雙歧桿菌四聯活菌片對重型顱腦損傷病人腸道菌群、氧化應激及T淋巴細胞平衡的影響

徐興華

顱腦損傷尤其是重型顱腦損傷具有極高的致死率和致殘率，是神經外科的常見疾病[1-2]，根據病人病情采取保守治療或手術治療。由于機體損傷后處于應激狀態，極易發生神經、免疫紊亂，導致機體免疫功能下降，易發生細菌感染，嚴重影響治療效果，因此，改善病人免疫功能紊亂狀態，對于病人病情轉歸具有重要意義[3]。近年來，有研究認為，改善腸道菌群紊亂可促進機體免疫功能恢復，降低臨床創傷感染率[4]。雙歧桿菌四聯活菌片是一種厭氧菌與需氧菌結合而成的復合微生態制劑，可改善腸道菌群失調，常用于腹瀉、消化不良的治療[5]。本研究觀察在常規治療的基礎上聯合雙歧桿菌四聯活菌片對重型顱腦損傷病人腸道菌群、氧化應激及T淋巴細胞平衡的影響。現報道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2017年5月—2018年5月我院收治的108例重型顱腦損傷病人，采用隨機數字表法將其分為對照組和觀察組。對照組54例，男30例，女24例；年齡22～58(41.23±5.71)歲；顱腦損傷原因：鈍物重擊19例，車禍24例，高處墜落7例，摔傷4例；伴有肋骨骨折3例，上下肢骨折12例，血氣胸2例；格拉斯哥昏迷量表(Glasgow Coma Scale，GCS)評分為5～8分。觀察組54例，男32例，女22例；年齡21～59(40.78±5.94)歲；損傷原因：鈍物重擊20例，車禍26例，高處墜落5例，摔傷3例；伴有肋骨骨折2例，上下肢骨折15例，血氣胸3例；GCS評分為5～8分。兩組病人年齡、性別、顱腦損傷原因、并發癥及GCS評分比較，差異均無統計學意義(P>0.05)，具有可比性。

1.2 納入標準 ①符合《神經外科學》[6]中關于重型顱腦損傷的診斷標準，并經臨床和腦磁共振成像(MRI)或腦CT檢查確診，且均為閉合性顱腦損傷；②損傷后12 h內入院，有明顯的顱腦外傷；③年齡20～60歲，GCS評分5～8分，且無其他重要器官障礙者(心、肺、腎等損傷或功能障礙)；④病人和家屬自愿簽署知情同意書。

1.3 排除標準 ①合并其他部位嚴重損傷，需要進行其他手術治療者；②因大量出血休克病人；③合并血管或內分泌疾病病人；④合并嚴重器質性消化道疾病病人。

1.4 治療方法 對照組給予抗感染、神經營養、吸氧、降顱內壓、維持電解質平衡、保護神經細胞等常規治療。觀察組在對照組基礎上給予雙歧桿菌四聯活菌片(杭州遠大生物制藥有限公司生產，批號：國藥準字S20060010，規格：每片0.5 g)治療，每次3片，每日3次，兩組均連續治療30 d。

1.5 樣本采集 ①分別于治療前后收集病人晨起自然排出的尾便(10.00±5.00)g于厭氧袋內，30 min內送至檢測室，檢測兩組病人治療前后腸道菌群變化情況。②分別于治療前后抽取病人外周靜脈血3 mL，肝素抗凝，檢測病人T淋巴細胞(TH1、TH2、TH1/TH2)。③分別于治療前后抽取病人空腹肘靜脈血4～5 mL，離心分離提取血清，-80 ℃環境下低溫保存，檢測血清炎性因子、氧化應激指標。

