穴位按摩對(duì)難治性癲癇大鼠學(xué)習(xí)記憶能力及海馬細(xì)胞因子的影響

華顯嬌

癲癇是一種因神經(jīng)元同步化異常放電導(dǎo)致驚厥反復(fù)發(fā)作的神經(jīng)系統(tǒng)疾病，通常采取藥物治療。常規(guī)抗癲癇藥物對(duì)癲癇的治療會(huì)產(chǎn)生明顯的作用效果，但是仍有20%～30%癲癇患者接受藥物治療后，因抗藥性或其他原因而出現(xiàn)癲癇反復(fù)發(fā)作難以控制，導(dǎo)致病程遷延并發(fā)展成為難治性癲癇(Intractable epilepsy，IE)[1，2]。癲癇的反復(fù)發(fā)作會(huì)導(dǎo)致認(rèn)知功能障礙，其中主要表現(xiàn)為學(xué)習(xí)記憶能力下降[3]，嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量。因此，積極尋找改善癲癇患者學(xué)習(xí)記憶的方法就顯得尤為重要。穴位按摩是中醫(yī)護(hù)理的主要手段，通過(guò)按摩人體特定穴位，來(lái)激發(fā)體內(nèi)的經(jīng)絡(luò)之氣，達(dá)到祛邪扶正、調(diào)整功能，治療疾病的目的。百會(huì)穴與足三里是提高認(rèn)知能力的常見穴位[4]，但是否對(duì)癲癇學(xué)習(xí)記憶能力產(chǎn)生作用，還未見文獻(xiàn)報(bào)道。因此，本研究通過(guò)建立大鼠IE模型，按摩百會(huì)穴與足三里干預(yù)，水迷宮評(píng)估學(xué)習(xí)記憶能力的變化，并探討其作用的可能機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物SD大鼠，SPF級(jí)，體質(zhì)量150～200 g，購(gòu)買于河南省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，許可證號(hào)：SCXK(豫)2019-0003。統(tǒng)一飼養(yǎng)，動(dòng)物自由飲食、飲水，室內(nèi)溫度保持在20～25 ℃，空氣相對(duì)濕度保持在40%～50%。

1.1.2 實(shí)驗(yàn)藥品和試劑海人酸(美國(guó)Sigma公司生產(chǎn))；腫瘤壞死因子-α(TNF-α)試劑盒、白細(xì)胞介素-1β(IL-1β)試劑盒、白細(xì)胞介素-6(IL-6)試劑盒均購(gòu)自南京建成生物工程研究所，試劑批號(hào)皆為20190915等。

1.1.3 實(shí)驗(yàn)儀器和設(shè)備DW-2000大鼠腦立體定位儀(四川成都泰盟儀器有限公司)；WMT-100型Morris水迷宮(四川成都泰盟儀器有限公司)；HBS-1096C酶標(biāo)分析儀(南京德鐵實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司)等。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 實(shí)驗(yàn)分組與建模選取60只SPF級(jí)雄性大鼠，隨機(jī)分為空白組、模型組、干預(yù)組，每組20只。其中空白組只手術(shù)，不給藥。模型組與干預(yù)組參照文獻(xiàn)[5]建立癲癇模型，其中模型組不給予任何干預(yù)，常規(guī)飼養(yǎng)。干預(yù)組建模后采取百會(huì)穴與足三里穴按摩干預(yù)，具體干預(yù)過(guò)程參照文獻(xiàn)[4]，連續(xù)14 d。

1.2.2 Morris水迷宮檢測(cè)大鼠學(xué)習(xí)記憶能力按摩干預(yù)14 d后，參照文獻(xiàn)[6]檢測(cè)各組大鼠學(xué)習(xí)記憶水平。

1.2.3 酶聯(lián)免疫法(ELISA)檢測(cè)海馬細(xì)胞因子水迷宮實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，立即斷頭處死大鼠，打開顱骨，取出腦組織，然后快速在冰面上通過(guò)手術(shù)刀剝離大鼠海馬組織，制成10%的組織勻漿，離心后取上清液檢測(cè)。嚴(yán)格按照試劑盒使用說(shuō)明，采用ELISA法檢測(cè)細(xì)胞因子TNF-α、IL-6和IL-1β含量。

