云浮地區小細胞低色素性貧血兒童的病因分析

溫日葵 江炎章

貧血是由多種原因引起外周血的血紅蛋白(Hb)濃度、紅細胞計數和血細胞壓積(HCT)低于正常人參考值下限的一種癥狀；一般可分為正常細胞性貧血、小細胞低色素性貧血和大細胞性貧血。貧血在兒童期是常見病,可使兒童生長發育減慢甚至智力低下［1］。小細胞低色素性貧血是因為Hb、平均紅細胞體積(MCV)、平均紅細胞血紅蛋白含量(MCH)以及平均紅細胞血紅蛋白濃度(MCHC)四項檢測結果同時下降的一種疾病,其中分別以缺鐵性貧血(IDA)和地中海貧血最為常見［2］。缺鐵性貧血是由于體內缺乏鐵元素或者是體內鐵元素的利用障礙,從而導致人體內Hb 的生成不足而出現的貧血,根據相關研究提示［3］,我國兒童是缺鐵性貧血的高發人群,因為兒童處于生長發育期,體內的新陳代謝快,在成長過程中所需的營養物質包括鐵元素較成人的要多,所以缺鐵性貧血在我國也是重要防治疾病之一。地中海貧血是一種遺傳性疾病。其因是合成血紅蛋白的珠蛋白鏈減少或缺失導致血紅蛋白結構異常而導致的貧血［4］。為了解本地區小細胞低色素性貧血兒童的主要病因,為臨床診斷和治療提供科學準確的依據,作者選取2019 年1 月～2020 年10 月期間在本院進行體檢的小細胞低色素性貧血兒童進行地中海貧血基因和鐵蛋白聯合檢測,對檢測結果分析如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2019 年1 月～2020 年10 月期間60例在本院進行體檢診斷為小細胞低色素性貧血患兒,小細胞低色素癥的臨床診斷標準［5］：血常規檢測平均紅細胞體積<80 fl,平均紅細胞血紅蛋白含量<26 pg,平均紅細胞血紅蛋白濃度<320 g/L。

1.2 儀器 抽EDTA 抗凝血3 ml,采用血常規分析儀DxH800 檢測血常規；于干燥管抽3 ml 靜脈血,采用羅氏電化學發光免疫分析儀E411 檢測鐵蛋白；抽枸椽酸鹽抗凝血3 ml,采用分子雜交儀檢測地中海貧血基因標本。

1.4 檢測原理

1.4.1 鐵蛋白 電化學發光雙抗體夾心法。

1.4.2 地中海貧血基因 PCR-反向點雜交法。根據α 鏈珠蛋白基因(α2和α1)突變區域序列特點,在序列保守區設計3 對高度特異的引物且5′端用生物素進行標記,用于檢測3 種缺失型α-地中海貧血基因突變(-SEA、-α3.7 和-α4.2)；根據α 鏈珠蛋白基因(α2)突變區域序列特點,在序列保守區設計1 對高度特異的引物且5′端用生物素進行標記用于檢測3 種非缺失型α-地中海貧血基因突變(αCSα、αQSα 和αWSα)；根據β 鏈珠蛋白基因基因突變區域序列特點,在序列保守區設計2 對高度特異的引物且5′端用生物素進行標記,用于檢測17 種β-地中海貧血基因突變(41-42M、-28M、654M、71-72M、17M、βEM、IVS-I-1M、IVS-I-5M、27/28M、43M、-29M、-30M、31M、-32M、14-15M、IntM 和CAPM)。根據檢測位點堿基差異,按照堿基互補配對原則,設計特異性識別某種基因型的寡核苷酸探針組合,分別固定在尼龍膜的特定位置上,制成檢測膜條。聚合酶鏈式反應(PCR)擴增產物與探針通過分子雜交反應及顯色反應,觀察檢測膜條上各位點信號的有無(信號為藍色斑點),判斷該探針是否與PCR 產物雜交,從而確定待檢樣品基因型。

1.5 觀察指標 分析小細胞低色素性貧血患兒病因以及小細胞低色素性地中海貧血患兒基因型。

2 結果

2.1 60 例小細胞低色素性貧血患兒病因分析 60 例小細胞低色素性貧血患兒單純地中海貧血有35 例,陽性率為58.3%,單純缺鐵性貧血有12 例,陽性率為20.0%,地中海貧血合并缺鐵性貧血有9 例,陽性率為15.0%,其他類型有4 例,陽性率為6.7%。見表1。

表1 60 例小細胞低色素性貧血患兒病因分析(n,%)

2.2 44 例小細胞低色素性地中海貧血患兒基因型分析 44 例小細胞低色素性地中海貧血患兒(單純地中海貧血35 例,地中海貧血合并缺鐵性貧血9 例),其中主要基因型：α-地中海貧血有32 例,主要基因型為αα/--SEA,有26 例(59.1%)；β-地中海貧血有12 例,主要基因型為41-42M/N,有5 例(11.4%)。見表2。

