經典名方當歸四逆湯指紋圖譜及功效關聯物質預測分析

許金國，夏金鑫，梅 茜，趙曉莉，張科衛，毛 靖，高紅寧，李 鵬，毛春芹*，陸兔林*

1.南京中醫藥大學藥學院，江蘇 南京 210023

2.南京海陵中藥制藥工藝技術研究有限公司，江蘇 南京 210023

經典名方來源于古代醫療記載，是歷代醫藥學家的經驗總結，是我國醫學寶庫的重要組成部分。為了推動經典名方的開發研究，國家藥品監督管理局于2019年3月發布了《古代經典名方中藥復方制劑及其物質基準的申報資料要求（征求意見稿）》（以下簡稱《申報資料要求》）[1]，加強對經典名方的質量管理。

當歸四逆湯（Danggui Sini Decoction，DSD）出自東漢張仲景《傷寒論》[2]，原方由當歸、桂枝、白芍、細辛、甘草、木通、大棗7 味藥組成，具有溫經散寒、養血通脈等功效，主治血虛寒厥證。現代臨床主要用于治療痛經、糖尿病周圍神經病變、類風濕性關節炎等疾病[3-6]。DSD 的相關研究主要集中于臨床應用方面，對質量控制方面的研究相對較少。本課題按照《申報資料要求》對經典名方DSD進行指紋圖譜研究，并借助網絡藥理學構建DSD“成分-靶點-通路”網絡，綜合預測分析其潛在的功效關聯物質。為全面控制和評價經典名方DSD 的質量提供依據，為經典名方復方制劑的質量控制提供參考。

1 儀器與材料

1.1 儀器

Waters e 2695 型高效液相色譜儀，包括四元泵、柱溫箱、自動進樣器、PDA 檢測器和Empower 工作站，美國Waters 公司；ZYX0071 型超純水系統，南京漢隆實驗器材有限公司；MS-105DU 型十萬分之一電子分析天平，瑞士梅特勒-托利多公司；MG- H21S011 多功能電陶爐，廣東美的生活電器制造有限公司；TD5001C 型電子天平，天津天馬衡基儀器有限公司；H1650-W 型臺式高速離心機，湖南湘儀實驗室儀器開發有限公司；KQ-500B 型超聲波清洗器，昆山市超聲儀器有限公司；砂鍋，江西舒雅陶瓷有限公司。

1.2 試藥

對照品阿魏酸（批號110773-201915，質量分數99.4%）、桂皮醛（批號110710-201217，質量分數99.5%）、肉桂酸（批號110786-201604，質量分數98.8%）、芍藥苷（批號110736-201943，質量分數95.1%）、細辛脂素（批號111889-201705，質量分數100.0%）、甘草苷（批號111610-201908，質量分數95.0%）、甘草酸銨（批號110731-202021，質量分數96.2%），中國食品藥品檢定研究院；對照品藁本內酯，CAS：4431-01-0，質量分數＞98%，南京森貝伽生物科技有限公司；對照品芍藥內酯苷，批號4644，質量分數100%，上海詩丹德標準技術服務有限公司；對照品鄰甲氧基桂皮醛，批號S28D9G711659，質量分數≥98%，上海源葉生物科技有限公司。乙腈，色譜純，默克股份兩合公司；甲醇，色譜純，江蘇漢邦科技有限公司；純凈水，杭州娃哈哈集團有限公司；其他試劑均為分析純。

DSD 由當歸、桂枝、白芍、細辛、甘草、木通和大棗7 味藥組成，均購自于道地產區或主產區，每味藥共收集不少于3 個產地，總批次不少于15批。經南京中醫藥大學藥學院陳建偉教授鑒定分別為傘形科植物當歸Angelica sinensis(Oliv.) Diels.的干燥根、樟科植物肉桂Cinnamomum cassiaPresl.的干燥嫩枝、毛莨科植物芍藥Paeonia lactifloraPall.的干燥根、馬兜鈴科植物北細辛Asarum heterotropoidesFr.Schmidt var.mandshuricum(Maxim.) Kitag.的干燥根和根莖、豆科植物甘草Glycyrrhiza uralensisFisch.的干燥根和根莖、木通科植物三葉木通Akebia trifoliata(Thunb.) Koidz.的干燥藤莖和鼠李科植物棗Ziziphus jujubaMill.的干燥成熟果實。本實驗前期已按照《中國藥典》2020年版項下各味藥的檢測方法和檢測要求對藥材進行檢測，選出優質產地的藥材：當歸（甘肅岷縣）、桂枝（廣東肇慶）、白芍（安徽亳州）、細辛（遼寧新賓）、甘草（甘肅民勤）、三葉木通（陜西西安）、大棗（山東新泰）。按照《中國藥典》2020年版及全國飲片炮制規范項下相關要求將藥材炮制成15 批飲片。經檢測飲片均符合《中國藥典》2020 版項下相關規定。利用Excel 中RANDBETWEEN 函數生成隨機數，將當歸、桂枝、白芍、細辛、木通、炒甘草、大棗7 味飲片的不同批次隨機組合，DSD 批次組合具體信息見表1。

