白樺茸中總糖含量測定方法的建立

彭焱輝，王志強，徐陽純，許澤群，吳凌濤

[1.廣東省科學院，廣東省科學院測試分析研究所（中國廣州分析測試中心）廣東 廣州 510070；2.廣東省化學危害應急檢測技術重點實驗室，廣東 廣州 510070]

白樺茸別稱樺樹菇、樺褐孔菌、西伯利亞靈芝，為銹革孔菌科纖孔菌屬[1,2]。主要分布于俄羅斯、芬蘭、波蘭和日本北海道等北緯40°~50°的地區和我國的黑龍江和吉林一帶[3-5]。

白樺茸含有大量的抗癌、降血壓、降血糖及復活免疫作用的植物纖維類多糖體[6-8]，其可以提高免疫細胞的活力、抑制癌細胞的擴散和復發、增進食欲、安神鎮靜、潤腸通便和消除疲勞等，在胃腸內防止致癌等有害物質的吸收，并促進排泄[9,10]。白樺茸是俄羅斯、波蘭和日本等國的民間常用藥物[11,12]，人們已從其菌核和菌絲中提取到一種糖蛋白（FIS-1）和一種水溶性多糖（F1），水溶性多糖有明顯的降血糖作用，一次性給藥50 mg/kg體重，3 h后，高血糖鼠的血糖含量下降近一半，且可維持48 h之久[13]，因此對白樺茸中多糖含量的研究有十分重要的意義。白樺茸中總糖包含水溶性糖和水不溶性多糖，對白樺茸中總糖測定方法及測定方法優化是進行白樺茸多糖化學性質和藥理研究的前提。本實驗采用紫外分光光度法測定白樺茸中總糖含量[14,15]，為深入研究與開發白樺茸的藥用和保健功效提供理論依據。

1 材料與儀器設備

1.1 主要材料

白樺茸鮮樣（產地分別為中國黑龍江省、吉林省，俄羅斯和日本，烘干、粉碎、過篩保存）；葡萄糖標準物質（中國計量科學研究院，含量為99.6%）；鹽酸、苯酚、硫酸等（分析純，廣州化學試劑廠）；實驗室用水為去離子水。

1.2 儀器設備

紫外可見分光光度計（帶1 cm石英比色皿，島津UV-2450）；分析天平（精確度0.000 1 g）；DHG-9425A型電熱鼓風干燥箱（上海一恒科學儀器有限公司）；高速多功能粉碎機（永康市久品工貿有限公司）。

2 實驗方法與分析

2.1 干燥白樺茸樣品的制備

取白樺茸試樣1 000 g，用剪刀剪成小塊，于50℃干燥6 h后逐步提高溫度至80℃，烘至發脆，冷卻，粉碎過0.9 mm篩，密封存儲于廣口瓶中，備用。

2.2 試樣液制備

精密稱取白樺茸干品0.25 g，置于錐形瓶中，加50 mL水和15 mL濃鹽酸，于沸水浴中水解回流3 h，冷卻至室溫后過濾，用水定容至250 mL。此溶液為供試品溶液。

2.3 對照品儲備液的制備

稱取0.104 0 g含量為99.6%的葡萄糖對照品，置于100 mL容量瓶中，用水溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成0.103 6 mg/mL的葡萄糖對照品儲備液。

2.4 測定波長的選擇

取配置好的標準溶液1 mL于10 mL比色管中，加入1.0 mL5%的苯酚溶液，混勻，然后快速加入5.0 mL硫酸，靜置反應10 min，渦旋，將比色管置于30℃水浴中再反應20 min，取出，冷卻至室溫。用1 cm比色杯在可見光區進行掃描，掃描波長見圖1，確定最大吸收波長490 nm。

