前列腺癌患者血清IL-17和IL-35水平表達(dá)與臨床病理特征以及預(yù)后的關(guān)系研究

何 躍，梁 晶，文禮紅，劉 宏，余文洪，孫 禎

（1.重慶北部寬仁醫(yī)院泌尿疾病科,重慶 401120;2.解放軍聯(lián)勤保障部隊(duì)第九四零醫(yī)院泌尿外科，蘭州 730000）

前列腺癌是發(fā)生于前列腺上皮細(xì)胞的惡性腫瘤，每年全球約160 萬(wàn)新發(fā)病例，36.6 萬(wàn)人死亡[1]。我國(guó)前列腺癌發(fā)病率呈上升趨勢(shì)，好發(fā)于65～79 歲老年男性[2]。雖然局限性前列腺癌有較高的長(zhǎng)期生存率，但轉(zhuǎn)移性前列腺癌即使經(jīng)過(guò)強(qiáng)化的多模式治療，仍然存在較高復(fù)發(fā)和死亡風(fēng)險(xiǎn)。慢性炎癥反應(yīng)與前列腺癌的啟動(dòng)和進(jìn)展密切相關(guān)，炎性細(xì)胞聚集，炎性因子合成和釋放形成腫瘤相關(guān)炎性反應(yīng)微環(huán)境，影響正常免疫功能和組織細(xì)胞增殖分化，導(dǎo)致惡變[3]。白細(xì)胞介素-17（IL-17）是一種功能廣泛的促炎因子，在宿主防御、組織修復(fù)、炎性疾病和癌癥進(jìn)展中發(fā)揮重要作用，已被證實(shí)參與宮頸癌、食道癌、胃癌、肝癌和結(jié)直腸癌等多種惡性腫瘤發(fā)展[4]。白細(xì)胞介素-35（IL-35）是一種新發(fā)現(xiàn)的免疫抑制細(xì)胞因子，屬于白介素-12 細(xì)胞因子家族，現(xiàn)有研究發(fā)現(xiàn)IL-35 能促進(jìn)細(xì)胞增殖和腫瘤血管生成，與腫瘤發(fā)生進(jìn)展密切相關(guān)[5]。本研究擬探討IL-17，IL-35 與前列腺癌臨床特征和預(yù)后的關(guān)系，以期為臨床治療、病情分析提供參考。

1 材料與方法

1.1 研究對(duì)象 選擇2016年3月～2017年6月解放軍聯(lián)勤保障部隊(duì)第九四零醫(yī)院泌尿科收治的86例前列腺癌患者（前列腺癌組），年齡58～75 歲，平均66.52±6.32 歲，病理類(lèi)型均為腺泡腺癌；分化程度：中低分化47 例，高度分化39 例；腫瘤分期：pT1-2 44 例，pT3a 42 例；組織學(xué)分級(jí)：Gleason 1～2 級(jí)39 例，Gleason 3～5 級(jí)47 例 ；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移15 例，術(shù)前血清前列腺特異抗原（PSA）≥10 ng/ml 53 例，＜10ng/ml 33 例。納入標(biāo)準(zhǔn)：①行前列腺癌切除手術(shù)，術(shù)后組織病理學(xué)證實(shí)為前列腺癌；②未發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移；③臨床資料和病理結(jié)果完整。排除標(biāo)準(zhǔn)：①術(shù)前接受新輔助放化療者；②并發(fā)其它部位惡性腫瘤；③腫瘤擴(kuò)散至盆腔或遠(yuǎn)處器官，惡病質(zhì)不耐受手術(shù)者，拒絕手術(shù)治療者；④術(shù)后預(yù)期壽命小于10年者，隨訪失聯(lián)。另選擇同期我院收治的前列腺良性增生患者共60 例為對(duì)照組，均經(jīng)前列腺穿刺活檢證實(shí)，年齡52～71 歲，平均齡年65.77±6.01 歲。本研究經(jīng)單位批準(zhǔn)，符合《世界醫(yī)學(xué)協(xié)會(huì)赫爾辛基宣言》相關(guān)要求。前列腺癌患者術(shù)后保持電話(huà)隨訪，隨訪至2020年6月，定期門(mén)診復(fù)查PSA，血清 PSA 水平連續(xù)兩次 >0.2ng/ml 定義為生化復(fù)發(fā)[6]。生化復(fù)發(fā)時(shí)間定義為確診至生化復(fù)發(fā)時(shí)間，總生存時(shí)間定義為確診至死亡或隨訪截止時(shí)間。

