125株耐多藥結(jié)核分枝桿菌的吡嗪酰胺耐藥及pncA基因突變分析

趙永 林淑芳 林建 戴志松 魏淑貞

吡嗪酰胺(pyrazinamide，PZA)是重要的一線抗結(jié)核藥物，能夠殺滅在吞噬細(xì)胞內(nèi)處于半休眠狀態(tài)的結(jié)核分枝桿菌。同時(shí)PZA能夠抑制核糖體蛋白S1的反式翻譯過程，從而阻止結(jié)核分枝桿菌產(chǎn)生賴以生存的其他蛋白質(zhì)?；谶@些作用，PZA與異煙肼(isoniazid，INH)和利福平(rifampicin，RFP)聯(lián)合治療可以有效縮短數(shù)個(gè)月的療程[1]。雖然Zhang等[2]和Li等[3]的研究均顯示，PZA耐藥與rpsA和panD基因突變有一定關(guān)系,但Dillon等[4]的研究證明了這2個(gè)基因的突變與PZA耐藥無關(guān)。 結(jié)核分枝桿菌PZA耐藥主要是由于吡嗪酰胺酶的編碼基因pncA發(fā)生突變，導(dǎo)致吡嗪酰胺酶的活性下降或失活，不能將PZA轉(zhuǎn)化成吡嗪酸。一些研究顯示，pncA基因突變具有多態(tài)性和地區(qū)差異性[5-9]。林淑芳等[10]和周銀發(fā)等[11]報(bào)道福建省耐多藥結(jié)核分枝桿菌臨床分離株對(duì)PZA的耐藥問題比較嚴(yán)重，特別是對(duì)鏈霉素(Sm)和乙胺丁醇(EMB)耐藥的耐多藥結(jié)核病患者對(duì)PZA耐藥率較高。為了解福建省耐多藥結(jié)核分枝桿菌對(duì)PZA耐藥性及pncA基因的突變情況，為PZA耐藥的快速分子診斷提供依據(jù)，本研究通過隨機(jī)選取2010—2019年耐藥監(jiān)測(cè)點(diǎn)的125株耐多藥結(jié)核分枝桿菌進(jìn)行PZA液體藥物敏感性試驗(yàn)(簡(jiǎn)稱“藥敏試驗(yàn)”)，并對(duì)PZA 耐藥相關(guān)基因pncA進(jìn)行測(cè)序。

材料和方法

一、研究對(duì)象

采用簡(jiǎn)單隨機(jī)抽樣的方法選取2010—2019年福建省9個(gè)耐藥監(jiān)測(cè)點(diǎn)的125株耐多藥結(jié)核分枝桿菌，標(biāo)準(zhǔn)株H37Rv由中國(guó)疾病預(yù)防控制中心國(guó)家結(jié)核病參比室提供。125株耐多藥結(jié)核分枝桿菌分離自125例耐多藥患者，其中男性占76.0%(95例)，女性占24.0%(30例)；年齡15～80歲，平均年齡(45.66±13.30)歲；……