高效液相色譜法快速測定腐乳中誘惑紅的方法研究

鮑俊竹 俞何鋒 彭祺

摘 要：目的：建立快速檢測腐乳中誘惑紅色素的高效液相色譜法。方法：樣品溶解調(diào)至酸性，聚酰胺富集后進(jìn)行梯度洗脫，用外標(biāo)法定量檢測。結(jié)果：誘惑紅的方法線性在1.0～50.0 ?g/mL濃度范圍內(nèi)，線性相關(guān)系數(shù)為0.999 9，樣品的加標(biāo)回收率為92.00%～103.25%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.89%～1.53%，檢出限（S/N=3）為10.0 ?g/kg。結(jié)論：本方法具有操作簡單、分析時(shí)間較短、線性范圍寬和檢出限低的特點(diǎn)。

關(guān)鍵詞：高效液相色譜;誘惑紅;腐乳

食用天然色素是從動植物組織中提取出來的，一般對人體無害。食用合成色素屬于食用人工合成色素。誘惑紅等人工合成色素的著色力強(qiáng)，價(jià)格低廉，對于商家來說能很好地提高食品的外觀性質(zhì)，因此被廣泛使用。但人工合成色素及其代謝物均具有毒性和致癌性，因此使用誘惑紅等人工合成色素一定要控制其使用量，避免過量使用對人體造成危害[1-3]。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

1.1.1 試劑

誘惑紅標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì);甲醇（色譜純）;0.02 mol/L乙酸銨溶液（pH=4）;聚酰胺粉（200目）;20%檸檬酸;去離子水;甲酸-甲醇溶液;乙醇-氨水溶液。

1.1.2 儀器

美國戴安P680高效液相色譜儀;電子天平;PDA-100二極管陣列檢測器（檢測波長190～900 nm）;變色龍色譜工作站;恒溫水浴鍋;燒杯。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備

準(zhǔn)確稱取0.100 g誘惑紅置50 mL的燒杯中，加水溶解，并把溶液于100 mL容量瓶中定容，得含量1 mg/mL標(biāo)準(zhǔn)儲備液。從中吸取適量配成1.0 μg/mL、5.0 μg/mL、10.0 μg/mL、20.0 μg/mL、30.0 μg/mL、40.0 μg/mL和50.0 μg/mL的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液。

1.2.2 樣品前處理

稱取10.0 g腐乳樣品，加30 mL水，于恒溫水浴鍋中溫?zé)崛芙?。?0%檸檬酸溶液調(diào)至酸性（pH=4），取0.5～1.0 g

聚酰胺粉（200目）攪拌片刻，置于60 ℃水浴中加熱，使色素完全吸附。將溶液中的聚酰胺粉通過漏斗過濾，剩下溶液用酸性熱水洗滌去糖。經(jīng)甲酸-甲醇溶液洗滌至洗液無色，70 ℃的水多次洗滌至洗液中性，乙醇-氨水液分次解吸色素，收集解吸液于水浴鍋中蒸發(fā)濃縮后定容至2 mL，轉(zhuǎn)入25 mL比色管中，去離子水定容至刻度，經(jīng)0.45 μm濾膜過濾后上機(jī)待測[4-5]。

1.2.3 定量測定

用標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的保留時(shí)間定性，采用外標(biāo)法定量。以質(zhì)量濃度（μg/mL）為橫坐標(biāo)，以色譜峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。根據(jù)試樣峰面積，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出試樣中組分的實(shí)際濃度。

1.2.4 色譜條件

色譜柱：Hypersil ODSC18（5 μm，4.6 mm×200 mm），不銹鋼柱;流動相：甲醇、0.02 mol/L乙酸銨溶液（pH=4）;梯度洗脫：甲醇10%～15%，3 min;15%～98%，9 min;98%，6 min;流速：1 mL/min;檢測波長：510 nm;柱溫：40 ℃;進(jìn)樣量：10 μL。

2 結(jié)果與分析

2.1 檢測波長的選擇

色譜條件下，在190～900 nm波長處掃描，得誘惑紅的紫外吸收波譜見圖1。圖1表明誘惑紅在可見光范圍內(nèi)在506 nm波長下有最大吸收。

2.2 樣品前處理?xiàng)l件的選擇

（1）提取液的選擇。本實(shí)驗(yàn)提取誘惑紅的方法分別試用了去離子水、氨水溶液與乙醇氨水溶液。實(shí)驗(yàn)表明各提取液屬乙醇氨水溶液提取誘惑紅色素的效果最好。

（2）提取液濃縮溫度的選擇。氨水的沸點(diǎn)是78 ℃，在這個(gè)溫度下氨水容易揮發(fā)，因此提取液的溫度選擇在80 ℃。

（3）提取液濃縮體積的選擇。樣品中的目標(biāo)組分經(jīng)提取后，提取液濃縮體積定在2 mL左右后定容所溶解的色素較完全而且回收率較好，因此選擇2 mL。

2.3 線性關(guān)系和檢出限

根據(jù)選擇好的色譜條件下，誘惑紅標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（5～50 μg/mL）

線性范圍內(nèi)以1.0 μg/mL、5.0 μg/mL、10.0 μg/mL、20.0 μg/mL、30.0 μg/mL、40.0 μg/mL和50.0 μg/mL的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)樣分析，以誘惑紅峰面積Y（mAU·min）為縱坐標(biāo)、進(jìn)樣濃度X（μg/mL）為橫坐標(biāo)作圖，計(jì)算出線性回歸方程為：Y=506.8X+0.099 7，r=0.999 9，表明誘惑紅濃度與峰面積具有良好的線性關(guān)系。以S/N=3計(jì)得到方法的最低檢測限為10 μg/kg。

2.4 樣品的加標(biāo)回收

配制不同濃度誘惑紅標(biāo)準(zhǔn)溶液（2.0 ?g/mL、4.0 ?g/mL和6.0 ?g/mL）;腐乳樣品溶濃度分別為5.24 ?g/mL和10.20 ?g/mL。加標(biāo)回收以1.2.4方法處理進(jìn)樣，據(jù)此計(jì)算回收率。由表1可知，不同濃度的樣品添加不同濃度的誘惑紅標(biāo)準(zhǔn)溶液，誘惑紅的回收率為92.00%～103.25%，其相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.89%～1.53%，本方法是準(zhǔn)確可靠的。

2.5 精密度

樣品重復(fù)測定6次，測得誘惑紅峰面積的RSD為1.06%，表明本方法的精密度良好。

2.6 抗干擾實(shí)驗(yàn)

胭脂紅與誘惑紅的理化性質(zhì)相同，因此選擇胭脂紅為代表進(jìn)行抗干擾實(shí)驗(yàn)。對腐乳樣品處理后，利用同樣的色譜條件，分別對胭脂紅和誘惑紅進(jìn)行分離檢測。結(jié)果表明對各自的檢出無影響，見圖2。

3 結(jié)論

本文運(yùn)用高效液相色譜技術(shù)對腐乳中誘惑紅進(jìn)行了快速測定。優(yōu)化樣品前處理?xiàng)l件，有效提取樣品誘惑紅。依據(jù)誘惑紅的特性選擇了乙醇氨水溶液作為提取液，效率高且可以直接上機(jī)，快速方便。對誘惑紅標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行了全掃描光譜分析，并確定檢測最適合波長為506 nm。本文方法的檢出限10.0 mg/kg，回收率在92.00%～103.25%，RSD值均<5%。本方法測定誘惑紅，其線性、精密度和回收率等指標(biāo)良好，可作為檢測食品中誘惑紅的推廣方法。

參考文獻(xiàn)

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