榕江縣某雞場雞大腸桿菌的分離鑒定及藥敏試驗

楊晶晶 姜兆芳/貴州省榕江縣動物疫病預防控制中心 557200

禽大腸桿菌病是由致病性大腸埃希氏菌引起的一種細菌性傳染病，幼禽對本病最易感，一年四季均可發生，對養禽業危害極大。2020 年7 月，貴州省榕江縣某養雞場原雞存欄2150 羽，因近期暴雨，導致雞群淋雨、擠壓，發生不明原因傳染病，病雞表現為精神沉郁，不食，翅下垂，部分病雞眼睛表現濕潤渾濁，剖檢可見心包積液，心外膜有明顯小出血點，肝臟腫大，表面有小出血點，盲腸、喉管、氣管有不同程度出血點，病情程慢性，已陸陸續續死亡近800 羽，經對該場2只病雞的心、肝、脾、眼滲出物進行采樣，涂片鏡檢，細菌學分離及生化鑒定，診斷為雞大腸桿菌病，為尋求有效治療藥物進行了藥敏試驗，現報道如下。

1 材料

1.1 病料來源貴州省榕江縣某養雞場病雞2 只。

1.2 試驗器材麥康凱培養基、普通培養基、溫箱、顯微鏡、微量生化管（購自杭州濱和微生物試劑有限公司）、藥敏片（購自杭州微生物試劑有限公司）、革蘭氏染液。

2 試驗方法

2.1 細菌涂片鏡檢無放血方法處死病雞，將死雞用84消毒液浸泡后，無菌打開腹腔，用無菌操作法取心臟、肝臟、脾臟、腸內容物分別涂片，革蘭氏染色，置于顯微鏡下觀察。

2.2 細菌分離培養無菌操作法采集心臟、肝臟、脾臟、腸內容物接種麥康凱培養基，置于37℃培養24h，觀察細菌生長情況，無菌取單個標準菌落，劃線接種于普通瓊脂培養基，置于37℃恒溫培養箱中培養24h。

2.3 生化試驗取普通瓊脂培養基上單個菌落接種微量生化管，置于37℃培養24h，觀察結果。

2.4 藥敏試驗取普通培養皿上單個菌落，用“十字法”劃線接種于新鮮普通培養皿，用無菌鑷子將各種抗菌藥物圓紙片分別貼于培養基表面，各片距離要相等，置于37℃培養24h，觀察抑菌圈。

3 結果

3.1 細菌涂片鏡檢無菌操作法取死雞心、肝、脾、腸內容物涂片，革蘭氏染色后，顯微鏡下觀察呈紅色、兩端鈍圓的短桿菌，為革蘭氏陰性菌。

3.2 細菌分離培養無菌操作取死雞心、肝、脾、腸內容物接種麥康凱培養基，置于37℃24h 培養后，菌落形態呈圓形凸起，邊緣整齊，表面光滑濕潤，紅色菌落。

3.3 生化試驗將普通培養基標準單個菌落接種到微量生化管，置于37℃24h 培養后，結果見表1，葡萄糖、乳糖、麥芽糖、甘露醇、蔗糖變為黃色，呈陽性，枸櫞酸鹽、硫化氫無變化，呈陰性，對位二甲基苯甲醛無變化，吲哚反應呈陰性。參考腸桿菌屬的生化特性，鑒定為大腸埃希氏菌。

表1 分離菌株的生化試驗結果

3.4 藥敏試驗由表2 可知，分離的大腸埃希氏菌對環丙沙星、氧氟沙星高度敏感，對多西環素、復方新諾明、氨芐西林、四環素、萬古霉素、青霉素不敏感。

表2 藥敏試驗標準結果

4 分析與討論

從試驗結果來看，因青霉素的抗菌窄普性，因此所分離的大腸埃希氏菌對青霉素不敏感。四環素、多西環素與氨芐西林因藥物種類繁多，使用方便，價格低廉，且廣泛銷售，養殖場方面也存在濫用抗生素現象，導致產生耐藥性。而對環丙沙星、氧氟沙星等氟喹諾酮類抗生素，因市面上少有分離株對其高度敏感。雷變蘭等人的試驗研究表明獸用制劑的質量與細菌耐藥性的產生也有密切關系。因此，在進行藥物治療時，用藥敏試驗進行篩選，選擇對菌株敏感的藥物，同時也要選擇正規廠家生產的藥物治療才有效果。

禽大腸桿菌病是由一類致禽類急性系統性疾病的病原性大腸桿菌引起，主要表現為氣囊炎、肺炎、心包炎、肝周炎、腹膜炎、輸卵管炎等，主要血清型有O1：K1、O2：K1、O78：K80 等，氣候變化，飼養管理不當，如飼養密度過大，雞舍通風不良，濕度大，衛生差等均是促進本病發生的因素，因此，加強飼養管理，改善飼養環境，搞好圈舍衛生，加強消毒滅源，才能有效控制本病的發生。本次試驗可為榕江縣本地流行的禽大腸桿菌病的防治提供科學指導，也為本地流行的禽致病性大腸桿菌血清型鑒定奠定基礎。