Yes相關(guān)蛋白與老年患者抗PLA2R抗體相關(guān)膜性腎病病理分期及腎小球濾過率的相關(guān)性

羅貞 史添立 羊垂舜 (海口市人民醫(yī)院腎病風(fēng)濕科，海南 海口 570208)

膜性腎病(MN)是一種原發(fā)性腎小球疾病，主要表現(xiàn)為蛋白尿且血尿不突出〔1〕。MN可見于任何年齡人群，但多見于中老年患者。在我國，MN是老年原發(fā)性腎病綜合征患者中最常見的病理類型。MN的診斷主要是依據(jù)病史、體格檢查和腎臟穿刺病理等，主要的病理特點是腎小球基底膜均勻一致增厚，免疫熒光可見IgG、C3呈細(xì)顆粒狀彌漫性沉積〔2〕。且近年來發(fā)現(xiàn)在大多數(shù)MN患者中具有M型磷脂酶A2受體(PLA2R)抗體，因此也成為診斷MN的重要指標(biāo)〔3〕。然而研究表明PLA2R陽性和陰性患者的血清肌酐(SCr)和蛋白尿水平無顯著差異〔2〕；另外，PLA2R在MN中的作用機制也尚未明確。因此亟待為抗PLA2R抗體相關(guān)MN的診斷和治療開發(fā)新的分子靶標(biāo)。

Yes相關(guān)蛋白(YAP)是Hippo信號通路重要的下游效應(yīng)分子，其參與調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖和凋亡、細(xì)胞接觸性抑制等病理生理過程〔4〕。近年來，YAP被發(fā)現(xiàn)與多種腎臟疾病相關(guān)，如急性腎損傷和糖尿病腎病等〔5〕。YAP在急性腎損傷的修復(fù)過程中扮演雙重角色，既可以在腎組織輕微受損時促進(jìn)損傷細(xì)胞修復(fù)，然而在嚴(yán)重?fù)p傷上會促進(jìn)腎纖維化發(fā)展〔6〕。YAP與局灶性多囊腎病、糖尿病腎病等疾病的臨床特征相關(guān)性已被研究〔7〕；另外前人已在動物中探究了YAP在腎小球濾過屏障破壞、腎小管細(xì)胞上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化等病理過程的作用〔8〕，但目前尚無YAP與抗PLA2R抗體相關(guān)MN的臨床研究。本研究旨在探究YAP與抗PLA2R抗體相關(guān)MN患者的臨床特征的相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1一般資料 收集2019年1月至2020年6月海口市人民醫(yī)院收治的100例老年MN患者，經(jīng)活檢穿刺病理檢查和免疫組化分析，有71例為PLA2R抗體陽性MN患者。排除此前有經(jīng)激素或免疫抑制劑治療、不能配合完成所有檢測和隨訪的患者21例，剩余50例為PLA2R抗體相關(guān)MN患者組。另選取50例經(jīng)活檢穿刺診斷為腎腫瘤的老年患者行手術(shù)切除的癌旁正常組織作為對照組。對照組男27例，女23例，年齡(69.86±6.32)歲；MN組男25例，女25例，年齡(67.92±4.38)歲。兩組基本資料無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)，具有可比性。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)，且所有患者及其家屬簽署知情同意書。

1.2方法 所有患者腎組織樣本經(jīng)石蠟包埋后切片，厚度2～3 μm，進(jìn)行免疫組化染色。觀察PLA2R和YAP的表達(dá)差異。對YAP染色結(jié)果進(jìn)行免疫組化評分。空腹8 h后采集患者靜脈血測量，通過溴甲酸氯法測定血清白蛋白(SAlb)，通過尿素酶法測定尿素氮(BUN)，通過苦味酸法測定SCr，比色法測定尿酸(UA)，免疫法測定胱抑制素(Cys)-C、尿微量白蛋白(U-MA)和尿蛋白(UP)，通過SCr水平計算腎小球濾過率(GFR)。

1.3統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS19.0軟件進(jìn)行t檢驗、χ2檢驗、Spearman相關(guān)性分析及多因素Logistic回歸分析。

2 結(jié) 果

2.1YAP和PLA2R免疫組化評分比較 MN腎組織中YAP和PLA2R的免疫組化評分顯著高于正常腎組織(P<0.05)，且MN分期越高，YAP和PLA2R評分越高，見表1。

表1 YAP免疫組化評分比較分)

2.2YAP與PLA2R的相關(guān)性 在50例抗PLA2R抗體相關(guān)MN患者中，YAP表達(dá)和PLA2R表達(dá)呈正相關(guān)性(R2=0.506 3，P<0.000 1)，見圖1。

圖1 YAP與PLA2R相關(guān)性

2.3YAP表達(dá)對老年抗PLA2R抗體相關(guān)MN患者臨床特征的影響 MN患者中YAP評分平均為4.60分，因此以YAP評分≤4為標(biāo)準(zhǔn)將50例患者分為YAP低表達(dá)組(n=16)和YAP高表達(dá)組(n=34)。相比于YAP低表達(dá)組，YAP高表達(dá)組MN分期較高，SAlb和GFR水平顯著降低，而BUN、SCr和Cys-C水平顯著更高(P<0.05，P<0.01)，見表2。

表2 YAP表達(dá)的單因素分析

2.4YAP高表達(dá)的風(fēng)險因素分析 將MN分期、SAlb、BUN、SCr、Cys-C和GFR納入多因素Logistic回歸分析，結(jié)果顯示在老年抗PLA2R抗體相關(guān)MN中，SCr增加和GFR降低與YAP高表達(dá)具有相關(guān)性(P<0.05)。見表3。

