高效液相色譜-串聯質譜法測定蓮菜中嘧菌酯殘留

馬增輝

摘 要：本文參照NY/T 1453—2007，建立了高效液相色譜-串聯質譜法測定蓮菜中嘧菌酯殘留的檢測方法。實驗表明，在49.91～499.1 ng/mL范圍內，嘧菌酯的峰面積與濃度線性關系良好，標準曲線方程為f（x）=6 484.72x+89 005.6，r=0.998 24，檢出限為0.01 mg/kg，加標回收率為74.48%～87.65%，RSD為0.88%～3.41%，該方法精密度與穩定性良好，均符合相關標準規定，適用于蓮菜中嘧菌酯殘留的檢測。

關鍵詞：蓮菜;嘧菌酯;高效液相色譜-串聯質譜法

嘧菌酯是一種新型的人工合成仿生型內吸性殺菌劑，具有廣譜、高效、低毒等優點，且與其他殺菌劑無相互抗性，被廣泛用于果蔬、農作物的病害防治與儲藏保鮮[1]。蓮菜屬于蓮科水生蔬菜，兼具食藥兩用功效，國內多地均有栽培，深受人們的喜愛。在蓮藕生長期施用嘧菌酯等農藥可有效防治對其產量與品質影響最大的葉斑病，然而用藥過量易造成蓮藕中農藥殘留，對食用者身體健康與產業發展極為不利，所以有必要加強對蓮菜中嘧菌酯殘留風險的評估[2]。在果蔬產品嘧菌酯殘留測定的常規方法中，色譜法在檢測靈敏度與定性確證方面存在缺陷，液相色譜-串聯質譜法（HPLC-MS）靈敏度較高，定性準確，但由于不同果蔬產品試樣基質效應不同，現行標準方法無法直接應用，因此，本研究參照《蔬菜及水果中多菌靈等16種農藥殘留測定液相色譜-質譜-質譜聯用法》（NY/T 1453—2007）[3]，建立了HPLC-MS法測定蓮菜中嘧菌酯殘留的方法。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

1.1.1 材料與試劑

蓮菜（購自某超市）;嘧菌酯標準溶液（BePure，批號C0007041）;甲醇、乙腈、乙酸乙酯、正己烷、丙酮、甲酸均為色譜純;乙酸銨為分析純;硅膠固相萃取小柱（500 mg/6 mL）;實驗室一級超純水。

1.1.2 儀器與設備

LC-MS-8050島津液相色譜質譜聯用儀（配ESI離子源）;ML 204T/02電子天平（精度0.000 1 g）;均質儀;高速離心機;渦旋混合器;旋轉蒸發儀;氮氣吹掃儀;固相萃取裝置等。

1.2 試樣處理方法

1.2.1 試樣提取

將樣品充分攪碎混勻，準確稱取試樣約20 g置于150 mL燒杯中，加入60 mL乙酸乙酯，使用均質儀提取2 min，用濾紙過濾收集濾液于100 mL具塞比色管中，用40 mL乙酸乙酯分3次淋洗殘渣，將淋洗液收集于上述比色管中，靜置10 min，待乙酸乙酯與水兩相分層后，準確吸取50.0 mL乙酸乙酯層試液，在40 ℃下旋蒸濃縮近干，用氮吹儀吹干，加入2 mL丙酮+正己烷（10+90）溶解，待凈化。

1.2.2 凈化處理

將固相萃取柱連接到固相萃取裝置，依次加入10 mL丙酮、5 mL正己烷進行預處理，將待凈化試液移入固相萃取小柱中，加入5 mL丙酮+正己烷（10+90），舍棄流出液。再用20 mL甲醇+丙酮（50+50）分4次洗脫，收集洗脫液于40 ℃下旋蒸至約2 mL，用氮吹儀吹干，加入甲醇溶解定容至2 mL，上機待測。

