一氧化氮合酶1轉接蛋白基因多態性與冠心病病人PCI術后需要再次血運重建的關系

任曉園，王慧峰，張 強，郝 佳

目前，經皮冠狀動脈介入術(percutaneous coronary intervention，PCI)在治療冠心病方面扮演著重要角色，使很大一部分冠心病病人受益[1]，然而隨著PCI術的普及、隨訪次數的增加及血管內超聲技術的應用等因素使PCI術后需再次血運重建這一并發癥暴露出來。研究發現臨床上有一部分冠心病病人PCI術后雖然嚴格按照指南進行雙聯抗血小板及降脂治療，但仍會在術后6～12個月，尤其是在6～9個月進行冠狀動脈再次血運重建[2]。其機制復雜且目前尚不明確，國內外研究認為主要是由于PCI術植入支架損傷血管導致平滑肌細胞過度增殖、遷移所致[3-4]。此外，臨床上只有部分病人會發生冠狀動脈再次血運重建，可能是由于遺傳因素造成的個體差異所導致。目前，國內外對于一氧化氮合酶1轉接蛋白(NOS1AP)的研究大多集中于猝死、QT間期延長、冠心病易感性、精神分裂癥、胰島素抵抗等方面[5-8]。本研究基于一氧化氮(NO)參與冠心病發生發展的研究基礎上，探討NOS1AP基因多態性與冠心病病人PCI術后需要再次血運重建關系。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2018年6月—2019年6月在我院行PCI術，術后12～18個月來我院復查的200例冠心病病人，根據冠狀動脈造影(CAG)復查結果，其中32例需要進行冠狀動脈再次血運重建的病人納入血運重建組，其余168例為對照組。納入標準：①前次PCI成功完成，無支架貼壁不良；②臨床資料較完整，有可溯源性；③前次PCI結束后12～18個月來我院復查CAG的病人；④再次血運重建包括靶病變、非靶病變、靶病變和非靶病變同時需要血運重建。排除標準：①首次PCI失敗改行冠狀動脈旁路移植術(CABG)的病人；②再次血運重建為醫源性短期分次血運重建的病人；③嚴重肝腎功能不全，近6個月內發生腦出血或腦梗死的病人。

1.2 檢測方法 采用Ex-DNA通用型核酸提取試劑盒、使用天隆NP968磁珠核酸提取儀(西安天隆科技有限公司)從病人外周血中提取DNA，采用Sanger測序法、使用Applied Biosystems 3730測序儀(美國Thermal Cycler公司)檢測病人NOS1AP基因rs12742393、rs12084280、rs10918859位點的基因型。聚合酶鏈式反應(PCR)引物由通用生物系統(安徽)有限公司合成，引物序列見表1。PCR反應體系(20 μL)包括DNA模板2.0 μL，2×GoldStar MasterMix 10.0 μL(康為世紀生物科技有限公司)，滅菌雙蒸水7.0 μL，正向、反向引物各0.5 μL(10 μmol/L)。PCR反應條件：95 ℃預變性5 min，95 ℃變性30 s，60 ℃退火30 s，72 ℃延伸30 s，共35個循環，72 ℃再延伸5 min。PCR產物采用蝦堿酶法純化，經BDT擴增，沉淀洗滌后，高度去離子甲酰胺(HIDI)變性上機測序。使用Chromas軟件對測序結果進行分析。

表1 基因位點檢測引物序列信息

2 結 果

2.1 兩組臨床資料比較 兩組病人年齡、性別、體質指數(BMI)、吸煙、飲酒、高血壓、支架直徑、支架長度比較差異均無統計學意義(P>0.05)，血運重建組糖尿病史占比、前次植入支架數量、多支病變占比均高于對照組(P<0.05)。詳見表2。

表2 兩組臨床資料比較

2.2 兩組血液生化指標比較 血運重建組空腹血糖、糖化血紅蛋白、血尿酸、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)水平高于對照組，總膽紅素水平低于對照組，差異均有統計學意義(P<0.05)，而兩組間總膽固醇、三酰甘油、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)、血尿素、血肌酐、左室射血分數(LVEF)比較差異均無統計學意義(P>0.05)。詳見表3。

表3 兩組血液生化指標比較(±s)