1.2 儀器與試劑 FLUOstar Omega 全自動(dòng)多功能酶標(biāo)儀購(gòu)自德國(guó)BMG LABTECH 公司，IL-17，IL-35 試劑盒購(gòu)自上海酶聯(lián)生物科技公司。

1.3 方法 所有受試者術(shù)前采集靜脈血3ml 注入干燥試管，待血液自然凝固后取上清液低溫離心（4℃，2 000r/min，15cm）20min，取血清上機(jī)檢測(cè)，采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測(cè)IL-17，IL-35 水平。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 SPSS 25.00 進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)或單因素方差分析。Kaplan-Meier 繪制生存曲線，分析不同IL-17，IL-35 水平下前列腺癌患者生存率差異，Log-Rank 檢驗(yàn)生存率的差異，Cox風(fēng)險(xiǎn)比例回歸分析影響前列腺癌患者預(yù)后的因素。以P＜0.05 為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 前列腺癌組、對(duì)照組血清IL-17，IL-35 水平比較 兩組年齡比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=0.720，P=0.473）。前列腺癌組血清IL-17，IL-35 水平分別為65.23±14.46pg/ml，132.15±23.65pg/ml，高于對(duì)照組的25.12±7.49pg/ml，61.42±10.58pg/ml，差異具有非常顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=19.707，21.684，均P＜0.001）。

2.2 不同臨床特征前列腺癌患者血清IL-17，IL-35水平比較 見(jiàn)表1。腫瘤分期pT3a，組織學(xué)分級(jí)Gleason 3-5 級(jí)，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，術(shù)前PSA ≥10ng/ml患者血清IL-17，IL-35 水平高于腫瘤分期pT1-2，組織學(xué)分級(jí)Gleason1-2 級(jí)，未發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，術(shù)前PSA ＜10 ng/ml 患者，差異具有非常顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.001）。不同年齡、分化程度之間血清IL-17，IL-35 水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

表1 不同臨床特征患者血清IL-17，IL-35 水平差異(n=86,(±s)

表1 不同臨床特征患者血清IL-17，IL-35 水平差異(n=86,(±s)

臨床特征nIL-17（pg/ml）t 值P 值IL-35（pg/ml）t 值P 值年齡（歲） ≥60 歲5565.74±13.54 0.4680.641 132.69±22.15 0.3000.765＜60 歲3164.33±13.15131.19±22.52分化程度 中低分化4765.87±12.98 0.5060.614 132.46±22.58 0.1390.890高度分化3964.46±12.74131.78±22.61腫瘤分期 pT1-24457.19±4.59 18.465＜0.001 114.79±9.56 21.474＜0.001 pT3a4273.65±3.59150.34±4.98組織學(xué)分級(jí) Gleason 1-2 級(jí)3954.65±3.57 24.656＜0.001 109.45±1.83 57.937＜0.001 Gleason 3-5 級(jí)4774.01±3.67150.97±4.15淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移 是1575.12±3.78 10.057＜0.001 149.47±4.62 11.433＜0.001否7163.14±6.59128.49±10.65術(shù)前PSA（ng/ml） ≥10＜10 5370.65±5.09 13.086＜0.001 142.57±7.49 14.650＜0.001 3356.53±4.89115.41±9.35

2.3 不同血清IL-17，IL-35 水平前列腺癌患者生存率差異 隨訪時(shí)間36～51 個(gè)月，中位隨訪24 個(gè)月，86 例前列腺癌患者生化復(fù)發(fā)23 例，死亡12 例。Kaplan-Meier 生存曲線分析顯示，高血清IL-17水平組無(wú)生化復(fù)發(fā)生存率，總生存率低于低血清IL-17 水平組（Log-Rankχ2=7.031,4.701，P=0.008，0.030），高血清IL-35 水平組低于低血清IL-35 水平組（Log-Rankχ2=7.832, 5.483,P=0.005, 0.019），見(jiàn)圖1。