表3 YAP表達(dá)的多因素Logistic回歸分析

3 討 論

MN是成人腎病綜合征的常見疾病，近年來MN的患病率逐年增加。老年人MN的發(fā)病率為13例/100萬例/年，據(jù)統(tǒng)計老年患者M(jìn)N的相對患病率高達(dá)37.4%〔9〕。相比于年輕人，老年MN的預(yù)后很差，這與患者自身基礎(chǔ)疾病、腎功能降低等原因有關(guān)〔10〕。因此開發(fā)老年MN的特異性診斷靶標(biāo)，對老年MN的早期診斷、治療和預(yù)后至關(guān)重要。

PLA2R是一類屬于甘露糖受體家族的跨膜蛋白，其在足細(xì)胞中高表達(dá)〔11〕。一直以來腎組織PLA2R檢測對于MN的診斷具有重要意義。在大多數(shù)研究中報道PLA2R對MN的敏感性為70%左右〔12，13〕。本研究收集的100例MN患者中，PLA2R陽性率為71%，部分患者腎臟中PLA2R表達(dá)量低，加之PLA2R在腎臟損傷中的作用仍然沒有確切定論。因此在探究PLA2R與腎損傷病理機制的同時，還應(yīng)尋找其他更為有效的生物標(biāo)志物。

YAP與心血管疾病、神經(jīng)退行性疾病及腫瘤等疾病都具有相關(guān)性。盡管YAP在MN中很少被研究，但其在腎臟相關(guān)疾病中的作用已得到證實〔14，15〕。正常生理條件下，YAP被認(rèn)為是足細(xì)胞凋亡的生理性拮抗劑，在維持腎小球濾過屏障的完整性、減少尿蛋白生成方面具有重要作用。但在足細(xì)胞損傷后YAP被激活從而介導(dǎo)下游信號參與引發(fā)腎細(xì)胞纖維化〔16〕。YAP在急性腎臟病和慢性腎臟病中的作用有所不同，在慢性腎臟病中，YAP持續(xù)激活導(dǎo)致腎小管分化異常，腎小管間質(zhì)纖維化，低分化的腎小管上皮細(xì)胞持續(xù)增殖，阻礙進(jìn)一步分化，從而促進(jìn)腎纖維化〔17〕。目前已經(jīng)開展了一些YAP抑制劑治療腎臟疾病的動物研究〔18～20〕，結(jié)果顯示在腎損傷大鼠中注射YAP抑制劑可以顯著降低大鼠尿蛋白并抑制腎纖維化發(fā)在。雖然目前尚無PAL2R與YAP相關(guān)性的報道，但YAP與PAL2R的高表達(dá)都與腎小管細(xì)胞損傷有關(guān)，因此YAP與PAL2R的相關(guān)性值得進(jìn)一步探究。此外，YAP的免疫組化評分隨MN嚴(yán)重程度增加而增加。以上結(jié)果說明YAP在PLA2R相關(guān)的MN中可能發(fā)揮重要作用。

SAlb、BUN、SCr、Cys-C和GFR是臨床診斷腎損傷的指標(biāo)。Schwartzman等〔21〕研究顯示在小鼠中YAP敲降導(dǎo)致蛋白尿的形成，且12 w后檢測發(fā)現(xiàn)小鼠SCr水平顯著高于對照組，本研究結(jié)果與其相似，本研究中，YAP高表達(dá)組SCr水平顯著高于YAP低表達(dá)組，而SAlb水平降低，這可能與足細(xì)胞損傷有關(guān)。Rinschen等〔22〕研究表明SCr升高與導(dǎo)致足細(xì)胞損傷有關(guān)，足細(xì)胞損傷進(jìn)而會導(dǎo)致腎小球過濾屏障受損害，使蛋白質(zhì)滲入到尿液中，同時造成血液中BUN增加及GFR降低。這些結(jié)果進(jìn)一步說明YAP高表達(dá)組腎損傷情況更嚴(yán)重。Cys-C是一種半胱氨酸蛋白酶抑制劑，其分子量較小，能從腎小球濾過并完全被腎小管上皮細(xì)胞重吸收，因此在臨床上是反映GFR變化的內(nèi)源性標(biāo)志物。由于Cys-C比起B(yǎng)UN和SCr具有更高的敏感性和特異性，血清Cys-C已經(jīng)成為一些腎臟疾病的生物標(biāo)志物，如糖尿病腎病和對比劑腎病等〔23，24〕。本研究發(fā)現(xiàn)YAP高表達(dá)組Cys-C水平顯著高于YAP低表達(dá)組，這可能也與腎小球過濾屏障受損有關(guān)，但目前未見YAP表達(dá)對Cys-C水平影響的研究，因此YAP水平與MN患者血清Cys-C的相關(guān)性仍需進(jìn)一步研究。本研究仍存在一定局限性，首先樣本量偏少，且僅選擇了PLA2R陽性患者，可能不具有代表性，這可能造成YAP表達(dá)與一些臨床指標(biāo)的相關(guān)性有偏差；其次本研究對象為60周歲以上老年患者，不能準(zhǔn)確反映YAP在各年齡段MN患者中的表達(dá)情況。因此將擴大研究范圍，進(jìn)一步分析YAP與PLA2R相關(guān)MN的相關(guān)性，并開展相關(guān)基礎(chǔ)實驗，探究YAP在PLA2R相關(guān)的MN發(fā)展中的分子機制。為MN的診斷和個性化治療開發(fā)更為精準(zhǔn)的分子靶標(biāo)。

綜上，YAP表達(dá)與PLA2R表達(dá)以及MN分期都具有正相關(guān)性，且SCr和GFR是腎臟組織YAP高表達(dá)的風(fēng)險因素，YAP高表達(dá)與抗PLA2R抗體相關(guān)的老年MN的發(fā)展密切相關(guān)。