口腔鱗狀細(xì)胞癌中RECK蛋白檢測(cè)及意義

高穎 楊濤 劉樂(lè) 姜日文 (第964醫(yī)院，吉林 長(zhǎng)春 300；解放軍9333部隊(duì))

侵襲和轉(zhuǎn)移是惡性腫瘤非常重要的指標(biāo)，找到控制惡性腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移的方法是治愈腫瘤患者的方向。RECK基因在生物學(xué)認(rèn)為可降低癌細(xì)胞活性，為一種抑癌基因〔1〕，當(dāng)腫瘤細(xì)胞發(fā)生改變，開(kāi)始浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移都可能使其激活，沉默表達(dá)?？谇击[狀細(xì)胞癌(OSCC)是老年患者頭頸部常見(jiàn)的惡性腫瘤，前期臨床表現(xiàn)不明顯，惡性程度高，遠(yuǎn)期治療效果差，發(fā)病機(jī)制仍不十分清楚。RECK在許多腫瘤中均異常表達(dá)。但在老年患者中OSCC的研究較少。本文擬分析RECK在老年OSCC患者中的表達(dá)情況及其在浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移過(guò)程中的作用。

1 材料與方法

1.1臨床材料 56例OSCC患者選自第964醫(yī)院2005～2020年手術(shù)切除病理標(biāo)本，年齡60～95歲；男30，女26例；病理學(xué)類型：高分化12例，中度分化18例，低分化26例；病理分期：Ⅰ～Ⅱ期31例， Ⅲ～Ⅳ期25例；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移27例，術(shù)前均未進(jìn)行抗腫瘤治療。正?？谇火つそM織41例，年齡60～84歲，其中男24例，女17例。

1.2RECK蛋白檢測(cè)方法 所有標(biāo)本經(jīng)10%甲醛固定，石蠟包埋，4 μm厚連續(xù)切片，每塊共切3張RECK染色，1張?zhí)K木素-伊紅(HE)染色，1張磷酸鹽緩沖液(PBS)為陰性對(duì)照；在一抗鼠抗人RECK單克隆抗體(購(gòu)自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司)工作濃度(1∶100)基礎(chǔ)上滴加試劑二抗 PV-6000：37℃烤箱中育 60 min，室溫下濕盒中育15 min，PBS緩沖液清洗3次；多聚賴氨酸(Pol-L-lysine)防脫片劑(購(gòu)自北京中山生物技術(shù)有限公司)二氨基聯(lián)苯胺(DAB)顯色試劑盒。SP免疫組化試劑盒購(gòu)自博士德生物、博奧森生物技術(shù)有限公司。結(jié)果判定：以van Heerden等〔2〕標(biāo)準(zhǔn)細(xì)胞核或細(xì)胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒者為陽(yáng)性。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS11.5統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行χ2檢驗(yàn)及Fisher精確概率法。

2 結(jié) 果

2.1RECK蛋白陽(yáng)性表達(dá)比較 OSCC組陽(yáng)性高表達(dá)率〔42.86%(24/56)〕顯著低于正常口腔黏膜OSCC組〔78.05%(32/41)，P<0.05〕。

RECK蛋白在胞質(zhì)與胞核內(nèi)呈彌漫性淡黃色、棕黃色特異性表達(dá)，陽(yáng)性細(xì)胞以上皮基底層較為密集，細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)均有著色，且多為強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)主要表現(xiàn)在基底細(xì)胞層和棘層，粒層中也有部分出現(xiàn)陽(yáng)性表達(dá)，在細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核均有著色呈淡黃色、棕黃色顆粒染色，在上皮基底層細(xì)胞表達(dá)較為密集。RECK蛋白在OSCC呈點(diǎn)片狀或區(qū)域性分布，且多為弱陽(yáng)性或陰性表達(dá)。

2.2RECK蛋白表達(dá)與臨床病理關(guān)系 RECK蛋白表達(dá)與患者性別、腫瘤分化程度無(wú)明顯相關(guān)(P>0.05)，與病理分級(jí)、有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(P<0.05)，見(jiàn)表1。

