液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定芝麻油中乙基麥芽酚

馬 斐，李 鑫，張佳慧，張艷紅，姜 銳

（德州市食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)中心，山東德州 253000）

乙基麥芽酚是一種安全、可靠、用量少、效果顯著的食品添加劑。作為一種香味改良劑、增香劑，應(yīng)用越來越廣泛，是煙草、食品、飲料、香精、果酒、日用化妝品等良好的香味增效劑，對(duì)食品的香味改善和增強(qiáng)具有顯著效果，對(duì)甜食起著增甜作用，且能延長(zhǎng)食品儲(chǔ)存期。然而，乙基麥芽酚過量食用對(duì)人肝臟有影響，骨骼和關(guān)節(jié)提前脆變癌變等疾病。嚴(yán)重的還可能導(dǎo)致頭痛、惡心、嘔吐、呼吸困難，甚至能夠損傷肝、腎，對(duì)人體有較大的危害。

歐洲理事會(huì)將乙基麥芽酚列入可用于食品中而對(duì)人體健康無害的人造食用香料表中，其最高用量為10 mg/kg，ADI值為2 mg/kg[1]。中國(guó)根據(jù)《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品添加劑使用標(biāo)準(zhǔn)》（GB 2760—2014）食品添加劑使用衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)，批準(zhǔn)為允許使用的食品香料。但不允許加入植物油中作為摻假或增香的手段使用[2]。

1 材料與方法

1.1 儀器、試劑與材料

液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用儀SCIEX 5500 Qtrap，SCIEX公司；精密電子天平XSE105，瑞士Mettler-Toledo公司；試管渦旋振蕩器，德國(guó)海道爾夫（Heidolph）公司；H1850R臺(tái)式高速冷凍離心機(jī)，長(zhǎng)沙高新技術(shù)產(chǎn)業(yè)開發(fā)區(qū)湘儀離心機(jī)儀器有限公司；13 mm×0.22 μm有機(jī)濾膜，上海安譜實(shí)驗(yàn)室科技股份有限公司。

乙基麥芽酚標(biāo)準(zhǔn)品（100 mg，純度99.90%，批號(hào)：71032），北京壇墨質(zhì)檢科技有限公司；甲醇（色譜純），德國(guó)默克。

1.2 標(biāo)準(zhǔn)品及樣品溶液制備

1.2.1 標(biāo)準(zhǔn)品溶液

準(zhǔn)確稱取乙基麥芽酚標(biāo)準(zhǔn)品106.3mg，用甲醇溶解并定容至100 mL，此溶液濃度為1.063 mg/mL。吸取濃度為1.063 mg/mL的溶液1.00 mL至100 mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，溶液濃度為10.63 μg/mL[3]。

分別吸取濃度為10.63 μg/mL的溶液1.00 mL、2.00 mL、3.00 mL、5.00 mL至10 mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，溶液濃度分別為1.063 μg/mL、2.126 μg/mL、3.189 μg/mL和5.315 μg/mL。

準(zhǔn)確稱取與試樣基質(zhì)相應(yīng)的陰性試樣10 g，分別加入上 述5個(gè) 濃 度1.063 μg/mL、2.126 μg/mL、3.189 μg/mL、5.315 μg/mL和10.63 μg/mL溶液0.20 mL，與試樣同時(shí)進(jìn)行處理，制備成質(zhì)量濃度為10.63 ng/mL、21.26 ng/mL、31.89 ng/mL、53.15 ng/mL和106.3 ng/mL的基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。

1.2.2 樣品處理

準(zhǔn)確稱取10 g試樣置于50 mL聚丙烯離心管中，用移液器準(zhǔn)確加入10 mL甲醇，渦旋振搖2 min，4 ℃條件下離心10 min，將上清液移入20 mL具塞刻度試管中，下層油液再用10 mL甲醇重復(fù)提取一次，合并上清液，用甲醇定容至20 mL，經(jīng)微孔濾膜（0.22 μm，有機(jī)相）過濾，供液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜分析。

1.3 色譜條件

色譜柱：Agilent Poroshell 120 EC-C18（100 mm×3.0 mm，2.7 μm）；柱溫：40℃；流動(dòng)相：A-0.1%甲酸水溶液，B-甲醇；梯度洗脫程序：0～1.5 min、50%B，1.5～3 min、50%～90%B，3～5 min、90%B，5～6 min、50% B；流速：0.3 mL/min；進(jìn)樣體積：2μL。

1.4 質(zhì)譜條件

采用ESI正離子模式，多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM）+EPI監(jiān)測(cè)方式；離子噴霧電壓：5 500 V；離子源溫度：500 ℃；霧化器壓力：50 psi；輔助氣壓力：50 psi；氣簾氣壓力：35 psi；EPI參數(shù)：掃描范圍50～150 Da；阱集時(shí)間5.00 msec；碰撞能量30 eV（±15）。定性離子對(duì)、定量離子對(duì)、去簇電壓和碰撞能見表1。

表1 多反應(yīng)監(jiān)測(cè)檢測(cè)模式參數(shù)

2 結(jié)果與分析

2.1 樣品測(cè)定

采用該方法對(duì)30余批芝麻油進(jìn)行檢測(cè)，樣品均有本底值，見圖1，并用Q-trap進(jìn)行了全掃描圖譜的確認(rèn)，樣品與標(biāo)準(zhǔn)品中乙基麥芽酚峰的二級(jí)質(zhì)譜圖對(duì)比結(jié)果基本一致，匹配得分在95.0，見圖2和圖3。根據(jù)國(guó)家補(bǔ)充檢驗(yàn)方法BJS 201708中規(guī)定檢出限為25.0 μg/kg，測(cè)得不合格樣品1批，含量為64.3 μg/kg。其余含量均低于方法檢出限。

圖1 樣品中乙基麥芽酚提取離子色譜圖

圖2 樣品中乙基麥芽酚二級(jí)全掃描色譜圖

圖3 乙基麥芽酚標(biāo)準(zhǔn)品二級(jí)全掃描色譜圖

2.2 芝麻油中含有乙基麥芽酚的結(jié)果分析

采用該方法同時(shí)對(duì)大豆油進(jìn)行檢測(cè)，樣品完全不含有乙基麥芽酚[4]，無本底干擾。說明芝麻油的原料本身會(huì)有或者加工工藝中可能產(chǎn)生乙基麥芽酚，但是正常值都會(huì)小于國(guó)家規(guī)定的方法檢出限。本實(shí)驗(yàn)同時(shí)考察了不同原料的本底含量值，發(fā)現(xiàn)以進(jìn)口芝麻和國(guó)產(chǎn)芝麻為原料的芝麻油中乙基麥芽酚含量值并無差別。此次試驗(yàn)的樣品均為小磨芝麻香油，均采用的是水代法工藝，對(duì)其他工藝沒有考察。與其他研究者討論，可能和工藝過程中的炒制時(shí)間、加熱溫度等有關(guān)系，會(huì)導(dǎo)致乙基麥芽酚本底含量的不同，有待進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)[5]。

3 結(jié)論

本實(shí)驗(yàn)采用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定芝麻油中乙基麥芽酚并用Q-trap進(jìn)行全掃描確認(rèn)。對(duì)30余批純芝麻油進(jìn)行了檢測(cè)，并證實(shí)芝麻油中確實(shí)含有乙基麥芽酚本底值，并非其他干擾物質(zhì)。本底含量值與原料關(guān)系不大，可能和工藝過程有關(guān)，有待進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)確證。