1.6 檢測指標及方法 ①采用日本光岡氏法檢測兩組病人腸道菌群變化：取尾便1 g，加入稀釋液4 mL 于無菌EP管，振蕩器震蕩1 min，成勻漿；另取無菌EP管8支，各加入1.8 mL稀釋液。取第1只EP管混勻液0.2 mL至第2只EP管中，震蕩混勻，按10倍連續稀釋依次將上述混勻夜稀釋到10-8，取不同稀釋度標本液50 μL分別涂抹于不同培養基上，檢測腸道菌群。需氧菌于37 ℃恒溫培養箱培養1～2 d，厭氧菌于37 ℃厭氧箱培養2～3 d，分別鑒定腸道各菌群變化。②采用酶聯免疫吸附法檢測兩組病人血清炎性因子水平：包括C反應蛋白(C-reactive protein，CRP)、腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factor-α，TNF-α)、白介素-6(interleukin-6，IL-6)及白介素-10(interleukin-10，IL-10)水平，試劑盒采用北京晶美生物工程有限公司生產的ELISA試劑盒。③采用單細胞內細胞因子染色酶聯免疫斑點法檢測兩組病人TH1、TH2數目及TH1/TH2變化，用淋巴細胞分離液吸取外周血單個核細胞并調細胞濃度至1×105/mL，分別取1×103個細胞于2支離心管中，處理后分別加入TH1、TH2一抗于暗處室溫孵育15 min，再分別加酶標二抗暗處室溫孵育15 min。反應后依次洗滌、固定，顯微鏡下計數200個細胞，計算著色陽性細胞百分率。④分別采用硫代巴比妥酸法和放射免疫法檢測兩組病人氧化應激指標丙二醛(maleic dialdehyde，MDA)、超氧化物歧化酶-1(superoxide dimutase-1 SOD-1)水平，試劑盒均購自深圳晶美生物公程有限公司。⑤采用GCS評分評估病人治療前后神經功能變化情況，GCS評分越高神經功能越好。

2 結 果

2.1 兩組治療前后腸道菌群數量比較 治療前，兩組雙歧桿菌、擬桿菌、乳酸桿菌、酵母菌、大腸桿菌數量比較，差異均無統計學意義(P>0.05)；治療30 d后，與治療前比較，對照組雙歧桿菌、擬桿菌、乳酸桿菌、酵母菌、大腸桿菌數量無明顯變化，差異均無統計學意義(P>0.05)，觀察組有益菌(雙歧桿菌、擬桿菌、乳酸桿菌)數量增加，致病菌(酵母菌、大腸桿菌)數量減少，差異均有統計學意義(P<0.05)；觀察組雙歧桿菌、擬桿菌、乳酸桿菌數量較對照組增加，酵母菌、大腸桿菌數量較對照組減少，差異均有統計學意義(P<0.05)。詳見表1。

表1 兩組治療前后腸道菌群數量比較(±s) 單位：×108 CFU/g

2.2 兩組治療前后炎性因子水平比較 治療前，兩組炎性因子CRP、TNF-α、IL-6、IL-10水平比較，差異均無統計學意義(P>0.05)；與治療前比較，治療后兩組CRP、TNF-α、II-6水平降低，IL-10水平增加，差異均有統計學意義(P<0.05)；與對照組治療后比較，觀察組CRP、TNF-α、II-6水平降低，IL-10水平增加，差異均有統計學意義(P<0.05)。詳見表2。

表2 兩組治療前后炎性因子水平比較(±s)

2.3 兩組治療前后TH1、TH2及TH1/TH2水平比較 治療前，兩組TH1、TH2細胞數目及TH1/TH2水平比較，差異均無統計學意義(P>0.05)；與治療前比較，兩組治療后TH1數目增加，TH2數目減少，TH1/TH2水平升高，差異均有統計學意義(P<0.05)；與對照組治療后比較，觀察組TH1數目增加，TH2數目減少，TH1/TH2水平升高，差異均有統計學意義(P<0.05)。詳見表3。

表3 兩組治療前后TH1、TH2及TH1/TH2水平比較(±s)

2.4 兩組治療前后氧化應激指標比較 治療前，兩組MDA、SOD-1水平比較，差異均無統計學意義(P>0.05)；與治療前比較，兩組治療后MDA水平降低，SOD-1水平升高，差異均有統計學意義(P<0.05)；與對照組治療后比較，觀察組MDA水平降低，SOD-1水平升高，差異均有統計學意義(P<0.05)。詳見表4。

表4 兩組治療前后氧化應激指標比較(±s)

2.5 兩組治療前后GCS評分比較 治療前，兩組GCS評分比較，差異無統計學意義(P>0.05)；與治療前比較，兩組治療后GCS評分升高，差異均有統計學意義(P<0.05)；與對照組治療后比較，觀察組GCS評分升高，差異有統計學意義(P<0.05)。詳見表5。