表1 DSD 組合信息Table 1 Combination information of DSD

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱為Waters XBridge C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相為乙腈-0.05%磷酸水溶液；梯度洗脫：0～3 min，5%乙腈；3～10 min，5%～10%乙腈；10～15 min，10%～12%乙腈；15～30 min，12%～14%乙腈；30～35 min，14%～17%乙腈；35～40 min，17%～19%乙腈；40～50 min，19%～25%乙腈；50～75 min，25%～45%乙腈；75～90 min，45%～70%乙腈；90～92 min，70%～95%乙腈；92～95 min，95%～5%乙腈；體積流量1.0 mL/min；檢測波長245 nm；柱溫30 ℃；進樣量20 μL。

2.2 對照品溶液的制備

取各對照品適量，精密稱定，加甲醇配制成含阿魏酸3.34 μg/mL、藁本內酯2.20 μg/mL、肉桂酸2.22 μg/mL、鄰甲氧基桂皮醛2.50 μg/mL、芍藥苷104.20 μg/mL、芍藥內酯苷13.90 μg/mL、細辛脂素3.77 μg/mL、甘草苷17.61 μg/mL、甘草酸34.16 μg/mL 的混合對照品溶液。

2.3 供試品溶液的制備

按照處方比例稱取7 味飲片量：當歸9 g，桂枝9 g，白芍9 g，細辛9 g，炒甘草6 g，木通6 g，大棗24 g。置砂鍋中，加水1600 mL，浸泡45 min，以武火（2200 W）煮沸后，調節火力至1000 W，開蓋，保持微沸并煮至600 mL，趁熱用100 目篩濾過，即得DSD 物質基準對應實物。

取DSD 物質基準對應實物3 mL，置10 mL 量瓶中，加甲醇至刻度，稱定質量，超聲處理（功率500 W，頻率40 kHz）30 min，放冷，用70%甲醇補足減失的質量，搖勻，濾過，取續濾液，即得。

2.4 方法學考察

2.4.1 精密度考察 取DSD 物質基準對應實物1份，按照“2.3”項下方法制備供試品溶液，連續進樣6 次，按“2.1”項下色譜條件進行測定，記錄色譜圖。以18 號峰（甘草酸）為參照峰，計算各個共有峰的相對保留時間和相對峰面積。結果表明各共有峰的相對保留時間RSD 值均小于0.18%，相對峰面積RSD 值均小于3.30%，表明儀器精密度良好。

2.4.2 重復性考察 取DSD 物質基準對應實物1份，按照“2.3”項下方法制備供試品溶液，平行制備6 份，按“2.1”項下色譜條件進行測定，記錄色譜圖。以18 號峰（甘草酸）為參照峰，計算各個共有峰的相對保留時間和相對峰面積。結果表明，各個共有峰的相對保留時間RSD 值均小于0.91%，相對峰面積RSD 值均小于3.82%，表明該方法的重復性良好，可用于DSD 指紋圖譜的檢測。

2.4.3 穩定性考察 取DSD 物質基準對應實物1份，按照“2.3”項下方法制備供試品溶液，分別在0、2、4、8、12、24 h 進樣，按“2.1”項下色譜條件進行測定，記錄色譜圖。以18 號峰（甘草酸）為參照峰，計算各個共有峰的相對保留時間和相對峰面積。結果表明，各個共有峰的相對保留時間RSD值均小于0.90%，相對峰面積RSD 值均小于2.08%，表明供試品溶液在24 h 內穩定。

