電針額區對血管性癡呆模型大鼠學習記憶能力及海馬回CA1區細胞凋亡的影響

馬莉，陳玉，伍思政，肖海燕，趙鑫宇，張雪松*

（1. 黑龍江中醫藥大學附屬第一醫院，黑龍江 哈爾濱 150040；2. 黑龍江中醫藥大學，黑龍江哈爾濱 150040）

血管性癡呆（VD）是由腦卒中（缺血或者出血）引起的一種認知功能障礙及情感障礙的綜合征［1］。隨著我國社會不斷進步和發展，生活條件和醫療環境不斷改善，生活習慣不規律和人口老齡化也隨之越來越嚴重，癡呆類疾病也逐漸引起社會的關注。據統計，我國有關癡呆這一疾病的發病率逐年遞增，其中VD 位居發病率排名第二，就目前而言在這些癡呆類疾病中，VD是唯一可以通過積極治療可控制和改善的。VD患者識人不清、記憶力下降、情感表達異常，使患者家庭背負了沉重的負擔［2］。VD 的發病主要是因為長期或者反復的腦組織缺血、缺氧，神經元賴以生存的環境遭到破壞，使神經元變性、凋亡等［3］。因此，如何控制、改善或修復腦組織缺血、缺氧的狀態，解決這一問題的關鍵就是腦血管再通問題。腦組織有賴于腦血管中血液的滋養，當出現腦卒中時（主要是腦缺血），會引起血管堵塞，所以在缺血區域改善供血或者建立新的側支循環是解決該問題的可行方法［4］。本研究探討電針對VD模型大鼠的影響，現報告如下。

1 材料與方法

1.1 實驗動物

本研究實驗動物情況詳見表1。

表1 實驗動物基本情況

1.2 藥物與試劑

腦復康（湖南迪諾制藥有限公司，批號：H43020666）；大鼠血管內皮生長因子（江蘇酶免實業有限公司，批號：2019-10）；細胞凋亡試劑盒（Roche Molecular Biochemicals，germany，批號：11684817910）。

1.3 造模與分組

VD 模型參照采用2-VO 法。將大鼠隨機分為假手術組（0.9%NaCl，15只）、模型組（0.9%NaCl，15只）、西藥組（腦復康，15 只）和電針組（2 Hz 疏密波電針，15只），造模方法見參考文獻［5］。

1.4 給藥

電針組：將大鼠固定在大鼠臺上（采用俯臥位），根據于致順老師頭穴分區針刺這一理論，本實驗選取的腧穴都在大鼠額區，分別是前庭和囟會穴以及其向左、右各1寸及2寸的穴位，用脈沖電療儀連接前庭和囟會穴（參照華興邦等［6］的《大鼠穴位圖譜的研制》），給予疏密波，將這波形的頻率調至2 Hz，20 min，1 次/d，連續治療30 d。其余3組大鼠只束縛在鼠臺上20 min。

西藥組：腦復康配置為濃度40 mg/mL，大鼠給藥時，劑量為6 mL/kg，1次/d，連續治療30 d。

假手術組：0.9% NaCl 進行灌胃，給藥體積、頻次和時間同西藥組。

模型組：治療同假手術組。

1.5 觀察指標

1.5.1 Morris 水迷宮檢測

該實驗包括定位航行和空間探索試驗。該測試所需要的時間為6 d，每天測驗8 次，上午和下午進行測驗次數相同。

1.5.2 血清VEGF含量檢測

按照試劑盒說明進行嚴格操作。

1.5.3 細胞凋亡檢測

將大鼠脫頸處死取腦組織，浸入10%福爾馬林溶液中。利用TUNEL 法，查看光鏡下大鼠海馬區細胞凋亡狀態并拍照。

1.6 統計學方法

采用SPSS 22.0軟件分析系統對各組數據進行統計學計算，所有數據以±s表示，P≤0.05為有統計學意義。

2 結果

2.1 Morris水迷宮檢測結果比較

2.1.1 大鼠逃避潛伏期時間比較

與模型組比較，其余3 組均低于模型組（P＜0.05），電針組與西藥組比較差異無統計學意義（P＞0.05）。見表2。

表2 各組大鼠逃避潛伏期時間比較（±s）

表2 各組大鼠逃避潛伏期時間比較（±s）

注：與模型組比較，1）P ＜0.05；與西藥組比較，2）P ＞0.05。

組別模型組假手術組西藥組電針組n 15 15 15 15逃避潛伏期（s）53.90±4.31 39.46±2.391）42.47±3.261）40.25±1.221）2）

2.1.2 穿過平臺次數比較

與模型組比較，其余3 組均高于模型組（P＜0.05），電針組與西藥組比較差異無統計學意義（P＞0.05）。見表3。

表3 各組大鼠穿過平臺次數比較（±s）

表3 各組大鼠穿過平臺次數比較（±s）

注：與模型組比較，1）P ＜0.05；與西藥組比較，2）P ＞0.05。

組別模型組假手術組西藥組電針組n 15 15 15 15穿越平臺次數（次）3.14±0.29 9.06±1.131）7.51±0.581）6.73±0.141）2）

2.2 各組大鼠血清VEGF含量比較

西藥組和電針組大鼠血清VEGF 含量明顯高于模型組，并且模型組高于假手術組（P＜0.05）；電針組與西藥組在血清VEGF 含量方面比較，差異無統計學意義（P＞0.05）。見表4。

表4 各組大鼠血清中VEGF的含量比較（±s）

表4 各組大鼠血清中VEGF的含量比較（±s）

注：與模型組比較，1）P ＜0.05；與西藥組比較，2）P ＞0.05。

組別模型組假手術組西藥組電針組n 15 15 15 15 VEGF（pg/mL）132.53±17.21 94.66±10.071）165.80±14.191）169.41±12.521）2）

