首發精神分裂癥DRD2 C957T多態性及認知功能的相關性研究

劉 欣 張麗麗 王素娟 栗克清 張云淑

精神分裂癥是最常見最嚴重的精神疾病之一，在世界范圍內患病率約為1%[1]。臨床癥狀以陽性和陰性癥狀以及認知功能障礙為核心特征[2]。精神分裂癥是一種多因素疾病，它的異質性是由遺傳和環境因素及其相互作用造成的[3,4]。多巴胺假說被廣泛認為與精神分裂癥相關，因此很多關于候選基因的研究也圍繞多巴胺能通路開展。有研究顯示，C957T位點的C等位基因與高加索人的精神分裂癥有關[5]。Rodriguez-Jimenez R等[6]研究中發現，多巴胺受體D2型(DRD2)C957T單核苷酸多態性可能通過影響中樞多巴胺能功能來影響認知功能，與攜帶CT/TT基因型人群相比，攜帶CC基因型的人群呈現較差的執行功能。目前關于C957T與精神分裂癥以及認知功能的關系尚不是很清楚。本研究將通過PCR-DNA測序檢測基因多態性，使用MATRICS共識認知成套測驗(MCCB)評估認知功能，探討DRD2 C957T多態性在首發精神分裂癥患者與健康人群中分布的差異，以及與認知功能的相關性。

1 對象與方法

1.1 對象 選取2018年1月1日～2019年12月31日于河北省精神衛生中心就診的首發精神分裂癥患者75例為研究組，并公開招募健康對照75名為對照組。研究組入組標準：(1)符合美國精神障礙診斷與統計手冊第4版(DSM-IV)的診斷標準；(2)病程≤60個月；(3)患者未用過或使用抗精神病藥時間少于14 d；(4)陽性與陰性癥狀量表(PANSS)總分≥60分；(5)可以獨自完成認知功能成套測驗。排除標準：腦器質性損害患者，其他精神疾患，精神發育遲滯者，物質依賴與物質成癮者，嚴重的軀體疾病患者(包括腫瘤、內分泌系統疾病)，嚴重的心、腦血管疾病及肝腎功能損傷，處于孕期、哺乳期及經期的女性。對照組入組標準：不符合DSM-IV軸I和軸II的精神障礙診斷標準，且家族史為陰性，排除標準同研究組。所有研究對象均為漢族人群，在研究進行前，對所有受試者進行本次研究目的的詳細解釋，患者本人或第一監護人簽署知情同意書，并通過河北省精神衛生中心倫理委員會的審查。

研究組1例患者因認知功能測試時不配合而排除，最終入組74例，其中男38例(51.35%)，女36例(48.65%),平均年齡(29.39±8.42)歲；對照組2名健康對照采血時出現異常情況而脫落，最終入組73名，其中男29名(39.73%)，女44名(60.27%),平均年齡(31.74±8.53)歲。兩組性別、年齡等一般資料比較，差異無統計學意義(P>0.05)。

1.2 方法

1.2.1 評估內容 使用自制一般情況量表收集人口學資料等，采用MCCB評估認知功能。選取測試以下方面：(1)處理速度，即連線測驗(TMT)；(2)注意/警覺，即持續操作測驗(CPT-IP)；(3)工作記憶，即Stroop色詞測驗；(4)言語學習和記憶，即言語記憶測驗(HVLT-R)；(5)視覺學習和記憶，即視覺記憶測驗(BVMT-R)。各分測驗評分越高，認知功能越好。

1.2.2 基因分型 抽取兩組受試者空腹肘靜脈血各5 ml，分離出血細胞，保存于-80 ℃冰箱；再對血細胞進行DNA通過PCR擴增，電泳，膠回收等步驟進行提取。對擴增的PCR產物進行檢測及純化。設計引物軟件用Primer Premier 5，使用美國ABI公司生產的3730XL測序儀對PCR產物進行測序C9567T-F 5’-CTGGGAGAGCTTCCTACGGC-3’，C9567T-R 5’-CATGCCTCAGTGACATCCTTG-3’。PCR反應條件：95 ℃預變性5 min；94 ℃變性30 s，58 ℃退火30 s，72 ℃延伸60 s，38個循環；72 ℃延伸10 min。PCR產物取5 μl 1%瓊脂糖凝膠電泳檢測擴增后的產物，電泳參數：150 V，100 mA，10～20 min。使用ABI 3730XL 全自動DNA測序儀完成測序。

1.2.3 統計學方法 采用SPSS 21.0軟件進行統計分析。兩組間C957T基因多態性比較采用χ2檢驗或者Fisher確切概率法；兩組間認知功能采用獨立樣本t檢驗；研究組不同基因型的認知功能差異性采用方差分析；使用二元回歸分析精神分裂癥患病相關因素；P<0.05被認為具有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組C957T基因檢測結果 研究組和對照組基因型均以CC為主，分別占90.5%和76.7%，雜合子CT型在兩組分別占9.5%和21.9%。C957T位點在兩組之間的基因型和等位基因頻率比較，差異均具有統計學意義(P<0.05)。見表1。進一步對性別分組，C957T位點在兩組男性中基因型和等位基因頻率比較，差異均具有統計學意義(P<0.05)。見表2。

