油桐花水提物對大鼠燙傷創面的促愈作用研究

2021-09-15 08:34:42王永萍

現代中藥研究與實踐 2021年4期

彭健，王永萍，劉欣

（貴州中醫藥大學基礎醫學院，貴州貴陽 550002）

燒燙傷是指人們在生活或工作中被沸水、油燙傷，或者是被火、電、化學藥物等灼燒，引起皮膚起泡或深層組織感染、潰爛、形成疤痕，甚至傷及內臟的一種復雜的外科疾病[1]。西醫常采用抗生素和手術治療燒燙傷，雖有一定的療效，但患者常常出現創面收斂緩慢、耐藥菌產生以及機體免疫功能降低等不良反應。由于燒燙傷破壞了皮膚的防御功能，并且大量的壞死組織和細胞在創面生成，容易滋生細菌，造成感染[2-3]。因此，縮短燙傷創面的愈合時間，對于燒燙傷病人的恢復具有重要意義。中醫認為燒燙傷屬于“火毒、熱毒”，常因火毒熱氣內攻，致皮肉潰爛，加重病情[4]。油桐花（Tung flower）又稱桐子花，具有清熱、解毒、化瘀、收斂生肌等作用[5]，已有古人用其治療燒燙傷，常能獲得療效。本實驗擬通過觀察油桐花水提物對燙傷大鼠創面愈合率及體重的影響，證明其對燙傷創面的促愈作用，為油桐花水提物在臨床的推廣應用提供科學依據。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實驗動物從長沙天勤生物公司購SPF級Wistar雄性大鼠60只，體質量為（150 ± 15） g。動物許可證：SCXK（湘）2019-0013；實驗動物合格證編號：NO.1107262011001163。

1.1.2 藥品與試劑硫化鈉（批號：20191210，中國醫藥集團有限公司）；濕潤燒傷膏（批號：13923911455，汕頭市美寶制藥有限公司）；蘇木素染液（批號：C200301，珠海貝索生物技術有限公司）；伊紅染液（批號：C200403，珠海貝索生物技術有限公司）。

1.1.3 主要儀器 QE-300型中藥粉粹機（浙江屹立工貿有限公司）；YLS-5Q型燙傷儀（山東益延科技有限公司）；KD-BM型包埋機（浙江金華科迪儀器設備有限公司）；YD-335型石蠟切片機（浙江金華科迪儀器設備有限公司）。

1.2 方法

1.2.1 藥材處理油桐花是大戟科植物油桐Vernicia fordii(Hemsl.) Airy Shaw的花[6]。油桐樹在四川南部丘陵地帶有廣泛分布，油桐花盛開于三月底至四月，新鮮油桐花采自四川省峨眉山市黃灣鎮，花和蒂一并采摘，并由貴州中醫藥大學孫慶文教授鑒定。日光下曬干，用粉碎機將其粉碎，裝入密封塑料袋，備用。前期課題組研究證明油桐花活性部位為其水提物。

1.2.2 油桐花水提物制備精密稱取油桐花粉末30 g，裝入盛有300 mL蒸餾水的圓底燒瓶，浸泡30 min，恒溫水浴鍋加熱回流2 h，紗布過濾3次，并將紗布中殘留的液體壓出，即得油桐花水提物濃度0.1 g/mL（低劑量）。按上述方法制得油桐花濾液后倒入蒸發皿中，電爐加熱濃縮，制得濃度0.6、0.3 g/mL油桐花水提物，即高劑量、中劑量[6]。

