河北省奶牛場牛呼吸道疾病綜合征病原分離鑒定

高亞桃，王紫燕，馬亞賓，蔣桂娥，倪俊卿，張明勇，李 妍，武二斌，秦建華*，趙月蘭*

(1.河北農(nóng)業(yè)大學(xué) 動物醫(yī)學(xué)院，河北 保定 071001;2.河北省畜牧良種工作站，河北 石家莊 050061；3.懷來縣畜牧水產(chǎn)局，河北 張家口 075400;4.張家口市畜牧技術(shù)推廣站，河北 張家口 075000)

牛呼吸道疾病綜合征(bovine respiratory disease complex，BRDC)是一類多病原多因素的傳染性疾病，可引起牛肺炎、運輸熱、支氣管炎等病癥[1]，引發(fā)該病的病原種類繁多，包括牛傳染性鼻氣管炎病毒(infectious bovine rhinotracheitis virus，IBRV)、牛呼吸道合胞體病毒(bovine respiratory syncytial virus，BRSV)、牛副流感病毒3型(bovine parainfluenza virus stype 3,BPIV3)、牛冠狀病毒(bovine coronavirus,BCoV)、牛病毒性腹瀉病毒(bovine viral diarrhoea virus，BVDV)、多殺性巴氏桿菌(Pasteurellamultocida，Pm)、肺炎克雷伯桿菌(Klebsiellapneumoniae，Kp)、牛支原體(Mycoplasmabovis,MYPB)和溶血性曼氏桿菌(Mannheimiahaemolytica，Mh)等[2-6]。近年來，該病在國內(nèi)外常見報道，多呈地方性或散發(fā)性流行，嚴重危害養(yǎng)牛業(yè)的發(fā)展[7]。此外，此病多病原混合感染的病原種類增加、病原體之間的相互作用，可導(dǎo)致病癥加重、病情復(fù)雜，使得該病的診斷和治療更加困難，給養(yǎng)牛業(yè)造成巨大的經(jīng)濟損失[8]。為了解河北省部分地區(qū)規(guī)模化奶牛場BRDC病原種類，本試驗自河北省不同地區(qū)不同牛場奶牛呼吸道疾病臨床病例采集病料，進行病原的分離和鑒定。

1 材料與方法

1.1 引物的設(shè)計與合成根據(jù)GenBank公布的 BVDV、IBRV、BRV、BPV、Pm、Kp、MYPB和Mh參考基因組序列，利用 Primer5 軟件設(shè)計8對特異性引物，由上海生物工程股份有限公司合成。引物序列信息見表1。

表1 引物序列信息

1.2 被檢樣品自河北省張家口、秦皇島、保定、衡水、滄州、石家莊、邯鄲等地區(qū)規(guī)模化奶牛場采集奶牛呼吸道疾病臨床病例鼻拭子樣品及死亡奶牛的肺臟組織樣品，共計56份。……