圖1 不同血清IL-17，IL-35 水平前列腺癌患者生存曲線

2.4 影響前列腺癌患者預(yù)后的因素分析 單因素Cox 風(fēng)險(xiǎn)比例回歸分析結(jié)果顯示pT3a，中低度分化，Gleason 3-5 級(jí)，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，高水平IL-17，IL-35與前列腺癌患者不良預(yù)后發(fā)生有關(guān)（P＜0.05），多因素Cox 風(fēng)險(xiǎn)比例回歸分析顯示Gleason 3-5 級(jí)，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，高水平IL-17，IL-35 是前列腺癌患者不良預(yù)后的危險(xiǎn)因素（P＜0.01），見(jiàn)表2 和3。

表2 影響前列腺癌患者預(yù)后的單因素Cox 風(fēng)險(xiǎn)比例回歸模型

表3 影響前列腺癌患者預(yù)后的多因素Cox 風(fēng)險(xiǎn)比例回歸模型

3 討論

炎癥與細(xì)胞分化、增殖侵襲、血管生成和轉(zhuǎn)移等腫瘤發(fā)生和發(fā)展各個(gè)環(huán)節(jié)密切相關(guān)。巨噬細(xì)胞、肥大細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞及其亞群浸潤(rùn)于腫瘤組織釋放如腫瘤壞死因子、表皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子、成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子2 等降解細(xì)胞外基質(zhì)，介導(dǎo)上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化，促使腫瘤侵襲及轉(zhuǎn)移[7]。炎癥細(xì)胞還可募集間充質(zhì)干細(xì)胞至腫瘤微環(huán)境，刺激血小板源性生長(zhǎng)因子和血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子表達(dá)，促進(jìn)新生血管形成和腫瘤生長(zhǎng)[8]，炎癥細(xì)胞還可抑制細(xì)胞毒性T 淋巴細(xì)胞、自然殺傷細(xì)胞，導(dǎo)致Th1/Th2 和Th17/Treg 失衡，促使腫瘤細(xì)胞免疫逃逸[9]。全身炎癥狀態(tài)影響激素水平，而前列腺癌發(fā)病受雌激素和雄激素水平雙重影響，越來(lái)越多的證據(jù)表明慢性炎癥通過(guò)調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)，腫瘤微環(huán)境等參與前列腺癌發(fā)生過(guò)程中[10]。

IL-17 是一種多效促炎癥細(xì)胞因子，主要由CD4+T 細(xì)胞的亞型-輔助細(xì)胞T17，單核細(xì)胞等分泌，具有強(qiáng)大招募中性粒細(xì)胞，促使多種炎性細(xì)胞因子釋放，誘導(dǎo)趨化因子、血管生長(zhǎng)因子表達(dá)等作用[11]。近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)IL-17 可能通過(guò)促進(jìn)慢性組織炎癥來(lái)支持癌癥的發(fā)展，IL-17 在宮頸癌、食道癌、胃癌、肝癌和結(jié)直腸癌中表達(dá)升高[4]，IL-17 通過(guò)增強(qiáng)癌癥誘導(dǎo)的炎癥反應(yīng)，防止癌細(xì)胞受到免疫監(jiān)視，促進(jìn)腫瘤進(jìn)展[12]。本研究發(fā)現(xiàn)前列腺癌患者血清IL-17 水平明顯高于前列腺良性增生患者，且IL-17 水平與前列腺癌患者腫瘤分期、組織學(xué)分級(jí)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移以及術(shù)前PSA 水平有關(guān)，說(shuō)明IL-17 介導(dǎo)的腫瘤相關(guān)炎癥反應(yīng)可能參與前列腺癌的發(fā)病和侵襲轉(zhuǎn)移等惡性進(jìn)展過(guò)程，與徐銳[13]等人報(bào)道存在一致之處。通過(guò)隨訪發(fā)現(xiàn)血清高IL-17 水平患者無(wú)生化復(fù)發(fā)生存率和總生存率低于低血清IL-17 水平患者，提示IL-17 水平與前列腺癌患者復(fù)發(fā)和生存密切相關(guān)，而這一結(jié)論得到了Cox 回歸分析結(jié)果證實(shí)。IL-17 參與前列腺癌發(fā)病和進(jìn)展的機(jī)制可能有以下幾點(diǎn)：IL-17 通過(guò)作用于核因子-κB 和細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)蛋白激酶1/2 信號(hào)通路，抑制程序性細(xì)胞死亡蛋白1，進(jìn)而抑制細(xì)胞毒性T 淋巴細(xì)胞激活，抑制腫瘤免疫反應(yīng)，逃避腫瘤免疫監(jiān)視[14]。IL-17 還可增加腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)基因 mRNA 和蛋白的表達(dá)[15]，上調(diào)血管內(nèi)皮細(xì)胞中血管細(xì)胞黏附分子表達(dá)，增強(qiáng)前列腺癌細(xì)胞與血管內(nèi)皮細(xì)胞黏附[16]，促使和加速前列腺癌轉(zhuǎn)移，導(dǎo)致腫瘤進(jìn)展。