1.2.3 動物造模及給藥參考課題組前期經驗[6-7]，大鼠隨機分組：正常組（n= 10）、造模組（n=50），適應喂養7 d。20%硫化鈉脫背毛，24 h后，造模大鼠腹腔注射10%水合氯醛，充分麻醉后標記燙傷位置，為兩耳連線中點后5 cm。YLS-5Q控溫燙傷儀設置溫度120 ℃，實際溫度約90 ℃，3#燙頭（約2.5 cm2）緊貼皮膚燙傷18 s。燙傷前設置空調溫度為26 ℃，防止大鼠體溫過低而死亡。燙傷3 d后，隨機選模型大鼠1只剪取燙傷全層皮膚，放入4%多聚甲醛溶液固定，做HE染色與正常組對比，證明造模是否成功。造模成功后再分為模型組、陽性組（濕潤燒傷膏組）、油桐花水提物高、中、低劑量組，每組10只，用記號筆標記。分別用棉簽蘸取油桐花水提取物高、中、低劑量溶液對創面進行均勻涂抹，每次1 mL，1次/d。陽性組用棉簽蘸取濕潤燒傷膏均勻涂抹，厚度不超過1 mm，連續21 d，1次/d。正常組和模型組不給藥。

1.2.4 取材用藥21 d后剪取正常組皮膚及各燙傷組燙傷全層皮膚組織，放入4%多聚甲醛固定，備用。

1.2.5 指標檢測給藥前、給藥后每周用相機拍攝各組患處并測量面積和稱體重。藥物干預21 d后，油桐花水提物對燙傷大鼠創面愈合的影響可用創面大體圖片、面積及損傷皮膚HE染色來觀察，并進行分析。

1.2.6 統計學方法用SPSS 25.0軟件進行數據分析，計量資料用均數±標準差±s）表示，多組間比較采用方差分析。以P< 0.05為差異具有統計學意義。

2 結果與分析

2.1 燙傷大鼠模型建立驗證

大鼠皮膚燙傷后1 d顏色灰白、腫脹，與正常皮膚分界清楚，之后壞死皮膚逐漸發黑，失水干燥、發硬，表面凹凸不平，壞死皮膚邊緣翹起。若造模成功，病理切片可見表皮和真皮大面積壞死、皮下肌纖維變性壞死、炎性細胞浸潤、出血等一系列病理改變，見圖1。實驗過程中對翹起的死皮做清創處理，見創面呈粉紅色，邊緣有菲薄的新生上皮形成。同時傷口周圍正常皮膚收縮，使傷口總面積逐漸縮小，各組創面表現基本類似。以油桐花低劑量組為例，大鼠創面及周圍皮膚無紅腫，無膿性分泌物溢出。創面由基底部生長的鮮紅色肉芽逐漸生長出新生皮膚覆蓋創面至完全愈合，符合皮膚創面正常愈合規律。

圖1 大鼠造模前后皮膚組織形態學變化（HE，400×）Fig.1 Histomorphological changes of rats skin before and after modeling（HE，400×）

2.2 油桐花水提物對大鼠燙傷創面的影響

燙傷大鼠創面恢復圖片，見圖2，不同劑量油桐花水提物和濕潤燒傷膏對大鼠燙傷創面恢復有明顯效果，與模型組比較傷口明顯減小。

圖2 油桐花水提物對燙傷大鼠創面的影響（大體圖片）Fig.2 Effects of aqueous extract of Tung flower on scalded wound in rats (general picture)

2.3 大鼠皮膚組織形態學變化

大鼠皮膚HE染色顯示，正常皮膚組織表皮結構完整清晰，角化層明顯，復層扁平上皮層較薄，細胞排列整齊緊密；真皮內膠原纖維排列整齊，胞質紅染、均勻；皮下脂肪層及肌層結構清晰可見，脂肪細胞及肌纖維排列整齊、致密，體積大小均一，細胞核形態正常。模型組皮膚有大批纖維組織增生及炎性細胞，大批皮下組織變性、壞死。與模型組相比，陽性組和高劑量組皮膚組織損傷區域可見部分膠原纖維交錯排列和較多的纖維細胞，少量炎性細胞浸潤，以淋巴細胞為主，提示皮膚組織損傷修復程度相對最好；低劑量組和中劑量組皮膚組織損傷區域可見較多的纖維細胞，炎性細胞較少，提示皮膚組織損傷修復程度相對較好，見圖3。