2.3 各組大鼠海馬回CA1 區錐體細胞結構和凋亡細胞情況

錐體細胞結構情況：假手術組可見這一結構致密；模型組可見這一結構模糊，細胞核深染，結構變得殘缺；西藥組其結構排列比模型組稍許緊；電針組可見其結構排列比模型組明顯致密。細胞凋亡情況：假手術組可見少量凋亡細胞；模型組可見大量凋亡細胞；西藥組和電針組可見凋亡細胞，相較于模型組而言，其數量相對較少，但高于假手術組。詳見圖1。

圖1 大鼠海馬回CA1區細胞凋亡情況（TUNEL，×400）

3 討論

VD 在中醫學中可歸屬“癡證”或者“呆病”范疇，病位在腦，腦為髓海，腦失所養，髓海不足，就會引發癡證的發生。引起腦失所養的病因有很多，比如老年腎精虧少，臟腑功能低下，髓海不足等［7］。VD 主要是因為瘀血阻滯腦竅，使氣血運行不暢，腦竅無氣血滋養而發病。和早期老年性癡呆不同，VD 在早期是可以通過積極治療得到控制和改善的。臨床常口服美金剛、安理申等，這兩種藥物所代表的兩大類藥物其實都是治療阿爾茨海默病的代表藥物，還有神經營養劑（腦復康）和抗精神病類藥物，這些對于血管性癡呆來說也有一定作用，但不明顯，而且長期服用，會產生不良反應［8］。中醫學對VD 的早期治療效果明顯［9］。

VD 發病究其根本原因和過程其實就是發生腦血管疾病之后，因為腦組織缺血或者出血原因使腦血管破裂或腦血管堵塞，血液循環障礙，最終導致相應神經元受到破壞（尤其是海馬，其主要功能就是記憶，而且對缺血、缺氧十分靈敏），最終導致神經細胞凋亡的過程。當腦組織一開始受到損傷時，其中心出血或者缺血區域的神經細胞會發生變性或者凋亡，但周圍遠離中心區域的部位神經細胞要經過1～2 d 后才出現退化，然后慢慢凋亡。這種逐漸自我凋亡過程是具有潛伏性的，而海馬CA1 區對這種逐漸自我凋亡過程的病理變化最為突出和明顯，尤其是海馬CA1 區的椎體細胞。當腦血管疾病急性發作時，這種細胞凋亡程度會有高峰期，一般是1～5 d 內，但是這種持續細胞凋亡的狀態會持續1 個月［10］。近年來研究表明，積極促進側支循環的建立，這就讓血液在新的通路得以通暢循環，使腦組織損傷得以控制和緩解，在很大程度上對腦神經細胞起到了積極有效的保護作用［11］。

有關頭穴叢刺這一理論主要來源于于致順教授臨床和理論知識的總結［12］。該理論大致內容是在對頭部進行針刺時，其針刺局部會產生一種“場”，這種“場”有著直接的滲透作用，可以作用于大腦皮層和腦組織（不同腦區域對應不同疾病），達到緩解相對應癥狀的作用［13］。本實驗研究的是VD 大鼠學習記憶能力，而根據頭穴叢刺這一理論，其需要針刺的部位即是前額區域，在這一區域針刺可以緩解記憶和情感障礙的癥狀，因此筆者選取的腧穴是額區的前庭等穴位。對于頭穴叢刺治療VD 的文獻已經很多，但是在頭穴叢刺基礎上加用電針的方法，這一研究文獻相對較少，而且電針2 Hz 疏密波在興奮這一方面具有很大優勢，具有促進血液循環，消除炎性水腫等特點［14］。有研究表明，在腦組織受到損傷時，運用電針治療，可以讓已經受損的神經傳導通路再次得到建立［15］。

VEGF 又稱血管通透因子，當腦組織出現血液循環障礙進而神經細胞發生凋亡時，因其可以促進血管再生，形成側支循環，并且有著非常高的生物活性，這就使得血液循環得以維序，血液循環的通暢與否關系著神經細胞的生存環境，因此VEGF 對神經細胞有著保護作用，并且它還有著極高的特殊性［16］。有研究發現，當腦缺血時，其中心缺血區域VEGF 含量在第1 天或者第2 天會達到最高峰，有血管結構從周圍缺血部位向中心缺血部位延伸，7 d 后中心缺血區域VEGF 含量逐漸降低，但周圍缺血區域VEGF 含量增加，因此，當腦缺血時，如何采取治療措施，促進中心缺血區域VEGF 含量增加或者不持續降低以及讓周圍缺血區域VEGF 含量保持增加不降低，是目前面臨的巨大問題［17］。本實驗表明，假手術組在血清VEGF 的含量方面明顯低于模型組，電針組（2 Hz 疏密波電針額區）和西藥組（腦復康）的血清VEGF 含量明顯高于模型組，這就說明VEGF 在VD 發病時，其含量會增加，促進血管再生進行自我修復，但是如果不進行有效早期積極治療，其增加的量相對較低，自我修復的速度會相對緩慢。在水迷宮實驗和海馬回CA1 區細胞凋亡方面，不管是電針組（電針額區），還是西藥組（腦復康），又或者是假手術組，都比模型組有優勢。電針組（電針額區）與西藥組（腦復康）在上述觀察指標方面比較無差異，說明在VD 治療結果上，兩者療效相當。

綜上所述，電針額區（2 Hz疏密波電針額區）對VD的作用機制之一可能是通過調節血清VEGF，促進腦血管再生，血液循環障礙情況得以緩解，神經細胞的生存環境得到改善，抑制減緩細胞凋亡，神經傳導通路建立，最終改善臨床癥狀。