1.3 標準溶液配制

1.3.1 標準儲備液配制

準確吸取1 mL嘧菌酯標準溶液，用乙腈定容至10 mL，配制濃度為99.82 ?g/mL的標準儲備液。

1.3.2 基質標準工作液配制

準確吸取0.1 mL嘧菌酯標準儲備液，用甲醇定容至10 mL，配制成濃度為998.2 ng/mL的標準中間液。再使用空白樣品提取液稀釋配制成49.91 ng/mL、99.82 ng/mL、199.64 ng/mL、249.55 ng/mL和499.1 ng/mL的基質標準工作系列。

1.4 儀器工作條件

1.4.1 液相條件

色譜柱：YMC-Triart C18柱（100 mm×2.1 mm），柱溫40 ℃;流動相：乙腈+2 mmoL/L乙酸銨溶液，流速0.20 mL/min，梯度洗脫;進樣量，2 ?L。梯度洗脫程序見表1。

1.4.2 質譜條件

離子源類型：ESI離子源，溫度：300 ℃;霧化器流速：3.0 L/min，干燥氣流速：10 L/min;掃描方式：MRM，掃描模式，正離子。離子對詳情見表2。

2 結果與分析

2.1 線性范圍及檢出限

將配制的基質標準工作系列在上述儀器條件下進行測定，以工作系列點質量濃度為橫坐標，相應的峰面積為縱坐標繪制標準工作曲線。嘧菌酯在49.91～499.1 ng/mL范圍內線性關系良好，線性回歸方程為f（x）=6 484.72x+89 005.6，相關系數r=0.998 24。根據3倍信噪比的峰響應值計算方法檢出限，得該方法的檢出限為0.01 mg/kg。

2.2 方法回收率與重復性

向某陰性蓮菜試樣中添加檢出限、限量值、10倍檢出限3種濃度水平的嘧菌酯標準溶液，按照上述試樣處理過程、儀器測定條件將每個濃度平行測定6次，計算加標回收率與RSD，結果見表3。該方法的回收率為74.48%～87.65%，RSD為0.88%～3.41%。

2.3 精密度與穩定性試驗

取濃度為49.91 ng/mL的蓮菜基質標準工作溶液，連續測定6次并記錄峰面積，計算RSD為2.90%，表明該方法精密度良好。取濃度為49.91 ng/mL的蓮菜基質標準工作溶液，在24 h內每隔4 h測定一次并記錄峰面積，計算RSD為2.48%，表明該方法穩定性良好。

3 結論

本研究參照NY/T 1453—2007，建立了HPLC-MS法測定蓮菜中嘧菌酯殘留的方法，該線性關系良好，檢出限、回收率、精密度及穩定性符合JJF 1317—2011[4]與GB/T 27404—2008[5]的相關要求，能夠滿足實驗室對蓮菜中嘧菌酯殘留的檢測需求，可為相關部門加強蓮菜中嘧菌酯殘留風險監測提供支持。

參考文獻

[1]杜鑫，李國烈，蘇旭，等.超高效液相色譜-串聯質譜法測定草莓中嘧菌酯的殘留量[J].理化檢驗（化學分冊），2018，54（12）：1445-1448.

[2]孫光忠，劉元明，匡輝，等.三種殺菌劑對蓮藕葉斑病的田間防效[J].廣西植保，2018，31（4）：6-8.

[3]中華人民共和國農業部.蔬菜及水果中多菌靈等16種農藥殘留測定液相色譜-質譜-質譜聯用法：NY/T 1453—2007[S].北京：農業出版社，2007.

[4]國家質量監督檢驗檢疫總局.液相色譜-質譜聯用儀校準規范：JJF 1317—2011[S].北京：中國質檢出版社，2011.

[5]中華人民共和國國家質量監督檢驗檢疫總局，中國國家標準化管理委員會.實驗室質量控制規范 食品理化檢測：GB/T 27404—2008[S].北京：中國標準出版社，2008.