表2 44 例小細胞低色素性地中海貧血患兒基因型分析(n,%)

3 討論

缺鐵性貧血和地中海貧血的血常規結果常常相似,兩者都為小細胞低色素貧血,且臨床上患兒較為多見。地中海貧血又名海洋性貧血,因為最初發患者多為地中海沿岸民族的原因。本病是因為遺傳的珠蛋白基因缺失,使血紅蛋白中一種或一種以上珠蛋白鏈合成缺如或不足所導致的貧血。臨床上常見分為α-地中海貧血和β-地中海貧血,其中α-地中海貧血可分為輕型α-地中海貧血：又包括靜止型和標準型,靜止型僅有輕度α 鏈合成減少,α/β 鏈合成比約為0.9,一般無臨床癥狀；標準型有輕度貧血或紅細胞形態異常,α/β 鏈合成比約為0.6。中間型α-地中海貧血又稱為血紅蛋白H 病,因為缺失3 個α 基因,臨床上表現為輕度或中度貧血,伴有肝脾腫大、黃疸。重型α-地貧又稱為胎兒水腫綜合征,因為缺失4 個α 基因,無α 鏈合成,胎兒容易造成死胎或流產。β-地貧也可分輕型β 地貧,β 鏈與α 鏈比率為0.5,一般其他臨床無臨床癥狀和貧血；重型β 地貧的β 與α 兩鏈比率為0～0.3,一般有貧血、黃疸、肝脾腫大等臨床癥狀,患兒易發生感染和出血,常常會合并發生心肌炎、膽結石、下肢潰瘍性損害,容易夭折；中間型β 地貧嚴重程度介于輕型和重型之間［6-8］。地貧是人類單基因遺傳病發病率最高的其中一種,夫妻雙方如果都是輕型地中海貧血患者,都可能生出中型或重型的地中海貧血患兒［9］。根據相關研究所示,我國α 地中海貧血者的基因型普遍以--SEA、-α3.7 和-α4.2 位點缺失多見［10］。孕婦如果懷有重型地貧胎兒,很可能會發生胎兒死于宮內,或早產或流產［8］,重型地中海貧血患兒需終生輸血,中間型地貧患者多無勞動力或勞動力下降［11］,所以減少中、重型地中海貧血患兒的出生會減輕家庭的不少負擔。

缺鐵性貧血是體內一種慢性漸進性缺鐵的發展結果。缺鐵性貧血早期一般為正常細胞性貧血,表現為輕度貧血,隨著病程的進展,體內貯存鐵慢慢消耗殆盡,紅細胞和血紅蛋白會進一步下降,出現明顯的小細胞低色素性貧血,呈典型的缺鐵性貧血［12］。缺鐵性貧血臨床癥狀表現為部分患者可出現異食癖,患兒會出現生長發育遲緩、易激動、注意力不集中、智力低下［13］,指甲缺乏光澤、脆薄、易裂,出現口腔炎和舌炎,還有少部分患者會有輕度的脾腫大。從上述的缺鐵性貧血癥狀和危害可知,缺鐵性貧血的防治在兒童中也不容輕視。

本研究顯示,本地區小細胞低色素性貧血兒童其中單純地中海貧血基因攜帶率為58.0%,以α 地中海貧血為主,其中以αα/--SEA 基因型為主；單純缺鐵性貧血占20%,地中海貧血合并缺鐵性貧血占15.0%,可見缺鐵性貧血的兒童比例也不低。地中海貧血在我國廣東(地中海貧血陽性率11.07%)、廣西、四川多見［14］,且云浮處于廣東省經濟欠發達地區,有很大部分人們的生活質量和意識不高,兒童期的小細胞低色素性貧血情況不被重視,會對兒童的成長造成不可逆的傷害,因此營養性貧血如缺鐵性貧血等也不容忽視［15］。地中海貧血患者體內紅細胞的生存期比正常人紅細胞要短,在患者體內呈慢性溶血狀態,地貧患者體內鐵元素含量是超標的,需要進行排鐵的治療,以前的舊觀點認為,體查地中海貧血基因確診是地中海貧血患者后,一般都不做鐵蛋白的檢查,認為該患者不會缺鐵的。其實結果不然,因為很多兒童生長快,所需的營養物質多,還因為有不少兒童會偏食,營養不均衡,同樣會導致缺鐵的。

綜上所述,小細胞低色素性貧血會對患兒的生長發育和生活學習造成這么多的危害,通過地中海貧血基因和鐵蛋白的同時檢測,幫助臨床找出小細胞低色素性貧血兒童的正確病因,對癥治療,讓祖國的花朵有一個健康快樂的童年。