2.5 DSD 物質基準對應實物指紋圖譜的建立及相似度評價

取23 批DSD 物質基準對應實物供試品溶液與對照品溶液按色譜條件進行測定，記錄色譜圖。通過《中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統》（2012A）軟件，以S1 為參照峰，采用平均數法，進行多點校正和色譜峰匹配，得到23 批DSD 物質基準對應實物指紋圖譜疊加圖、共有模式圖和混合對照品圖，共確認25 個色譜峰，指認9 個色譜峰。結果見圖1、2。與對照指紋圖譜相比，23 批DSD 物質基準對應實物指紋圖譜的相似度均＞0.90，表明DSD 物質基準對應實物的相似度良好，主要物質群差異性小，制備工藝較為科學合理，形成的物質基準對應實物對照圖譜能夠作為衡量DSD 物質基準對應實物的標準參照物，結果見表2。

圖1 23 批DSD 物質基準對應實物HPLC 指紋圖譜疊加圖Fig.1 HPLC fingerprint of 23 batches of DSD substance standard corresponding substance

圖2 DSD 物質基準對應實物HPLC 共有模式圖 (A) 和混合對照品HPLC 圖 (B)Fig.2 Common pattern of HPLC fingerprint of DSD substance standard corresponding substance (A) and HPLC of mixed reference substances (B)

2.6 DSD 物質基準對應實物指紋圖譜共有峰的歸屬

按供試品制備方法分別制備單味飲片供試品溶液、缺單味飲片供試品溶液、和DSD 物質基準對應實物供試品溶液。取DSD 物質基準對應實物、單味飲片、缺單味飲片供試品溶液按上述色譜條件進行測定，記錄色譜圖。分別將DSD 物質基準對應實物、單味飲片、缺單味飲片供試品溶液的色譜圖進行疊加比較，對DSD 物質基準對應實物指紋圖譜的色譜峰進行歸屬分析，結果見圖3 和表3。 根據圖3 和表3 對DSD 物質基準對應實物指紋圖譜中各共有峰進行歸屬分析，DSD 物質基準對應實物指紋圖譜共確認25 個色譜峰，均可以在原料飲片中找到明確歸屬。具體歸屬情況為4、22 號峰歸屬于當歸飲片；9、11、15 號峰歸屬于桂枝飲片；2、3、7 號峰歸屬于白芍飲片；1、4、19、20、23～25 號峰歸屬于細辛飲片；5、6、8～10、12～14、16～18、21 號峰歸屬于甘草；其中4 號峰為當歸、細辛所共有，9 號峰為桂枝、甘草所共有。經對照品指認9 個色譜峰，分別為2 號峰芍藥內酯苷、3號峰芍藥苷、4 號峰阿魏酸、5 號峰甘草苷、11 號峰肉桂酸、15 號峰鄰甲氧基桂皮醛、18 號峰甘草酸、22 號峰藁本內酯和23 號峰細辛脂素，主要藥效成分的指認率為36.0%。綜上可知，DSD 物質基準對應實物的物質群可清晰的追溯到飲片，且色譜峰歸屬明確，指認率較高。

表2 23 批DSD 物質基準對應實物HPLC 指紋圖譜相似度Table 2 Similarity of HPLC fingerprints of 23 batches of DSD substance standard corresponding substance

從色譜峰個數與峰強度看，甘草對指紋圖譜的貢獻最大，當歸、桂枝、白芍和細辛對指紋圖譜的貢獻度相對較大，木通、大棗對指紋圖譜的貢獻較低。木通主要含三萜及其苷類，其指標性成分木通苯乙醇苷B 在飲片炮制過程中損失嚴重，導致含量大幅度下降，在DSD 煎煮過程中由飲片轉移至水煎液的量極少，在此色譜條件下未檢測出色譜峰。大棗主要成分為多糖和氨基酸類物質，水溶性大，含量較低，且大棗中指標性成分齊墩果酸、白樺脂酸等物質極性較小，由飲片轉移至水煎液的量極少， 在此色譜條件下不能檢出色譜峰。因此，木通、大棗2 味飲片，在本實驗色譜條件下難以獲得指紋圖譜信息。

圖3 DSD 物質基準對應實物色譜峰歸屬Fig.3 Attribution of chromatographic peaks of DSD substance standard corresponding substance

表3 DSD 物質基準對應實物共有峰歸屬情況Table 3 Attribution of common peaks of DSD substance standard corresponding substance