2 結(jié)果

2.1 Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.1.1 定位航行實(shí)驗(yàn)結(jié)果定位航行實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，各組逃避潛伏期的時(shí)間隨訓(xùn)練時(shí)間的延長(zhǎng)逐漸縮短。與對(duì)照組比較，模型組逃避潛伏期的時(shí)間明顯延長(zhǎng)，兩者差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；而與模型組比較，干預(yù)組逃避潛伏期的時(shí)間明顯縮短，兩者差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

表1 3組大鼠定位航行實(shí)驗(yàn)結(jié)果比較 (只，

2.1.2 空間探索實(shí)驗(yàn)結(jié)果空間探索實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，與對(duì)照組比較，模型組目標(biāo)象限停留的時(shí)間與穿越平臺(tái)的次數(shù)都明顯減少，兩者差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；而與模型組比較，干預(yù)組目標(biāo)平臺(tái)象限停留的時(shí)間與穿越平臺(tái)的次數(shù)都明顯增加，兩者差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

表2 3組大鼠空間探索實(shí)驗(yàn)結(jié)果比較 (只，

2.2 海馬細(xì)胞因子(TNF-α、IL-6和IL-1β)含量與對(duì)照組比較，模型組大鼠海馬組織TNF-α、IL-6和IL-1β含量明顯升高(P<0.05)；與模型組比較，干預(yù)組大鼠海馬組織TNF-α、IL-6和IL-1β含量明顯降低(P<0.05)。見表3。

表3 3組大鼠TNF-α、IL-6和IL-1β含量比較 (只，

3 討論

據(jù)統(tǒng)計(jì)學(xué)數(shù)據(jù)顯示全球癲癇患者的數(shù)量接近7000萬(wàn)，其中我國(guó)癲癇患者更以每年40萬(wàn)的速度增長(zhǎng)[7]。癲癇的反復(fù)發(fā)作通常會(huì)導(dǎo)致學(xué)習(xí)記憶功能障礙，但具體機(jī)制不清。百會(huì)穴是督脈、小腸經(jīng)、三焦經(jīng)、大腸經(jīng)、膽經(jīng)、胃經(jīng)、膀胱經(jīng)的交會(huì)穴。因此，百會(huì)穴對(duì)腦與脊髓的調(diào)節(jié)有舉足輕重的作用，具有滋養(yǎng)腦髓、醒腦開竅的功效。足三里屬于下合穴，匯聚了天部精華。因此，將百會(huì)穴與足三里配合使用符合遠(yuǎn)近穴位相配的原則，具有健腦調(diào)神、固本扶正的作用[8，9]。通過(guò)本研究發(fā)現(xiàn)經(jīng)過(guò)按摩百會(huì)穴與足三里后大鼠逃避潛伏期的時(shí)間明顯縮短，而目標(biāo)平臺(tái)象限停留的時(shí)間與穿越平臺(tái)的次數(shù)明顯增加，這表明穴位按摩干預(yù)提高了癲癇大鼠學(xué)習(xí)記憶能力。

免疫炎癥反應(yīng)被認(rèn)為是癲癇產(chǎn)生的一種潛在機(jī)制，癲癇的形成是由于各種原因?qū)е碌难装Y反應(yīng)，通過(guò)炎癥反應(yīng)引起神經(jīng)元興奮性升高，異常放電，引起癲癇發(fā)作；同時(shí)癲癇發(fā)作釋放的大量炎性因子，導(dǎo)致神經(jīng)系統(tǒng)損傷加重，引起癲癇反復(fù)發(fā)作，形成IE的病理基礎(chǔ)[10]。TNF-α、IL-6和IL-1β是常見的炎性因子，是機(jī)體組織炎性反應(yīng)的標(biāo)志。通過(guò)本實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)干預(yù)組海馬組織TNF-α、IL-6和IL-1β表達(dá)明顯降低，說(shuō)明癲癇大鼠海馬組織炎性反應(yīng)降低，海馬神經(jīng)元損傷減少。

綜上所述，按摩百會(huì)穴與足三里穴能夠明顯提高IE大鼠學(xué)習(xí)記憶能力水平，其作用機(jī)制可能是通過(guò)抑制海馬組織內(nèi)的炎性反應(yīng)來(lái)實(shí)現(xiàn)的。