慢性與急性AFB1中毒小鼠血清生化及免疫指標(biāo)比較

高 穎，李蕊蕊，陳媛媛

黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué)，黑龍江大慶 163319

黃曲霉毒素（AF）是主要由黃曲霉和寄生曲霉產(chǎn)生的一種次級(jí)代謝產(chǎn)物，廣泛存在于自然界中。AFB1的代謝與濕度、溫度、氧化應(yīng)激、生長(zhǎng)基質(zhì)、儲(chǔ)存材料和陽(yáng)光等密切相關(guān)。黃曲霉毒素毒性相當(dāng)于氰化鉀的10倍，砒霜的68倍，于1993年被劃為一類(lèi)致癌物，黃曲霉毒素可以引起免疫抑制、致癌、致畸、致突變性。豬攝食AFB1污染飼料會(huì)出現(xiàn)采食量減少、體重降低、肝和免疫功能受損，以及血清生化指標(biāo)的改變，免疫系統(tǒng)由于AFT中毒而遭受?chē)?yán)重破壞，細(xì)胞免疫應(yīng)答延遲，促炎細(xì)胞因IL-6、IFN-γ和IL-10高表達(dá)。本試驗(yàn)以6周齡健康昆明小鼠為試驗(yàn)對(duì)象，觀察比較慢性與急性AFB1中毒對(duì)小鼠的影響。

1 材料與方法

1.1 試劑

AFB1標(biāo)準(zhǔn)品購(gòu)自FERMENTEK公司，AFB1粉末用DMSO溶解為1 mg/mL的儲(chǔ)備液備用。

1.2 試驗(yàn)動(dòng)物及分組

6周齡健康雄性昆明小鼠40只，隨機(jī)分為空白對(duì)照組、DMSO溶劑對(duì)照組、AFB1慢性中毒組、AFB1急性中毒組。慢性AFB1組和急性AFB1組小鼠分別經(jīng)口灌服AFB1溶液（300 μg/kg，2 mg/kg），空白對(duì)照組和溶劑對(duì)照組分別經(jīng)口灌服相同體積的生理鹽水和DMSO溶液（300 μL/kg）。試驗(yàn)動(dòng)物飼喂標(biāo)準(zhǔn)飼糧，自由采食飲水。急性AFB1組實(shí)驗(yàn)期1周，其它組小鼠試驗(yàn)期為8周。實(shí)驗(yàn)結(jié)束，小鼠禁食12 h以上。第2天經(jīng)眼眶采血收集血液，頸部脫臼處死小鼠,血樣用4 ℃離心機(jī)4 000 r/min 離心10 min收取上清液，血清用ELISA檢測(cè)。解剖小鼠迅速取其肝臟,生理鹽水沖洗并用濾紙吸干后，電子天平稱量?jī)糁亍?/p>

臟器指數(shù)=（臟器凈重/宰前體重）×100%

1.3 炎性因子指標(biāo)檢測(cè)

用酶標(biāo)儀測(cè)量血清中IL-1β，IL-2，IL-6，IL-8，IL-10，TNF-α，INF-γ的值。以上炎性因子指標(biāo)均使用ELISA（朗頓，上海）試劑盒測(cè)定。用酶標(biāo)儀在450 nm波長(zhǎng)下讀取各吸光度值，并根據(jù)所繪制的標(biāo)準(zhǔn)曲線來(lái)計(jì)算出相應(yīng)的濃度值。

1.4 統(tǒng)計(jì)分析

試驗(yàn)所得數(shù)據(jù)結(jié)果以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”形式表示。使用SPSS 22.0軟件處理分析數(shù)據(jù)，以單因素方差分析各組顯著性，p<0.05具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 肝指數(shù)

肝指數(shù)指標(biāo)比較見(jiàn)表1。

表1 各組小鼠肝指數(shù)變化比較

2.2 血清炎性因子指標(biāo)

血清炎性因子指標(biāo)比較見(jiàn)表2。

3 討論

本試驗(yàn)毒素組小鼠肝臟指數(shù)高于對(duì)照組，說(shuō)明慢性AFB1中毒會(huì)對(duì)動(dòng)物肝臟造成損傷。此外剖檢小鼠可見(jiàn)肝臟腫大，顏色變淡，表面有出血點(diǎn)。AFB1進(jìn)入機(jī)體后在肝臟中代謝，有報(bào)道指出AFB1中毒大鼠肝臟會(huì)過(guò)量表達(dá)炎性因子，過(guò)量表達(dá)的炎性細(xì)胞因子又會(huì)進(jìn)一步加重肝臟損傷。免疫反應(yīng)是一個(gè)復(fù)雜的過(guò)程，免疫系統(tǒng)受許多炎性細(xì)胞因子的調(diào)控。AFB1急、慢性中毒均會(huì)引起肝臟炎癥反應(yīng)的發(fā)生，而慢性AFB1中毒導(dǎo)致的肝臟炎性損傷較急性AFB1中毒更加嚴(yán)重。

4 結(jié)論

表1結(jié)果表明，慢性AFB1中毒對(duì)肝臟的影響較急性AFB1中毒嚴(yán)重；表2結(jié)果表明，AFB1急、慢性中毒均會(huì)引起肝臟炎癥反應(yīng)的發(fā)生，而慢性AFB1中毒導(dǎo)致的肝臟炎性損傷較急性AFB1中毒更加嚴(yán)重。

表2 種禽（蛋雞）場(chǎng)使用時(shí)機(jī)

表2 各組小鼠血清炎性因子指標(biāo)變化比較

綜上所述，急性AFB1中毒會(huì)對(duì)動(dòng)物免疫能力產(chǎn)生損傷，而慢性AFB1中毒也會(huì)對(duì)動(dòng)物產(chǎn)生一定影響，但不如急性中毒嚴(yán)重。

參考文獻(xiàn)：略