2.3 兩組病人基因型與等位基因頻率比較 3個NOS1AP基因位點測序結果見圖1，兩組病人NOS1AP3個基因位點基因型及基因頻率比較，rs10918859基因型、等位基因比較差異均有統計學意義(P<0.05)，rs12084280、rs12742393基因型、等位基因比較差異均無統計學意義(P>0.05)。詳見表4。

圖1 3個NOS1AP基因位點測序結果

表4 兩組病人各基因型與等位基因頻率比較

2.4 冠狀動脈再次血運重建的Logistic回歸分析 Logistic回歸分析顯示，糖尿病史、空腹血糖、血尿酸、LDL-C、前次支架植入數量、多支病變、NOS1AP基因位點rs10918859 G/A是冠狀動脈再次血運重建的影響因素(P<0.05)。詳見表5。

表5 冠狀動脈再次血運重建的Logistic回歸分析

3 討 論

PCI術后需要再次血運重建是目前國內外心血管方面研究的重點及難點，早期識別再狹窄及尋找再次血運重建的預測因素對于冠心病病人預后顯得尤為重要，關于這類的研究也有很多，但尚無統一標準。本研究結果顯示，血尿酸、糖尿病史、空腹血糖、LDL-C、多支病變、植入支架數量、NOS1AP基因位點rs10918859多態性是冠狀動脈再次血運重建的危險因素。

目前，國內外多項研究證實2型糖尿病是PCI術后再狹窄的獨立危險因素[9-10]，高血糖水平對內皮細胞毒性很大且使血液黏滯度高，造成PCI術后內皮細胞修復功能障礙，且糖基化終末產物會使動脈粥樣硬化加速再狹窄的形成。本研究證實高尿酸血癥是再次血運重建的獨立危險因素，與文獻報道一致[11-12]。Freedman等[13]認為血尿酸與冠心病發病相關。PCI術后合并高尿酸血癥時大量血尿酸結晶附著于損傷的血管壁上影響內膜修復。趙存瑞等[14-15]認為LDL-C是冠狀動脈再次血運重建的重要預測因子，與本研究結果一致，而且既往已有研究指出PCI術后嚴格強化給予他汀類藥物降脂治療尤其是降低LDL-C，可以有效降低再次冠狀動脈血運重建的發生率[16]。支架本身因素也會導致支架內再狹窄的發生。既往也有研究表明多支病變尤其是合并前降支病變、支架植入數量多、支架直徑小、病變血管長的病人發生再次血運重建的概率增加[17]。以上因素均增加了冠狀動脈再次PCI的風險。

NOS1AP的編碼基因位于人類染色體的第1號，長度為299 kb，編碼NOS1AP蛋白，NOS1AP可以通過作用于神經元型一氧化氮合酶(nNOS)結合區來調節nNOS的活性[18]，nNOS可以催化生成NO。有研究表明，敲除nNOS編碼基因可能導致小鼠血管內皮功能受損[19]。蛋白質組學研究發現，NOS1AP 基因 rs12143842 位點在我國漢族人群中的遺傳變異與特發性室性心動過速的風險相關[20]；美國學者認為NOS1AP(rs12084280，rs10918859)位點的基因多態性為冠心病病人發生心源性猝死的遺傳學依據[6]。以上相關因素均說明NOS1AP基因多態性與冠心病的發生發展密切相關。本研究探討了以上NOS1AP3個基因位點與冠狀動脈再次血運重建的相關性，最后證實僅有rs10918859多態性是冠心病PCI術后需要再次血運重建的獨立危險因素，提示其可作為冠心病PCI術后是否會再次需要血運重建的預測因素。Aouizerat等[21]研究發現，NOS1AP多個位點與美國人群冠心病患病風險相關，而國內有研究證實在漢族人群中僅有rs10918859位點基因多態性與冠心病風險相關[22]，具有種族差異性，本研究結果是否也與種族差異性有關，需要進一步研究。關于對NOS1AP基因多態性與冠狀動脈血運重建的關系仍有待進一步探索，推測其可能是由于NOS1AP基因變異導致NO生成減少，影響了NO參與的病理生理過程。本研究樣本數量小且為單中心研究，存在一定局限性，NOS1AP基因多態性是否能預測冠狀動脈再次血運重建的風險，在以后的研究中應該擴大樣本量并進行多中心研究，為冠狀動脈再次血運重建提供預測手段。