表1 兩組DRD2基因多態性位點C957T基因型分布比較[n(%)]

表2 兩組不同性別C957T位點基因型及等位基因分布比較[n(%)]

2.2 兩組認知功能評價 研究組MCCB中TMT、HVLT-R、BVMT-R、CPT-IP及Stroop色詞測驗評分均低于對照組(P<0.05)。見表3。研究組中，CC基因型BVMT-R分測驗評分高于CT基因型(P<0.05)。見表4。

表3 兩組認知功能比較

表4 研究組不同基因型認知功能比較

2.3 精神分裂癥危險因素分析 以是否患有精神分裂癥為因變量，將性別、年齡、TMT、HVLT-R、BVMT-R、CPT-IP、Stroop色詞測驗、基因型作為自變量納入，采用Logistic回歸分析前進法，最終進入回歸模型的變量為TMT、HVLT-R、BVMT-R和CPT-IP，發現上述變量和是否患病相關。TMT、HVLT-R、BVMT-R和CPT-IP評分與精神分裂癥患病風險呈負相關(P<0.05)。見表5。

表5 精神分裂癥危險因素Logistic回歸分析

3 討論

過去的研究發現，精神分裂癥遺傳度約60%～80%[7]，如何找出易感基因也成了重大挑戰。多巴胺和D2通路的失調被認為是精神分裂癥的病理生理學和治療的關鍵[8]。龍海英等[9]發現C957T的T等位基因可能會使精神分裂癥的患病風險增高。在一篇關于C957T基因研究的薈萃分析中共納入了31篇文章，發現中國人群研究中顯示出精神分裂癥患病風險增加，而日本人群則顯示為保護性關聯，可能反映了等位基因頻率在地理位置上的分布差異[10]。

本研究通過對比首發精神分裂癥患者與健康對照C957T基因型和等位基因頻率，發現兩組基因型以及等位基因分布頻率差異均有統計學意義。進一步對性別分組后，男性中C957T基因型和等位基因頻率比較差異均有統計學意義，而女性中則差異無統計學意義。說明C957T可能與精神分裂癥相關，且與性別相關。Schr?der J等[11]發現男性患者給予神經阻滯劑后左外側紋狀體DRD2分布不對稱，而女性患者中未有此發現，這可能意味著性別差異影響著中樞某些區域DRD2對神經阻滯劑的效應。也有研究認為精神分裂癥患者DRD2對神經阻滯劑的反應與性別無相關性[12]。這提示該基因在不同種族以及性別中與精神分裂癥的關系可能存在不同。目前C957T位點與精神分裂癥相關性研究很少，對性別分組后的研究鮮有，而且本研究結論局限于在河北省精神衛生中心就診的患者，不能夠完全適用于所有的漢族精神分裂癥患者，尚需更大樣本量來驗證這一結論。

研究結果顯示，精神分裂癥患者認知功能MCCB測試中TMT、HVLT-R、BVMT-R、CPT-IP和Stroop色詞測驗評分均低于對照組(P<0.05)。在其他研究中也被證實，精神分裂癥患者的認知功能受到明顯損害，在首次發病的患者中，這些損害表現得尤其明顯[13]。另外，在本研究中，研究組C957T CT基因型BVMT-R評分低于CC基因型(P<0.05)。目前關于C957T位點不同基因型與精神分裂癥認知功能的研究鮮少，缺少對照。但是以前對健康人群樣本的研究發現，C957T位點的C等位基因與威斯康星卡片分類測驗中工作記憶能力有關[14]。DRD2 C957T基因多態性與執行功能的3個核心域相關，即工作記憶、反應抑制和認知靈活性[15]。在過去研究中發現多巴胺通過DRD2 mRNA表達產物受體的介導，調節著與這些腦區相關的中樞神經系統的多種功能及精神活動：感知、情感、行為和運動[16]。本研究還發現，通過回歸分析顯示，TMT、HVLT-R、BVMT-R和CPT-IP評分越低，精神分裂癥患病風險越高。有研究表明，精神分裂癥患者發病之前，認知功能已經出現損害[17]。這提示認知功能檢測結果有可能成為判斷是否患精神分裂癥的預測指標。

綜上所述，C957T多態性在男性中與精神分裂癥發病可能存在關聯，精神分裂癥患者認知功能受損，不同基因型可能對精神分裂癥患者簡易視覺功能產生影響。在未來的研究中擴大樣本量進行更為細致的分組研究，納入更多可能與精神分裂癥有關的基因，以進一步研究該基因與精神分裂癥的關系以及不同基因型患者認知功能的差異。