慢性丙型肝炎患者肝纖維化程度與TLR2、TLR4 mRNA的關(guān)系

賈國(guó)昌 劉春江 劉東坡 柯近 郭敬超

肝纖維化是慢性肝病向肝硬化發(fā)展的關(guān)鍵階段，因而對(duì)反映慢性丙型肝炎(CHC)患者肝纖維程度相關(guān)指標(biāo)的研究成為臨床熱點(diǎn)話題[1-2]。Toll樣受體(TLR)是固有免疫模式識(shí)別受體的重要組成部分，目前被認(rèn)為參與人體組織纖維病變的過(guò)程[3-4]。本研究通過(guò)對(duì)Toll樣受體2(TLR2)、Toll樣受體4(TLR4)進(jìn)行觀察，探討其與CHC患者肝纖維化程度的關(guān)系，現(xiàn)作以下表述。

資料與方法

一、基礎(chǔ)資料

對(duì)2019年1月到2019年12月因慢性HCV感染來(lái)舞鋼市人民醫(yī)院接受治療的185例患者進(jìn)行選擇納入試驗(yàn)，收錄進(jìn)CHC組，再收集相同時(shí)期來(lái)醫(yī)院進(jìn)行體格檢查的185名健康志愿者來(lái)做對(duì)照試驗(yàn)，收錄進(jìn)對(duì)照組。兩組中的CHC組存在男性患者104例，女性患者81例；年齡位于41～76歲，平均年齡(52.15±4.67)歲；體質(zhì)量指數(shù)(BMI)19～26 kg/m2，平均值為(22.47±2.05)kg/m2；患病年數(shù)1～7年，平均年數(shù)(3.86±0.74)年。兩組中的對(duì)照組包括男性96名，女性89名；年齡位于42～75歲，平均年齡(51.89±4.74)歲；BMI 18～26 kg/m2，平均值為(22.39±1.96)kg/m2。對(duì)照不同組別病例的人口特征及入院相關(guān)信息，無(wú)明顯差異(P>0.05)，可比度良好，本研究在倫理審核后方通知患者和志愿者進(jìn)行相關(guān)操作。

二、納入與排除標(biāo)準(zhǔn)

納入標(biāo)準(zhǔn)：①根據(jù)《丙型肝炎防治指南(2015更新版)》[5]有關(guān)標(biāo)準(zhǔn)，CHC患者經(jīng)相關(guān)檢查被確診，且均合并不同程度肝纖維化；②41～76歲；③患者和家屬知曉研究目的、方法并簽字同意。

排除標(biāo)準(zhǔn)：①由于甲型肝炎病毒、乙型肝炎病毒、人類(lèi)免疫缺陷病毒等非HCV的其他慢性肝炎病毒而引起的肝纖維化；②曾經(jīng)有肝移植史或肝臟相關(guān)手術(shù)史；③已患有惡性腫瘤，且預(yù)計(jì)死亡時(shí)間在1年內(nèi)；④心臟、腦血管、腎臟等重要臟器組織發(fā)生異常或曾經(jīng)因?yàn)檠合到y(tǒng)疾病入院。

三、研究方法

(一)血液采集 在所有患者(或志愿者)入院時(shí)即對(duì)其空腹靜脈血進(jìn)行采集，收集5 mL血液后以2 000 r/min速度離心后進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)，采取實(shí)時(shí)熒光定量法(PCR)測(cè)量TLR2轉(zhuǎn)錄物(mRNA)、TLR4 mRNA表達(dá)，TLR2、TLR4的基因mRNA相對(duì)含量以目的基因TLR2、TLR4產(chǎn)物與內(nèi)參基因β-action產(chǎn)物的條帶灰度值之比表示。

(二)肝纖維化程度分級(jí) 所有CHC患者均在MRI掃描后通過(guò)穿刺進(jìn)行檢查，找出患者右邊一側(cè)的腋前到鎖骨中線之間肝臟切面較大的位置來(lái)刺入并抽取樣本，把抽取得到的樣本通過(guò)甲醛進(jìn)行固定，采用石蠟將其進(jìn)行包埋處理。按照Scheuer法[6]將肝纖維化分成F1(匯管區(qū)纖維化擴(kuò)增，但只局限于竇周及小葉內(nèi))、F2(匯管區(qū)周?chē)w維化，有間隔形成，但小葉結(jié)構(gòu)仍然完整)、F3(肝小葉結(jié)構(gòu)被破壞，大量纖維間隔形成，但無(wú)肝硬化)、F4四期(早期肝硬化)；按照CHC患者肝纖維化不同分期將其分別納入F1組、F2組、F3組、F4組。