2.7 基于網絡藥理學的DSD 功效物質預測分析

2.7.1 基于可測性和可追溯性的活性成分篩選 根據文獻研究，當歸、桂枝共為DSD 的君藥，其中阿魏酸為藥典項下當歸的質量控制指標，藁本內酯為其揮發油主要成分；鄰甲氧基桂皮醛是桂枝揮發油主成分之一，肉桂酸為非揮發油成分，受熱較穩定，具有抗菌、利膽、抗突變、抗腫瘤、抗疲勞等藥理作用[7]。白芍、細辛均為臣藥，其中芍藥苷為白芍的質量控制指標，具有鎮痛、解除痙攣、保護腦血管等作用，芍藥苷、芍藥內酯苷等統稱為芍藥總苷，具有補血、抗抑郁等作用[8]；細辛主要活性成分為揮發油和木脂素類，細辛脂素為藥典項下細辛的質量控制指標，具有鎮痛、抗炎等作用[9-10]。甘草為佐藥，其活性成分為黃酮類、三萜類，甘草苷具有抗炎、抗菌、抗氧化等作用，甘草酸具有抗炎鎮咳、免疫調節等作用，均為藥典項下甘草含量測定的質量控制指標[11-12]。木通的主要成分為三萜、苷類成分，大棗的有效成分為多糖類。文獻研究結合DSD 的指紋圖譜研究，以上類別中9 個活性成分均能得到指認，且能夠從飲片到物質基準對應實物進行傳遞。基于可測性和可追溯性，將這9 個活性成分做為候選化合物。利用 NCBI 數據庫（https://www.ncbi.nlm.nih.gov/）查找9 個候選化合物的Canonical SMILES，為后續DSD“成分-靶點-通路”網絡的構建做準備。

2.7.2 DSD 主要成分成分的靶蛋點預測 將9 個活性成分的Canonical SMILES 編號分別導入Swiss Target Prediction 數據庫（http://www.swisstarget prediction.ch/）預測分析其對應的靶蛋白，去除重復靶點，共得到與9 個活性化合物相關的271 個作用靶點。

2.7.3 蛋白-蛋白相互作用（ protein-protein interaction，PPI）網絡構建 將篩選得到的271 個作用靶點導入STRING 數據庫（https://string-db.org/）構建PPI 網絡，選擇物種為“Homo sapiens”，蛋白交互參數評分值為“high confidence＞0.9”，網絡顯示選項為“hide disconnected nodes in the network”，其余參數設置均保持不變，得到271 個靶蛋白的PPI 網絡圖（圖4）。將分析結果以TSV文本格式導入 Cytoscape 3.7.1 軟件，并利用Cytoscape 3.7.1 軟件中的“Network Analyzer”功能對分析結果進行網絡拓撲分析，計算選取度值（degree）、介數中心性（betweenness centrality）和接近中心性（closeness centrality）3 個重要拓撲參數均大于中位數且度值≥10 的靶點作為關鍵靶點。經篩選得到48 個關鍵靶點，結果見表4。

圖4 271 個靶蛋白的PPI 網絡圖Fig.4 PPI network diagram of 271 target proteins

表4 靶點網絡的拓撲學性質Table 4 Topological properties of target network

2.7.4 基因本體（gene ontology，GO）功能富集分析和京都基因和基因組百科全書（Kyoto encyclopedia of genes and genomes，KEGG）通路富集分析 將PPI 網絡構建篩選得到的48 個關鍵靶點利用David 6.8 數據庫（https://david.ncifcrf.gov/）對其進行GO功能富集分析和KEGG 通路富集分析。GO 功能富 集分析和KEGG 通路富集分析均根據“P≤0.01”和“Benjamini≤0.01”進行篩選。

續表4

GO 功能富集分析共獲取97 個GO 條目。其中生物過程（biological process，BP）占62 條，細胞組成（cell composition，CC）占9 條，分子功能（molecular function，MF）占26 條。根據顯著性程度進行部分展示，結果見圖5。BP 主要包括血小板活化、細胞外調節蛋白激酶1（extracellular regulated protein kinases 1，ERK1）和ERK2 級聯的正調控、藥物反應、MAP 激酶活性的正調控等方面；CC 主要涉及質膜、胞質溶膠等過程；MF 主要涉及酶結合、蛋白激酶活性等過程。KEGG 通路富集分析共富集到78 條通路，根據顯著性程度進行部分展示，結果見圖6。根據圖表可知，DSD 9 個活性成分富集的通路主要包括癌癥、磷脂酰肌醇-3-羥激酶-蛋白激酶B（phosphatidylinositol-3-hydroxykinase-protein kinase B，PI3K-Akt）、絲裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinase，MAPK）、瞬時受體電位（transient receptor potential，TRP）通道的炎性介質調節等信號通路。

