證致病菌的檢測效果，為患者的病情診斷提供可靠依據[7]。

3.2 細菌性食物中毒的實驗室應急監測

①樣本的細菌培養。在采集完樣本之后，可以隨機開展分離及增菌培養工作，直接分離能夠檢測出樣本當中的優勢菌，節省檢測的時間，但是此種方法容易漏檢[8]。增菌可以檢出樣本中菌量比較小的致病菌，可以使用增菌液提升致病菌的檢出率。若留樣的食品比較少且需要進行多項檢測，工作人員可以先使用營養肉湯增菌，之后利用培養基增菌，此種檢測的方法不足之處是檢測的時間比較久[9]。

②實驗室的檢測流程和方法。對樣品行增菌處理后，可以采取兩種方法檢驗，一種是按照以往的方法展開培養鑒定，另一種方法是使用PCR或快檢試劑開展檢測工作[10]。把熒光PCR用于致病菌的初步篩查，此種方法方便、快捷、靈敏度高，可以基本明確細菌性食物中毒的類型，具有良好的應用效果[11]。

③實驗室檢測時的注意事項。快速檢測方法得出的結果僅供參考，如果使用PCR檢測出致病菌，但是經細菌培養檢測沒有檢測出活菌，不可以報結果[12]。針對那些條件致病菌，一方面需要定性，另一方面還需要定量，比方說變形桿菌的計數要＞106 cfu/g，蠟樣芽孢桿菌的計數要＞105 cfu/g。若沙門氏菌的血清試驗與生化反應結果不一致，需要以生化反應結果為準[13]。

④加強對實驗室培養基的質量控制。為滿足應急檢測的需求，實驗室需常備那些常見食物中毒檢測會使用到的培養基，在使用時應檢查培養基的使用有效期，以免影響檢測的結果，同時在使用培養基時還需要按照相應的質量標準規范使用[14]。

3.3 提高細菌性食物中毒檢測效率的方法

3.3.1 加強專業知識的培訓和學習，應用高效檢測措施實驗室檢測人員應當積極學習相關的專業知識與技能，在拿到樣品后，先按照流行病學的調查結果分析是否為細菌性食物中毒[15]。按照潛伏期的不同、患者的癥狀表現、中毒食品種類，初步判斷導致細菌性食物中毒的致病菌種類[16]。將樣本放置于血平板、TCBS、EMB、SS平板中，將溫度控制為36℃，培養24 h，然后觀察菌落的形態，與此同時，把剩余的食物與肛拭子利用GN增菌液、SC增菌液、營養肉湯、氯化鈉結晶紫增菌液或其他培養基中進行增菌，增菌后劃線到瓊脂平板中，將溫度控制為36℃，培養24 h并觀察菌落的形態[17]。針對可疑菌落，使用ID32E腸道桿菌的生化檢定試條開展檢測工作[18]。

3.3.2 做好實驗前與實驗環節的質量控制工作 強化實驗室的質量管控，提升食源性致病菌的檢出率，以此來保證實驗檢測結果的準確性。需要確保試驗中培養基、血清以及應用試劑的質量，檢查這些物品的保質期，必須在有效期內使用，與此同時，定期利用標準菌株測定其特異性與敏感性。每天檢測培養箱的溫度，檢查是否滿足實驗規定的溫度要求[19]。在采集完標本之后妥善保存，立即送往實驗室供實驗檢測[20]。

4 結語

綜上所述，在細菌性食物中毒中，致病菌大部分是變形桿菌和副溶血性弧菌，其他致病菌的占比較少，采用肛拭子檢測的檢出率高于廚房涂抹樣標本和可疑食物標本的檢出率。為保證細菌性食物中毒的檢出率，可以先按照流行病學分析最有可能是哪種病菌，之后行細菌培養，采取肛拭子的檢測方式，準確判斷細菌性食物中毒的致病菌。在檢測期間需要加強質量監管，以免影響檢測結果的準確度，通過有效的細菌性食物中毒檢測方法為臨床診斷和治療提供可靠依據。