UPLC-MS法測定卡泊三醇中催化劑四丁基氟化銨殘留量

呂興祥

摘要目的：建立超高效液相色譜-質譜連用法測定卡泊三醇原料藥中催化劑四丁基氟化銨殘留量的方法。方法：色譜柱為Waters HILIC （2.1mm×100mm，1.7μm），流動相：乙腈-0.01mol·L-1甲酸銨（PH3.0）80：20，流速0.3mL·min-1，通過UPLC-MS電噴霧離子源正離子模式進行檢測。結果：本法線性范圍為0.0042～0.0419μg·mL-1（r=0.9992）;檢出測限為0.1ng·mL-1，定量限為0.2ng·ml-1;回收率為90.9%。結論：本方法操作簡便，結果準確，可以用于原料藥卡泊三醇中催化劑四丁基氟化銨的含量測定。

關鍵詞：催化劑 四丁基氟化銨 UPLCMS

卡泊三醇，分子式C27H40O3，是維生素D的衍生物，能夠與細胞表面VD3受體結合調控細胞內DNA和角蛋白合成，抑制皮膚細胞的過度增生和誘導分化，從而糾正銀屑病皮膚細胞的增生及分化異常。同時能夠調節細胞炎性因子的釋放，起到抗炎作用。卡泊三醇是目前治療局限性銀屑病最有效的非糖皮質激素外用藥之一，對于頭皮等特殊部位的銀屑病治療效果更佳。在卡泊三醇的合成過程中，二甲基叔丁基硅醚（TBDMS）作為必要的羥基保護劑，在合成的最后都會利用四丁基氟化銨（TBAF）脫去TBDMS而得到卡泊三醇。

隨著藥品安全意識的不斷提高，國家不斷加強藥品的監管力度，對于雜質的監控也跟家嚴格。在有機合成中TBAF常被用為硅醚保護基團的去保護試劑，也經常被用為相轉移催化劑以及溫和的有機堿，其對機體有一定的毒性和刺激性，需要特別控制。由于TBAF在成品中殘留量較少，本文建立了利用UPLCMS法來監測，方法操著簡單，選擇性好，靈敏度高。

1.儀器與試劑

儀器：Waters UPLC-IClass-SQD2（waters公司），XP6百萬分之一天平（梅特勒公司），Milli-Q Integral 超純水系統（美國密理博公司）

試劑：超純水（自制），甲醇、乙腈、甲酸、甲酸銨均為色譜級（美國默克公司），四丁基氟化銨對照品（Sigma-Aldrich），卡泊三醇原料藥客戶提供。

2.測定條件

2.1色譜質譜條件：

2.2溶液配制

2.2.1 空白溶劑：乙腈

2.2.2 對照品儲備液：取四丁基氟化銨標準品適量，以空白溶劑配制成2μg·mL-1的溶液，作為標準品儲備液。

2.2.3 標準曲線溶液配制：精密量取一定量的標準品儲備液，加乙腈配制成每1ml含四丁基氟化銨4，10，16，20，40ng的對照品工作液。

2.2.4 供試品溶液配制：精密稱取20mg供試品至10mL容量瓶中，以溶劑溶解并稀釋至刻度搖勻并定容，即得2mg·mL-1的供試品溶液。

3.結果與分析

3.1 專屬性

取空白溶劑、供試品溶液、供試品加標溶液，按“2.1”項下方法采集數據，考察方法專屬性。試驗結果表明，空白溶劑、供試品對于檢測都沒有干擾。結果見圖一。

3.2檢測限和定量限

取四丁基氟化銨儲備液逐步稀釋，進行測定，檢測限為0.1ng·mL-1（以3倍信噪比計），定量限為0.2ng·mL-1（以10倍信噪比計）

3.3 線性

取“2.2.3”項下標準曲線溶液，按“2.1”項下方法進行測定，以四丁基氟化銨的質譜響應為Y軸，濃度為X軸做標準曲線，方程為y=8445.733.1175X-582.5889，r=0.9992，線性范圍4～40ng·mL-1。線性擬合曲線見圖1。

3.4 準確度

取卡泊三醇供試品適量，置于10mL容量瓶中，分別精密加入2.2.2 項下四丁基氟化銨對照品儲備液50μL、100μL、150μL，各水平平行配制三份。精密量取1μL注入液相質譜儀，按“2”項下方法進行測定，帶入標準曲線進行計算。平均回收率90.9%，RSD 2.7%，方法回收率良好，此方法可準確測定卡泊三醇中四丁基氟化銨的殘留量。

3.5 精密度

取精密移取2.2.3項下濃度為2ng·mL-1的對照品溶液溶液1μL，注入串聯四級桿液質聯用儀，連續測定六次，記錄數據并進行統計。保留時間RSD為0.39%，峰面積RSD為2.57%精密度良好，結果見表三。

4 樣品測定

取卡泊三醇20mg至10ml容量瓶中，以空白溶劑溶解并定容，作為供試品溶液，平行配制兩份。取供試品溶液1μl，分別注入串聯四級桿液質聯用儀，記錄色譜圖。三批卡泊三醇供試品中四丁基氟化銨均低于檢出限，低于0.001%的質量標準，符合質檢要求。結果見表4。

參考文獻

[1]卡泊三醇的合成[J]. 伍廣生，張慶文.中國醫藥工業雜志，2015（03）.

[2]鈣泊三醇倍他米松軟膏與卡泊三醇軟膏聯合NB-UVB治療穩定期尋常性銀屑病療效比較[J]. 劉強，王愛學，李玉平，崔光雪，馬喜興，馬海霞，郭兵申，王欣欣.中國皮膚性病學雜志，2013（04）.

[3]四丁基氟化銨的合成及其應用研究進展[J].李琳，魏鵬飛，唐甜，楊豐科.合成化學.2018，26（04）.

[6]UPLC-MS/MS法測定硫辛酸中催化劑四丁基溴化銨的殘留量[J].劉繼華，吳凡，劉屹，李志遠，陳祖芬.藥物分析雜，2011（07）.

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