圖6 DSD KEGG 富集分析Fig.6 KEGG enrichment analysis of DSD

2.7.5 “成分-靶點-通路”網絡的構建 根據篩選得到的9 個活性成分、48 個關鍵靶點和78 條信號通路，運用Cytoscape 3.7.1 軟件，建立DSD“成分-靶點-通路”網絡圖，結果見圖7。由圖可知，DSD相關活性成分通過調控不同的蛋白靶點，作用于多條通路發揮治療作用。

圖7 DSD“成分-靶點-通路”網絡圖Fig.7 “Ingredient-target-pathway” network diagram of DSD

2.7.6 整合分析 DSD 具有溫經散寒、養血通脈等功效，主治血虛寒厥癥，臨床主要用于治療痛經、糖尿病周圍神經病變、類風濕性關節炎、腫瘤等疾病。本研究通過文獻研究和指紋圖譜研究基于可測性和可追溯性對DSD 相關活性成分進行網絡藥理學分析，并對其作用機制進行探討分析。研究顯示，DSD 篩選得到9 個活性化合物，共獲得271 個靶點，通過構建PPI 網絡圖并選用度值、接近中心性、介數中心性3 個拓撲參數進行分析，篩選得到48 個關鍵靶點。

經分析，DSD 9 個活性成分可能通過作用于去甲腎上腺素受體（norepinephrine receptor，ADR）發揮鎮痛作用，作用于乙酰膽堿受體（acetylcholine receptor，CHRM）影響神經信號傳導[13]；蛋白激酶C（protein kinase C，RKC）是G 蛋白偶聯受體系統中的效應物，通過抑制PKC 的激活，改善皮膚微血管血流紊亂和微血管功能障礙[14]；IL-2 屬于炎癥因子，可用于調控炎癥反應，VEGFA 能夠引起血管新生，誘導細胞凋亡，抑制VEGFA、IL-2 的表達可減輕疼痛和炎癥反應[15-16]；ESR1 對生殖功能、性發育有重要作用，同時與痛覺傳遞有關，可用于調節陰陽，穩定生理功能[17-18]；基質金屬蛋白酶（matrix metalloproteinases，MMP）能夠抑制癌細胞的侵襲與遷移，達到治療癌癥的作用[19-20]。

GO 功能富集分析顯示，共獲取97 個GO 條目，主要包括血小板活化、MAPK 級聯的正調節、MAP激酶活性的正調控等生物過程，質膜、胞質溶膠等細胞組成和酶結合、蛋白激酶活性等分子功能，主要以生物過程為主，涉及神經-激素分泌調節、細胞生長增殖、能量代謝等生物學過程。

KEGG 通路富集分析顯示，DSD 9 個活性成分主要涉及癌癥、PI3K-Akt、MAPK、TRP 通道的炎性介質調節等信號通路。經研究，MAPK 信號通路參與細胞多種生理過程，是重要的信號轉導系統之一，與炎癥、腫瘤等多種疾病有關[16]；PI3K-Akt、MAPK 信號通路與細胞增殖、凋亡有關，通過調控PI3K-Akt、MAPK 等信號通路能夠抑制癌細胞增殖并誘導其凋亡，促進造血和血小板生成，有可能是發揮補血、活血作用的重要通路[21-22]；TRP 通路是一類離子通道，與炎癥和疼痛的發生密切相關，通過調控TRP 通路，拮抗TRPV1 等TRP 通道家族成員，緩解關節炎疼痛，常用于治療類風濕性關節炎、骨關節炎、痛風等疾病[23-24]；叉頭型轉錄因子的O亞型（forkhead transcription factor of the O class，FOXO）、低氧誘導因子1（hypoxia-inducible factor 1，HIF-1）等信號通路與造血功能有關，通過調控以上通路能夠促進O2、營養物質的轉運，使細胞免受缺氧損傷，促進血管和紅細胞生成[25]。同時，卻丹華等[16]研究發現，DSD 可通過調控MAPK、花生四烯酸等信號通路治療痛經；李文婷等[26]、張伏芝[27]研究發現通過調控MAPK、PI3K-Akt、HIF-1、晚期糖基化終末產物（advanced glycation end products，AGEs）等信號通路能夠治療糖尿病周圍神經病變；程邦[28]經研究發現DSD 通過調控TNF、HIF-1、癌癥通路、雌激素、VEGF 等信號通路干預類風濕性關節炎。由此推測，DSD 中關鍵效應成分可通過作用于多個靶點，干預多條通路達到溫經散寒、養血通脈的作用。