表1 OSCC中RECK蛋白表達(dá)與臨床病理特征關(guān)系〔n(%)〕

3 討 論

RECK基因在人體正常組織中呈陽(yáng)性表達(dá)，在一些惡性腫瘤中表達(dá)缺失。近年研究發(fā)現(xiàn)一種轉(zhuǎn)錄抑制基因即RECK基因可通過(guò)抑制多種基質(zhì)金屬蛋白酶(MMPs)〔3〕而抑制腫瘤的侵襲與轉(zhuǎn)移。研究表明RECK基因參與了許多老年患者惡性腫瘤的浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移，如在乳腺腫瘤、口腔腫瘤、腎腫瘤、肺腫瘤及子宮腫瘤等〔4，5〕中均發(fā)現(xiàn)有RECK基因的改變。且該基因與許多惡性腫瘤的浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移和預(yù)后差有密切聯(lián)系。研究發(fā)現(xiàn)，RECK基因的表達(dá)受多種因素調(diào)控，已知RECK可調(diào)節(jié)MMP-2、 MMP-9 及MMP-14 3種MMPs轉(zhuǎn)錄〔6，7〕。細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)的降解與基膜重構(gòu)是腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移中最重要的過(guò)程。有證據(jù)表明，MMPs屬于水解酶的一類，能水解所有ECM成分，對(duì)腫瘤細(xì)胞的黏附能力產(chǎn)生重要影響，其中MMP-2 的表達(dá)與腫瘤的侵襲能力及惡性程度密切相關(guān)，為腫瘤生物學(xué)中一個(gè)重要因素〔8～10〕。近年來(lái)，對(duì) MMPs 抑制劑的研究已越來(lái)越引起人們的重視，目前發(fā)現(xiàn)MMPs有超過(guò)20種〔11〕，屬于蛋白水解酶中一個(gè)分支，依據(jù)其降解底物的產(chǎn)物和排列序列的不同，可將 MMPs 分為間質(zhì)降解素、膠原酶等五大類。而目前對(duì)MMPs及RECK的作用機(jī)制尚不清楚。Namwat等〔12〕發(fā)現(xiàn)RECK在膽管正常上皮組織表達(dá)過(guò)高，鄧燕飛等〔13〕檢測(cè)了60例原發(fā)性鼻咽癌患者，伴頸淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組鼻咽癌的陽(yáng)性表達(dá)率明顯低于慢性鼻咽癌無(wú)頸淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組。從而進(jìn)一步提示了在鼻咽癌患者中，RECK基因的表達(dá)異?？赡芘c鼻咽癌疾病的進(jìn)展有關(guān)，參與鼻咽癌的侵襲轉(zhuǎn)移過(guò)程。RECK 可作為評(píng)估鼻咽癌頸淋巴轉(zhuǎn)移及再次復(fù)發(fā)的生物學(xué)參考指標(biāo)。

RECK在一些老年人臨床腫瘤中例如顱底脊索瘤、乳腺癌及成釉細(xì)胞瘤都能發(fā)現(xiàn)。有研究表明RECK基因在乳腺癌中表達(dá)明顯下降，但MMP-9表達(dá)相對(duì)升高，考慮與腫瘤分期及無(wú)明顯關(guān)系。RECK基因作為一種新發(fā)現(xiàn)的抑制腫瘤轉(zhuǎn)移基因，在老年患者腫瘤的發(fā)展、轉(zhuǎn)移過(guò)程中起重要作用。Noda等〔14〕將通過(guò)轉(zhuǎn)染RECK基因的HTI080細(xì)胞株接種裸鼠，發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)染RECK組的腫瘤細(xì)胞出現(xiàn)死亡。

綜上，RECK蛋白在老年OSCC患者中表達(dá)明顯下降，RECK蛋白表達(dá)與老年患者性別、腫瘤分化程度無(wú)明顯相關(guān)，與病理分級(jí)、有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)。RECK基因在腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移過(guò)程中起到重要作用。