圖1 葡萄糖標準溶液的掃描波長Fig.1 The scanning wavelength of the glucose standard solution

2.5 標準曲線的制定

分別吸取對照品儲備液0、0.10、0.20、0.40、0.60、0.80和1.00 mL于7個10 mL比色管中，按2.4操作，在490 nm測定其吸光度值，所得數據回歸處理，得到標準曲線的線性擬合曲線見圖2，回歸方程為：y=0.0104x+0.0041，式中：x為被測樣品中葡萄糖的質量；y為吸光度，相關系數為R2=0.9997。該分析方法線性關系良好，可以進行定量分析。

圖2 葡萄糖標準溶液線性擬合曲線Fig.2 The linear fitting curve of the glucose standard solution

2.6 試樣測定

取按2.2步驟制備的試樣液1 mL于10 mL比色管中，按2.4測定波長的選擇項下的方法，自加入1.0 mL 5%苯酚溶液起，測定樣品吸光度，并依標準曲線方程計算出試樣溶液中葡萄糖的量，進一步根據試樣液制備過程計算得到白樺茸供試品中總糖的含量。

2.7 方法學考察

2.7.1 中間精密性試驗 取配置好的標準溶液0.6 mL分別在不同日期、不同人員、不同儀器的情況下按2.4操作兩次，在490 nm下測定吸光度，計算6個測定結果的相對標準偏差（RSD），結果見表1。表1結果顯示RSD值為0.51%，精密性良好。

表1 測定方法的精密性Table 1 The precision of the assay method

2.7.2 穩定性試驗 取配制好的標準溶液0.6 mL按2.3操作后，分別穩定10、20、30、40、50、60 min后，在490 nm測定吸光度，結果見表2。表2結果顯示在60min內基本穩定，RSD值為0.32%，具有較好的穩定性。

表2 測定方法的穩定性Table 2 The stability of the assay method

2.7.3 重復性試驗 用建立的方法對同一批次的白樺茸進行6次測定，計算6次測定結果的相對標準偏差（RSD），結果見表3。

表3 測定方法的精密性Table 3 The intermediate precision of the determination method

從表3得出，RSD值為0.91%，符合一般方法的RSD＜5%的要求，該方法具有很好的重復性。

2.7.4 加標回收率測定 精密稱取同一白樺茸樣品0.25 g，按樣品制備方法制備試樣液6份，各取1 mL，分別置于6個10.0 mL具塞試管中，按表4所示分別精密加入葡萄糖對照品，按2.4測定波長的選擇項下的方法，從加入1.0 mL 5%的苯酚溶液起，依法測定吸光度，從標準曲線上讀出試樣溶液中含葡萄糖的重量，計算回收率，結果見表4。

表4 加標回收率實驗結果Table 4 The experimental results of recovery rates

從表4可知，加標回收率滿足一般檢測方法對回收率90%~110%的要求，表明本法準確可行。

3 不同產地的白樺茸總糖含量比較

取不同產地的白樺茸樣品各5批，按2.2步驟制備試樣液，按2.3步驟測定試樣液中總糖的含量，分析得出不同產地白樺茸的總糖含量見表5，產自中國黑龍江的白樺茸干品總糖含量為206 mg/g，產自吉林的白樺茸干品總糖含量為195 mg/g，產自俄羅斯的白樺茸干品總糖含量為253 mg/g，產自日本的白樺茸干品總糖含量為208 mg/g。

表5 不同產地白樺茸的總糖含量Table 5 The total sugar of Betula platy phylla from different habitats

4 結論

以鹽酸溶液對白樺茸試樣液酸解，水解物在硫酸作用下生成的糖醛衍生物與苯酚產生顯色反應，采用葡萄糖作為對照品，用分光光度計在490 nm波長測定白樺茸中總糖的含量。該方法精密性、穩定性和重復性良好，滿足樣品加標回收實驗，通過此方法能很好地測得不同產地的白樺茸中總糖的含量，其中產自俄羅斯的白樺茸總糖含量最高，為253 mg/g，吉林產地的白樺茸總糖含量最低，為195 mg/g。