圖3 油桐花水提物對燙傷大鼠皮膚組織病理變化的影響（HE，400×）Fig.3 Effects of aqueous extract of Tung flower on the pathological changes of skin tissue in scalded rats（ HE，400×）

2.4 油桐花水提物對燙傷大鼠體重的影響

大鼠造模后體重增長緩慢。給藥14 d后，模型組大鼠體重低于正常組（P< 0.01）；陽性組、油桐花水提物各劑量組體重均高于模型組（P< 0.05）。給藥21 d后，模型組大鼠體重仍低于正常組（P< 0.01）；陽性組、油桐花水提物各劑量組體重均高于模型組（P< 0.01），見表1。

表1 油桐花水提物對大鼠體重的影響（±s，g）Tab .1 Effects of aqueous extract of Tung flower on body weight of rats（±s，g）

注：模型組與正常組相比，#P < 0.05，##P< 0.01；其余組與模型組相比，*P < 0.05，**P< 0.01。

組別 n 給藥前 7 d 14 d 21 d正常組 10 208.2 ± 15.9 239.7 ± 12.3 288.6 ± 8.4 329.7 ± 8.4模型組 10 214.7 ± 16.2 242.6 ± 13.1 273.1 ± 10.3##305.8 ± 5.9##陽性組 10 213.4 ± 16.1 240.3 ± 16.8 289.2 ± 9.8** 327.2 ± 10.2**油桐花水提物10 222.6 ± 6.4 252.0 ± 5.4 288.3 ± 4.4** 326.7 ± 3.7**油高桐劑花量水組提物10 221.4 ± 8.5 251.0 ± 9.2 291.6 ± 7.6** 325.7 ± 11.1**油中桐劑花量水組提物10 218.4 ± 14.1 245.3 ± 19.0 284.7 ± 16.4* 321.1 ± 14.1**低劑量組F 1.621 1.561 4.249 18.389 P 0.17 0.194 0.006 0.000

2.5 油桐花水提物對燙傷大鼠傷口面積及愈合率的影響

分別在給藥前1 d，給藥后7、14、21 d，對傷口創面攝影，并采用描記稱重法測定，即燙傷后2 d的創面面積作為燙傷面積，用透明的方格紙鋪在燙傷處，描出對應時間的創面面積，按描下的筆跡剪下，以此為模板將質地均勻的硬紙片剪成同樣大小，以質量代替面積，創面愈合率（%）=（燙傷面積-各時相點面積）/燙傷面積×100%。

給藥7 d后，陽性組和油桐花水提物高、中劑量組比模型組大鼠創面小、愈合率高（P< 0.05、P<0.01）；陽性組比中劑量組創面大、愈合率低（P<0.05）。給藥14 d后，陽性組和油桐花水提物各組比模型組大鼠創面明顯縮小、愈合率明顯升高（P<0.05、P< 0.01）。給藥21 d后，陽性組和油桐花水提物各組比模型組創面均明顯縮小、愈合率均明顯升高（P< 0.01）；中劑量組比陽性組大鼠創面小、愈合率高（P< 0.05），見表2、表3。

表2 油桐花水提物對大鼠傷口面積的影響（±s，cm2）Tab. 2 Effects of aqueous extract of Tung flower on wound area in rats（±s，cm2）

注：與模型組相比，#P < 0.05，##P< 0.01；與陽性組相比，*P < 0.05，**P< 0.01。

組別 n 7 d 14 d 21 d模型組 10 1.77 ± 0.10* 1.01 ± 0.14* 0.56 ± 0.11**陽性組 10 1.62 ± 0.18# 0.86 ± 0.15# 0.22 ± 0.11##油桐花水提物10 1.49 ± 0.16## 0.81 ± 0.16## 0.27 ± 0.11##高劑量組油桐花水提物10 1.37 ± 0.12##* 0.76 ± 0.06## 0.11 ± 0.05##*油中桐劑花量水組提物10 1.66 ± 0.18 0.89 ± 0.15# 0.34 ± 0.11##低劑量組F 10.614 4.362 25.644 P 0.000 0.005 0.000