IL-35 是調(diào)節(jié)T 細(xì)胞功能的重要介質(zhì)，主要由Treg 細(xì)胞在干擾素-γ 或Toll 樣受體刺激下分泌，B 細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞和單核細(xì)胞也可產(chǎn)生IL-35，IL-35 通過(guò)促進(jìn)Treg 細(xì)胞擴(kuò)增和IL-10 的產(chǎn)生，抑制Th1 和Th17 細(xì)胞分化和功能，發(fā)揮免疫抑制功能[17]。癌細(xì)胞、腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞可分泌IL-35，影響腫瘤免疫微環(huán)境免疫應(yīng)答，抑制CD8+T 細(xì)胞功能，促使新生血管形成[18]。乳腺癌和肺癌模型中，腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞分泌IL-35，通過(guò)激活Janus 激酶2-信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)與轉(zhuǎn)錄激活因子3 信號(hào)通路促使癌細(xì)胞的上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化，促進(jìn)癌癥的轉(zhuǎn)移定植，敲除IL-35 可減少轉(zhuǎn)移定植[19]。IL-35 在結(jié)腸癌[19]、非小細(xì)胞肺癌[20]表達(dá)均增高，與腫瘤侵襲、轉(zhuǎn)移有關(guān)。本研究結(jié)果表明IL-35 同樣參與前列腺癌發(fā)病和進(jìn)展，ZHU[21]等人也指出血漿中IL-35 濃度增加與前列腺癌分期進(jìn)展、GLEASON 評(píng)分增加、淋巴結(jié)和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移有關(guān)，提示IL-35 水平升高可能有助于前列腺癌的進(jìn)展和轉(zhuǎn)移。生存分析和Cox 回歸分析結(jié)果表明IL-35 與前列腺癌復(fù)發(fā)和生存有關(guān)。分析IL-35 參與前列腺癌發(fā)生和進(jìn)展機(jī)制為：IL-35水平增高抑制CD8+T 細(xì)胞功能，降低抗腫瘤免疫功能[22]，導(dǎo)致前列腺癌細(xì)胞逃避免疫監(jiān)視，促使新生血管形成和上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化，進(jìn)而導(dǎo)致腫瘤進(jìn)展。

綜上，前列腺癌患者血清IL-17，IL-35 水平明顯升高，IL-17，IL-35 與前列腺癌的發(fā)生、發(fā)展和預(yù)后密切相關(guān)。IL-17，IL-35 可能是前列腺炎癥相關(guān)性腫瘤微環(huán)境中促進(jìn)腫瘤生長(zhǎng)、侵襲和轉(zhuǎn)移等病理過(guò)程的重要因子，有望成為前列腺癌病情和預(yù)后評(píng)估的一個(gè)新的免疫學(xué)指標(biāo)，可能為前列腺癌的免疫治療提供新的思路或治療靶點(diǎn)。