基于指紋圖譜和網絡藥理學研究，阿魏酸、肉桂酸、芍藥苷等9 個成分具有傳遞性和溯源性，且與DSD 的功能屬性密切相關，可預測其為影響DSD品質的潛在功效關聯物質。

3 討論

DSD 由當歸、桂枝等7 味藥組成，成分復雜，為了盡可能全面的分析其所含的化學成分，本研究對色譜條件和供試品提取條件進行考察。通過考察不同的檢測波長（237、245、280、290、316 nm）、流動相系統（甲醇-水、乙腈-水、乙腈-0.05%甲酸水溶液、乙腈-0.05%磷酸水溶液）、色譜柱（Waters XBridge C18色譜柱、Merck Purospher Star LP RP18endcapped 色譜柱、Hanbon Hedera ODS-2 色譜柱）、體積流量（0.6、0.8、1.0 mL/min）、柱溫（25、30、35 ℃）等項目，確立了DSD 指紋圖譜分析方法中色譜條件的關鍵要素：色譜柱為 Waters XBridge C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；檢測波長245 nm；體積流量1.0 mL/min；柱溫30 ℃；流動相為乙腈- 0.05%磷酸水溶液；梯度洗脫；結合DSD 組成藥味的藥典提取方法對供試品溶液的提取溶劑種類（甲醇、乙醇）和提取溶劑體積分數（0、30%、50%、70%醇溶液）進行考察，發現以70%甲醇為提取溶劑時色譜峰基線平穩，提取情況較佳，因此，選擇70%甲醇超聲提取。通過以上研究，確立DSD 指紋圖譜的分析方法。

經典名方由多味藥組成，成分復雜，具有多成分、多靶點、多通路的特點，同時經典名方的組方配伍又注重君臣佐使的配伍關系，通過組方配伍對相關疾病進行治療，使其作用機制研究困難。本實驗以指紋圖譜為指標，全面考察DSD 原料飲片-物質基準對應實物的關鍵質量屬性的傳遞性。結果顯示，DSD 物質基準對應實物共確認25 個峰，指認9 個色譜峰，均能在原料飲片中找到明確歸屬。從色譜峰個數與峰強度看，甘草對指紋圖譜的貢獻最大，當歸、桂枝、白芍和細辛對指紋圖譜的貢獻度相對較大，木通、大棗對指紋圖譜的貢獻較低。木通指標性成分木通苯乙醇苷B 在飲片炮制過程中損失嚴重，導致含量大幅度下降，在DSD 煎煮過程中由飲片轉移至水煎液的量極少，在此色譜條件下未檢測出色譜峰；大棗主要成分為多糖和氨基酸類物質，水溶性大，含量較低，在此色譜條件下未檢出色譜峰。因此，木通、大棗2 味飲片，在本實驗條件下難以獲得指紋圖譜信息，后期可結合其他質量控制方法對其進行全面的質量控制。

網絡藥理學主要是基于系統生物學的理論，對生物系統的網絡分析，選取特定信號節點進行多靶點藥物分子設計的新學科，具有系統性與整體性的特點，可用于闡釋及分析中藥復方制劑配伍之間的作用關系及作用機制[29-31]。本實驗將指紋圖譜與網絡藥理學相結合，通過對經典名方DSD 進行指紋圖譜研究，并采用網絡藥理學識別技術，構建DSD的“成分-靶點-通路”網絡，預測分析與DSD 的功能主治密切相關的核心靶點、信號通路及功效關聯物質，進一步推進對經典名方復方制劑作用機制的研究。

本研究基于指紋圖譜及網絡藥理學研究，分析預測DSD 溫經散寒、養血通脈功效關聯物質，為后期DSD 復方制劑全方位的質量控制及作用機制研究奠定基礎，有助于建立全過程的質量控制體系，提高中藥產業質量控制水平。

利益沖突所有作者均聲明不存在利益沖突