表5 兩組治療前后GCS評分比較(±s) 單位：分

3 討 論

重型顱腦損傷是臨床上常見的嚴重創傷，一般是頭部直接或間接受到嚴重撞擊導致的，病情兇險，療效差，臨床治療難度較大。隨著臨床對于治療重型顱腦損傷的不斷探索，發現益生菌對于改善重型顱腦損傷病人臨床療效及預后具有重要意義[7]。雙歧桿菌四聯活菌片為糞鏈球菌、嗜乳酸桿菌、雙歧桿菌、蠟樣芽胞桿菌與輔料乳糖、淀粉等的混合制劑，前3種菌為機體胃腸道的正常菌群，可形成生物屏障，對胃腸道具有保護作用，蠟樣芽胞桿菌非機體胃腸道正常菌群，可消耗氧氣，為厭氧菌創造適宜環境，促進厭氧菌生長繁殖，因此，雙歧桿菌四聯活菌片具有重建機體菌群平衡的重要作用[8]。本研究在常規治療基礎上聯合雙歧桿菌四聯活菌片治療重型顱腦損傷，結果顯示，觀察組治療后雙歧桿菌、擬桿菌、乳酸桿菌數量較治療前增加(P<0.05)，酵母菌、大腸桿菌數量較治療前減少(P<0.05)，而對照組治療前后腸道菌群無明顯變化(P>0.05)。提示雙歧桿菌四聯活菌片可有效改善重型顱腦損傷病人的腸道微生態環境失衡，降低腸黏膜通透性，促進胃腸道營養吸收，從而增強腸道局部免疫。

機體損傷程度與血清CRP水平密切相關，因此，CRP水平常作為臨床上診斷與療效評價指標[9]，機體受損后炎性因子TNF-α、II-6水平升高。抑炎因子IL-10對促炎因子的活化具有抑制作用，可降低促炎因子水平，改善機體免疫功能[10-11]。本研究結果顯示，兩組治療后CRP、TNF-α、II-6水平較治療前降低，IL-10水平較治療前增加，且觀察組治療后CRP、TNF-α、II-6水平較對照組降低，IL-10水平較對照組增加，差異均有統計學意義(P<0.05)。提示雙歧桿菌四聯活菌片可有效抑制重型顱腦損傷病人促炎因子水平，提高抑炎因子水平，減輕機體炎性反應，減輕顱腦損傷。機體嚴重創傷時可以導致細胞免疫功能抑制，并繼發感染。T輔助淋巴細胞中TH1和TH2的交叉調節細胞免疫[12]。本研究結果顯示，兩組治療后TH2數目較治療前減少，TH1數目較治療前增加，TH1/TH2水平較治療前升高，觀察組TH2數目較對照組減少，TH1/TH2水平較對照組升高，TH1數目較對照組增加，差異均有統計學意義(P<0.05)。提示重型顱腦損傷病人體內出現TH1/TH2平衡偏移，雙歧桿菌四聯活菌片可通過抑制TH2細胞表達，提高TH1細胞表達逆轉TH1/TH2平衡失調，從而提高機體免疫功能。

氧化應激在重度顱腦損傷的發生發展中起著重要作用，同時，機體內的氧化應激對神經細胞具有損害作用[13]。MDA水平與細胞受自由基攻擊程度有關，SOD-1可清除超氧陰離子自由基，具有抗氧化作用[14]。本研究結果顯示，兩組治療后MDA水平較治療前降低，SOD-1水平較治療前升高，且觀察組治療后MDA水平低于對照組，SOD-1水平高于對照組。提示雙歧桿菌四聯活菌片可改善重度顱腦損傷病人氧化應激水平，從而改善病人神經功能。GCS評分是評估顱腦損傷病情嚴重程度的重要指標，GCS評分升高是病情好轉的間接表現[15]。進一步研究發現，治療后兩組GCS評分升高(P<0.05)，且觀察組GCS評分高于對照組(P<0.05)，提示雙歧桿菌四聯活菌片可提高重型顱腦損傷病人GCS評分，提高治療效果。

綜上所述，采用雙歧桿菌四聯活菌片輔助治療重型顱腦損傷可有效改善病人腸道菌群，降低機體炎性反應，提高機體免疫功能，抑制機體氧化應激，提高病人GCS評分，從而提高治療效果。