(三)觀察指標(biāo)：①對(duì)兩組TLR2 mRNA、TLR4 mRNA檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行比較；②對(duì)不同肝纖維化程度CHC患者TLR2 mRNA、TLR4 mRNA檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行比較；③通過(guò)Spearman系數(shù)分析肝纖維化程度分級(jí)F1、F2、F3、F4與TLR2 mRNA、TLR4 mRNA水平的相關(guān)性。

四、統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

結(jié) 果

一、兩組TLR2 mRNA、TLR4 mRNA檢測(cè)結(jié)果對(duì)照

CHC組TLR2mRNA、TLR4mRNA水平顯著高于對(duì)照組，有顯著差異(P<0.05)。見(jiàn)表1。

表1 兩組TLR2 mRNA、TLR4 mRNA檢測(cè)結(jié)果對(duì)照(±s)

二、不同肝纖維化程度CHC患者TLR2 mRNA、TLR4 mRNA表達(dá)情況比較

經(jīng)肝纖維化分級(jí)發(fā)現(xiàn)185例患者中有35例為F1，63例為F2，58例為F3，29例為F4，分別將其納入納入F1組、F2組、F3組、F4組；比較CHC患者不同纖維化程度TLR2 mRNA、TLR4 mRNA水平F1組

表2 不同肝纖維化程度CHC患者TLR2 mRNA、TLR4 mRNA表達(dá)情況比較(±s)

三、肝纖維化程度與TLR2 mRNA、TLR4 mRNA表達(dá)Spearman系數(shù)分析

經(jīng)相關(guān)性分析，CHC患者肝纖維化程度分級(jí)F1、F2、F3、F4與TLR2 mRNA、TLR4 mRNA表達(dá)呈正相關(guān)(P<0.05)。見(jiàn)表3。

表3 肝纖維化程度與TLR2 mRNA、TLR4 mRNA表達(dá)Spearman系數(shù)分析

討 論

本研究結(jié)果顯示，CHC組TLR2 mRNA、TLR4 mRNA水平顯著高于對(duì)照組，提示TLR2、TLR4在CHC患者體內(nèi)已呈現(xiàn)異常表達(dá)。TLR胞內(nèi)區(qū)結(jié)構(gòu)域的氨基酸序列缺失或突變會(huì)中斷信號(hào)繼續(xù)傳導(dǎo)，從而影響機(jī)體免疫系統(tǒng)，而TLR2、TLR4是TLR家族中較為活躍的成員，通常分布于細(xì)胞膜，從而識(shí)別多種病原體的表面結(jié)構(gòu)[7-10]。HCV感染患者細(xì)胞基質(zhì)后，分布于其中的TLR2、TLR4結(jié)合受體大量增加，激活髓樣分化因子依賴(lài)性信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，使得直接或間接的抗病毒細(xì)胞因子大量生成，誘導(dǎo)機(jī)體天然免疫應(yīng)答[11]。

比較CHC患者不同纖維化程度TLR2 mRNA、TLR4 mRNA水平F1組

經(jīng)相關(guān)性分析，CHC患者肝纖維化程度分級(jí)F1、F2、F3、F4與TLR2 mRNA、TLR4 mRNA表達(dá)呈正相關(guān)，提示TLR2 mRNA、TLR4 mRNA水平與CHC患者肝纖維化有明顯相關(guān)性。TLR2、TLR4都能和HCV蛋白進(jìn)行反應(yīng)使得其往更深層傳導(dǎo)的過(guò)程受到阻礙，由此使得其介導(dǎo)的獲得性免疫反應(yīng)受到抑制，同時(shí)在此過(guò)程中調(diào)節(jié)了炎性因子的分泌使得肝纖維化不斷進(jìn)展[15]。

綜上，CHC患者肝纖維化程度與TLR2 mRNA、TLR4 mRNA表達(dá)呈明顯正相關(guān)，臨床醫(yī)師在對(duì)其肝纖維化程度進(jìn)行評(píng)估時(shí)可將其作為參考指標(biāo)，及時(shí)干預(yù)，以減緩肝纖維化向肝硬化的進(jìn)展。