結核分枝桿菌耐藥基因檢測在耐藥肺結核治療中的價值分析

陳澤蓮，張肇月，張美霞

（自貢市第一人民醫院呼吸與危重癥醫學科 四川 自貢 643000）

肺結核是臨床常見病之一，而我國則是結核病的高負擔國家，據相關統計顯示，在全球肺結核患者中，我國占比約為1/4。在此病的治療中，藥物是主要治療手段，但在臨床藥物使用增加的同時，耐藥肺結核患者也隨之提高，想要進一步確保耐藥肺結核的診斷準確率，加大對檢測方法的研究就極為關鍵[1]。本文主要就結核分枝桿菌耐藥基因檢測在耐藥肺結核治療中的應用價值進行研究、分析，現報告如下。

1.資料與方法

1.1 一般資料

本次入選人員均選自2019 年6 月—2020 年6 月我院收治的涂陽患者（80 例），采取數字法隨機分為對照組（40 例）和觀察組（40 例）。其中，對照組男22 例、女18 例，年齡27 ～76 歲；觀察組男24 例、女16 例，年齡28 ～76 歲。納入標準：所有患者均符合肺結核臨床診斷標準，自愿參與此次研究。排除標準：合并其他嚴重疾病、精神異常、資料不全者。在研究開始前，患者及其家屬均提前知曉了有關內容，并簽署了知情同意書。兩組一般資料比較差異不具有統計學意義（P＞0.05），有可比性。

1.2 方法

在實際的治療中，應用的藥物包括了乙胺丁醇、利福平、異煙肼。對照組實施常規藥敏試驗，具體方法：使用K-B 試紙擴散法，基于無菌前提下，結合NCCIS 試驗標準對細菌的耐藥性進行判斷、鑒定。觀察組實施結核分枝桿菌耐藥基因檢測聚合酶鏈式反應(polymerase chain reaction,PCR)熔解曲線法，具體方法：取患者的痰標本，落實細菌培養，將病原菌分離，使用符合相關標準的試劑盒完成DNA 提取，基于設計好的引物前提下展開PCR 擴增，落實對DNA 單鏈構象多態性分析，電泳處理非變性聚丙烯酰胺凝膠孔，將溫度、電壓分別設定為4℃、130 ～150 v，經4 ～5 小時后，將凝膠板取出，使用銀染法予以染色處理，將結核分枝桿菌標準株h37Rv 作為對照。

1.3 統計學方法

使用SPSS 20.0 統計軟件完成所有數據的統計、分析，t、χ2分別用于計量、計數資料的檢驗，P＜0.05表示差異具有統計學意義。

2.結果

2.1 耐藥分析

通過相應的檢測發現，觀察組檢出耐1 種藥物的有4 例，同時耐藥2 種藥物的有2 例，而對照組患者檢出1 種藥物耐藥的有5 例，同時耐2 種、3 種藥物的分別有3 例、1 例，差異無統計學意義（P＞0.05），見表1。

表1 兩組患者的耐藥情況對比[n（%）]

2.2 基因檢測

80 例患者中，利福平耐藥株有14 株，突變株數6 株；異煙肼耐藥株18 株，突變株數10 株；乙胺丁醇耐藥株16 株，突變株數8 株。三種耐藥基因突變率差異不明顯（P＞0.05）。見表2。

表2 兩組患者的基因檢測情況對比

3.討論

針對肺結核疾病而言，其屬于重大傳染性疾病，危險性較高，嚴重影響著人們的健康及生活質量。據相關報道指出，相較于發達國家，我國結核病的發生率、死亡率及病菌耐藥率均較高，每年因結核病死亡的人數高達13 萬[2]。在此病的治療中，往往會使用抗菌藥物，如乙胺丁醇、利福平、異煙肼等，可達到對肺結核疾病發生及傳播遏制的目的。但值得注意的是，在病原菌耐藥性增加的同時，抗菌藥物抗感染效率也出現了一定的差異，故為進一步確保治療效果，重視對藥物的細菌耐藥性判斷就顯得尤為重要，在治療方案中起著明顯的指導作用[3]。

