食品中肌醇的微生物檢測方法研究

張曉英

山東省膠州市疾病預(yù)防控制中心，山東 青島 266300

肌醇是一種廣泛分布在動植物體內(nèi)和微生物組織中的生長因子，參與生命體的新陳代謝活動[1]。肌醇類屬于維生素B族、維生素H族的范疇，有促進(jìn)脂肪代謝、防止脂肪堆積的作用，并有助于提供營養(yǎng)支持, 保障生理功能的正常性[2]。肌醇常被作為營養(yǎng)劑添加于食品中，例如飲料、奶粉等食品，但其定量需嚴(yán)格控制，以確保食用安全性，因此食品中肌醇的檢測需要準(zhǔn)確、高效的進(jìn)行[3]。微生物檢測方法具有良好的靈敏度和重現(xiàn)性，有助于提升肌醇含量測定的準(zhǔn)確率。本次試驗(yàn)以某品牌的功能飲料作為測試對象，總結(jié)測試試驗(yàn)如下：

1 資料與方法

1.1一般資料 本次試驗(yàn)采用三個品牌同一批次功能飲料作為測試對象，試驗(yàn)器材包含容量瓶多個、高壓滅菌器、旋渦混合器、離心機(jī)和生化培養(yǎng)箱等。試驗(yàn)過程全部由同一試驗(yàn)員進(jìn)行。

1.2試驗(yàn)方法 微生物檢測方法較為繁瑣，本文主要?dú)w納為兩個部分，即材料制備和試驗(yàn)培養(yǎng)，其中材料制備包括肌醇儲備液的制備和菌液的制備。

1.2.1材料制備 (1)制備肌醇儲備液。稱取完成干燥處理的標(biāo)準(zhǔn)肌醇物質(zhì)0.005g，放入250ml的容量瓶內(nèi)，用蒸餾水定容，定容后的肌醇標(biāo)準(zhǔn)液濃度為0.2mg/ml。然后吸取肌醇標(biāo)準(zhǔn)液10 ml，加入到200ml的容量瓶中, 再次用蒸餾水進(jìn)行定容。此時容量瓶內(nèi)肌醇溶液濃度為10μg/ml，制備中間液后，將兩瓶肌醇液放至冰箱內(nèi)低溫保存。實(shí)驗(yàn)中吸取10ml中間液，分別放入100ml容量瓶和50ml容量瓶內(nèi)，用蒸餾水進(jìn)行定容。將肌醇標(biāo)準(zhǔn)液使用高壓滅菌器進(jìn)行為期一小時的高壓消化，溫度設(shè)置為120℃。完成高壓消化后冷卻至自然室溫，再用鹽酸溶液、氫氧化鈉溶液進(jìn)行調(diào)試, 使其轉(zhuǎn)變?yōu)閜H值等于5的微酸性溶液，然后用250ml的容量瓶定容。(2)制備菌液：選擇無菌實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行菌液的制備，在30℃培養(yǎng)基中培養(yǎng)24小時進(jìn)行酵母菌活化。取培養(yǎng)的酵母菌二至三代斜面中的菌種作為儲備菌種，在2℃環(huán)境中保存，保存時效控制在半個月以內(nèi)。于試驗(yàn)前一天取出儲備菌種，用生理鹽水滅菌，并形成菌懸液，裝入離心管內(nèi)進(jìn)行3 min離心處理，離心機(jī)轉(zhuǎn)速設(shè)置為2000r/min。然后使用漩渦振蕩器混合菌懸液與生理鹽水，完成至少三次洗滌。洗滌后, 放入試管借助分光光度計測量波長，透光率達(dá)到60%以上即可。

1.2.2試驗(yàn)培養(yǎng) 將制備好的蒸餾水-肌醇標(biāo)準(zhǔn)液和已測定的培養(yǎng)基放入試管，此時試管內(nèi)肌醇含量為0～10μg。除0肌醇試管(即不含有肌醇的試管)外，其余試管均加入50μl菌懸液。開啟漩渦振蕩器震蕩所有試管, 使肌醇標(biāo)準(zhǔn)液與菌懸液混合, 調(diào)整培養(yǎng)箱內(nèi)部溫度達(dá)到30℃后，加入混合溶液進(jìn)行培養(yǎng)，并測量培養(yǎng)結(jié)果。

1.2.4數(shù)據(jù)處理 本試驗(yàn)數(shù)據(jù)處理使用軟件ELISA的Logistic參數(shù)方程進(jìn)行分析計算，數(shù)據(jù)結(jié)果偏差用RSD%表示。

2 結(jié) 果

2.1肌醇、吸光度二變量相關(guān)性 經(jīng)試驗(yàn)結(jié)果統(tǒng)計分析計算得知，在肌醇變化的標(biāo)準(zhǔn)曲線當(dāng)中, 肌醇試樣0～10μg試管呈現(xiàn)出良好的線性關(guān)系。其中肌醇含量與吸光度之間成正比。經(jīng)計算得出肌醇、吸光度二變量的回歸方程是y=0.0875x+0.7328，相關(guān)系數(shù)R2≈0.994。

2.2試驗(yàn)精密度計算結(jié)果 本次試驗(yàn)所采取的三種品牌同一批次的功能飲料作為樣本，在平行試驗(yàn)中透過試驗(yàn)結(jié)果對不同品牌功能飲料進(jìn)行數(shù)據(jù)觀察, 得出本次試驗(yàn)檢測的精密度情況。結(jié)果顯示，三種功能飲料測試樣本存在細(xì)微的精密度差別，說明三個品牌的功能飲料所含肌醇水平相對接近。此外, 回收率試驗(yàn)與其他類型食品試驗(yàn)的對比分析, 發(fā)現(xiàn)功能飲料實(shí)驗(yàn)品在肌醇標(biāo)準(zhǔn)液回收率方面相比于其他類型食品試驗(yàn)相對穩(wěn)定, 區(qū)間基本維持在98.8%～100%, 說明微生物檢測法檢測食品中肌醇含量準(zhǔn)確度較高。

3 討 論

肌醇是飽和環(huán)狀多元醇，化學(xué)性質(zhì)相對穩(wěn)定，能對抗多種化學(xué)試劑的作用，常用的檢測方法有化學(xué)法、微生物法、氣相色譜法、液相質(zhì)譜法、高效毛細(xì)管電泳法等[4]。但由于較高的準(zhǔn)確度、靈敏度等要求，需要測試更準(zhǔn)確、穩(wěn)定的檢測方法，以保證食品安全等問題[5]。《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)-食品中肌醇的測定》中列舉的第一種檢測方法就是微生物檢測方法，該方法具有高度靈敏性，檢測準(zhǔn)確，且適用于廣泛的食品種類檢測[6]。有資料表示，微生物檢測法的缺點(diǎn)是試驗(yàn)制備溶液雖操作簡單，但步驟繁瑣，且操作周期較長，易受外界環(huán)境因素干擾[7]。

統(tǒng)計分析本次試驗(yàn)結(jié)果得知，肌醇含量與吸光度之間成正比關(guān)系，并由此計算出肌醇、吸光度二變量的回歸方程。另一方面，試驗(yàn)證明功能飲料實(shí)驗(yàn)品在肌醇標(biāo)準(zhǔn)液回收率方面相比于其他類型食品試驗(yàn)明顯穩(wěn)定, 區(qū)間基本維持在98.8%～100%，說明微生物檢測法測定食品中肌醇含量準(zhǔn)確度較高，方法可靠，且操作簡單，靈敏度高，檢測成本較低，值得推廣使用。