表3 油桐花水提物對大鼠傷口愈合率的影響（±s，%）Tab. 3 Effects of aqueous extract of Tung flower on wound healing rate of rats（ ±s，%）

注：與模型組相比，#P < 0.05，##P< 0.01；與陽性組相比，*P < 0.05，**P< 0.01。

組別 n 7 d 14 d 21 d模型組 10 29.24 ± 4.06* 59.76 ± 5.86* 76.56 ± 5.99**陽性組 10 35.20 ± 7.38# 65.44 ± 5.99# 91.04 ± 4.32##油桐花水提物10 40.60 ± 6.19## 67.60 ± 6.59## 89.20 ± 4.49##高劑量組油桐花水提物10 45.36 ± 4.80##* 69.64 ± 2.20## 95.68 ± 2.17##*中劑量組油桐花水提物10 33.80 ± 7.21 64.48 ± 6.36 86.32 ± 4.42##*低劑量組F 10.614 4.362 25.644 P 0.000 0.005 0.000

3 討論

在本研究中，給藥21 d后，正常組大鼠體重最重，模型組體重最輕，陽性組、油桐花水提物各組體重與正常組差異不明顯；與模型組比較，差異明顯，這表明油桐花水提物能快速恢復燙傷大鼠體重。比較各組大鼠創面面積，油桐花水提物中劑量組創面面積最小，模型組創面面積最大，油桐花水提物各組與模型組相比，差異明顯；而油桐花水提物各組與陽性組相比，差異不明顯，這表明給予油桐花水提物后，能夠有效促進燙傷大鼠創面愈合。通過測量比較各組愈合率，中劑量組最高，陽性組次之，模型組最低。油桐花水提物各組與模型組相比，差異明顯；而油桐花水提物各組與陽性組相比，差異不明顯，這表明油桐花水提物外用后，能夠提高燙傷大鼠創面愈合率。

燙傷后大鼠健康狀態惡化，疼痛導致體溫下降，活動度降低，飲食和飲水量下降導致體重增長緩慢，燙傷部位焦痂形成疤痕，嚴重者創面缺血壞死、感染、潰爛[8-10]。由此可見，皮膚組織損害是燒燙傷造成的直接后果[11]，創面組織細胞缺血缺氧、感染、壞死導致病情惡化，病程延長[12-13]。油桐花通過抗炎鎮痛、清熱解毒、收斂生肌的作用機理，可縮短燙傷病程，減少疤痕形成[14]。李金鳳等[6]通過研究油桐花水提取物干預燙傷大鼠Bcl-2、Bax表達發現，油桐花水提物可抑制細胞凋亡，改善創面缺氧環境，促進燙傷創面修復。張世鳳等[5]采用不同溶劑提取油桐花有效成分的研究發現，水提物效果最優，鎮痛作用最持久。

本研究表明油桐花水提物能減輕燙傷大鼠的疼痛，提高食欲，恢復其正常活動，效果與陽性藥物相當。油桐花水提物給藥后，大鼠體重增加較快，創面愈合較快，各劑量組都有不同程度的效果，尤其以中劑量效果最好，說明油桐花水提物對燙傷具有明顯的促愈作用。

4 結論

油桐花水提物可促進燙傷皮膚組織損傷修復，快速恢復燙傷大鼠體重，收斂創口，加快創面愈合速度，縮短療程。油桐花水提物濃縮后與浸膏相似，可在創面形成保護膜，隔絕氧氣、細菌，起到抗炎、消腫止痛、保濕、收斂傷口的作用。油桐樹易推廣種植，經濟實用，且油桐花水提物提取工藝簡單，便于臨床開發應用，有利于發揮中醫藥特色作用。但油桐花有小毒，如何將油桐花水提物中的毒性成分去除，以保證高效安全，且水提物不宜長時間存放，如何延長保質期，以及水提物中含有多少單體成分和具體分子作用機制，都是下一步研究的方向和要解決的問題。