有研究指出，結核分枝桿菌耐乙胺丁醇與embB 和306 位點的變異有關；耐異煙肼，與氧化氫酶-過氧化物酶的編碼基因KatG 基因缺失有一定關聯；耐利福平的產生，則與核心區域rpoB 基因圖片有一定關系。通過對結核病致病體的檢測以及耐藥性的分析，有利于為疾病的防治提供更加準確的參考依據[4]。在基于治療次數和耐藥性關系的前提下來說，認為兩者呈正相關性，有臨床研究指出，相較于首次治療的患者，結核病二次復發接受治療的患者，其耐藥率相對較高。由此就可看出，落實對耐藥率的分析，可為臨床用藥提供指導。既往研究在對耐藥性進行分析時，往往會忽略患者的診治次數，導致耐藥性分析不夠客觀，也影響了分析結果的準確性。近年來，對于治療次數和耐藥率方面的研究越來越多，發現初次診治失敗的患者行二次治療后，其耐藥率明顯較高，認為與抗結核藥物的劑量有一定關系，從而就增強了結核分枝桿菌的耐藥性。因此，在對結核病患者進行治療時，要確保選擇科學的治療方法，盡可能的縮短療程，重視疾病的復發，降低病菌耐藥性[5]。

在測定結核分枝桿菌耐藥性中，往往會采用比例法、濃度法等，但有學者指出，這些測定方法需要耗費較長的時間，一般在6 ～8 周，特殊情況下甚至更長，這就難以確保治療的及時性[6]。近些年來，在分子生物技術不斷進步的背景下，分枝桿菌耐利福平、耐異煙肼等相關基因被發現。有研究指出，在檢測rpsL、KatG 等基因圖片檢測中發現，rpsL、KatG 等基因突變率較高，高達90%，本文中相關藥物耐藥株基因也較高，這與相關文獻報道相符[7]。由此就可看出，在耐藥基因檢測中，熒光PCR 熔解曲線法的優勢明顯，主要體現于靈敏性高、特異性高等方面，但值得注意的是，此方法雖然具有較高的應用價值，但實際操作中仍存在一些亟需解決的問題，即操作較為繁瑣，極有可能出現交叉感染現象等。有研究指出，在基因檢測中，LAMP 法、熒光PCR 熔解曲線法均具備較高的特異性及靈敏性，無需應用特殊試劑及預先行雙鏈DNA 變性，其中熒光PCR 熔解曲線法優勢主要體現于快速、簡便、準確等方面。值得注意的是，熒光PCR 熔解曲線法需要應用特殊的儀器，且對試驗環境以及試劑提出了較高的要求。另有研究指出，在耐藥結核分枝桿菌菌株突變方面，熒光PCR 熔解曲線可提供幫助，對于一線、二線抗結核藥物的耐藥性可同時檢測出，這就直接規避了表型藥物敏感實驗的不足，可快速獲取檢測結果。通過分析發現，對于耐多藥 結核分枝桿菌菌株而言，其在EMB、SM 表型耐藥中的穩定性不強，與表型檢測試驗相比，熒光PCR 溶解曲線法的應用價值更高。但是，此方法往往也會受到一定局限，即受方法篩選無氨基酸序列的影響，就極易導致氨基酸改變的突變，從而被判定為突變型。另外，如若檢測樣品的耐藥菌株不均一，菌株比例過于偏低，就可能被判定為敏感型，引發假陰性問題。

綜上所述，結核病是較為常見的一種慢性傳染疾病，發病機制為結核分枝桿菌感染，藥物是主要治療手段，常用的有乙胺丁醇、異煙肼等，能夠控制患者病情的發展，減少死亡率。因此，在肺結核的治療中，就需落實對結核分枝桿菌耐藥性的檢測及分析，合理的選用檢測技術，以確保檢測結果的準確性，從而為患者的診治提供參考，這也是避免患者錯過最佳治療時機的關鍵，應引起重視。