轉錄因子EZH2和RUNX3在骨巨細胞瘤中的表達及與復發的關系研究

李鐵軍，文華軍，鄭鐵鋼，張 朋，張正孟，王繼孟

(中國人民解放軍陸軍第八十一集團軍醫院骨科，河北 張家口 075000)

骨巨細胞瘤由破骨細胞異常增殖、分化引起，是一種罕見良性腫瘤，但可能發展為向肺部轉移的惡性腫瘤，局部侵襲及復發率較高[1]。骨巨細胞瘤早期缺乏典型性臨床特征，隨著患者病情發展，可表現為溶骨性骨破壞，或發生病理性骨折，臨床治療難度增大，臨床首選治療方法為手術刮除術，但術后局部復發率較高，約為10%～30%，對患者的生活質量造成嚴重影響[2]。zeste基因增強子同源物2(enhancer of zeste homolog 2，EZH2)是一種研究廣泛的轉錄阻遏因子，具有高度保守性，可以通過核小體、染色體的修正及與其他轉錄因子相互影響起到調控轉錄的作用，EZH2在細胞核中呈現高表達往往導致抑癌基因表達沉默或降低，導致腫瘤持續惡化[3]。人類RUNT相關轉錄因子3(runt-related transcription factor 3，RUNX3)是RUNT家族的重要一員，是一種新型人類腫瘤抑制基因，與T細胞分化、背根神經節的發育及多種腫瘤密切相關，RUNX3啟動子區域高頻甲基化及半合子表達缺失時，RUNX3表達受到抑制，促進腫瘤的發生、發展[4]。轉錄因子EZH2和RUNX3與骨巨細胞瘤的關系尚不十分清楚，本研究就此展開。

1 資料與方法

1.1一般資料:選取本院2013年10月至2018年1月收治的53例骨巨細胞瘤患者為研究對象，患者均接受手術治療，術中收集患者瘤組織以及瘤旁組織(距瘤組織>3cm)，年齡23～57歲，平均(38.25±10.11)歲，年齡≤40歲有37例，年齡>40歲有16例；其中男性33例，女性20例；腫瘤直徑1～6cm，平均(3.56±0.73)cm，腫瘤直徑≤3cm有9例，腫瘤直徑>3cm有44例；根據影像學檢查對腫瘤進行Campanacci分級[5]，其中Ⅰ級13例，Ⅱ級25例，Ⅲ級15例；根據病理學檢查進行分級，Ⅰ級21例，Ⅱ級15例，Ⅲ級17例；根據是否存在組織浸潤分為，是31例，否22例。納入標準：①經病理學確診為骨巨細胞瘤；②初次接受手術治療者；③近3個月未進行放、化療及藥物治療。排除標準：①合并其他惡性腫瘤者；②合并自身免疫系統疾病者；③因局部復發等原因入院治療者；④臨床資料不完整者。本研究經醫院倫理委員會批準，所有研究對象均簽署知情同意書。

1.2方 法

1.2.1EZH2、RUNX3表達檢測:標本均為石蠟包埋，4μm厚度連續切片，采用免疫組織化學法檢測瘤組織及瘤旁組織中EZH2和RUNX3表達，試劑盒均采購自武漢博士德生物工程有限公司。染色結果由兩位有經驗的病理科醫生采用雙盲法閱片，EZH2、RUNX3主要分布于細胞核內，鏡下出現棕黃色顆粒的細胞即為陽性細胞，將標本置于高倍視野下(×200)，每張切片隨機選取10個視野，每個視野內計數100個腫瘤細胞，根據細胞陽性率及染色程度的乘積計分。細胞陽性率計分標準：陽性率<5%計為0分，5%≤陽性率<25%計為1分，25%≤陽性率<50%計為2分，50%≤陽性率<75%計為3分；；陽性率≥75%計為4分。細胞染色程度計分標準：無色計為0分，淡黃色計為1分，黃色或棕黃色計為2分，棕褐色計為3分。細胞陽性率計分與染色程度計分的乘積為總分，總分<3分為陰性表達，總分≥3分為陽性表達[6]。

1.2.2隨訪:以術后第1天作為隨訪起點，采用電話或門診方式進行隨訪，為期36個月，術后12個月內每三個月進行一次隨訪，術后24～36個月每六個月隨訪一次，以骨巨細胞瘤患者出現復發為終點事件，出現終點事件或隨訪期滿則為隨訪終點(無失訪)，隨訪期內出現復發者為復發組，否則為未復發組。

1.3統計學方法:采用SPSS22.0統計學軟件處理數據。計數資料以率(%)表示，采用卡方檢驗；采用Spearman進行相關性分析。P<0.05，為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1瘤旁組織和瘤組織EZH2、RUNX3陽性表達率比較:與瘤旁組織相比，瘤組織中EZH2陽性表達率較高(P<0.05)，RUNX3陽性表達率較低(P<0.05)，見表1。免疫組織化學染色結果顯示，瘤組織EZH2、RUNX3主要分布于細胞核內，鏡下出現棕黃色顆粒的細胞為陽性細胞，如圖1所示。

表1 瘤旁組織和瘤組織EZH2 RUNX3陽性表達率比較n(%)

2.2瘤組織EZH2、RUNX3表達與臨床病理特征的關系:瘤組織EZH2、RUNX3表達與年齡、性別無關(P>0.05)，與腫瘤直徑、影像學分級、病理學分級、組織浸潤程度均有關(P<0.05)，見表2。

表2 瘤組織EZH2 RUNX3表達與臨床病理特征關系n(%)

圖1 瘤組織EZH2、RUNX3表達情況(免疫組織化學染色，200×)

2.3瘤組織EZH2、RUNX3表達相關性分析:骨巨細胞瘤瘤組織中EZH2、RUNX3表達呈負相關(r=-0.544，P<0.05)，見表3。

表3 瘤組織EZH2 RUNX3表達相關性分析

2.4EZH2、RUNX3表達與骨巨細胞瘤患者隨訪期內復發關系分析:與未復發組相比，復發組EZH2陽性表達率較高(P<0.05)，RUNX3陽性表達率較低(P<0.05)，見表4。

表4 未復發組和復發組EZH2 RUNX3陽性表達率比較n(%)

3 討 論

EZH2是多梳蛋白家族的核心成員，定位于人染色體7q35～7q36區間上，是重要的核轉錄調控因子。EZH2可沉默基因表達及靶基因特定區域的組蛋白甲基化，導致靶基因轉錄失活，與食管癌的發展相關[7]。葉貝華等[8]研究發現，EZH2過表達與鼻咽癌遠處轉移及患者預后不良有關。本研究發現，與瘤旁組織相比，骨巨細胞瘤瘤組織EZH2陽性表達率較高，且與腫瘤直徑、影像學分級、病理學分級、組織浸潤程度及預后復發狀況相關。提示EZH2可能參與骨巨細胞瘤的發生及病情發展，或可成為反映患者臨床病情嚴重程度及預后評估的生物學指標，原因可能是高表達的EZH2對腫瘤抑制基因具有抑制作用，從而促進腫瘤的增殖、侵襲及轉移等。

RUNX3是一種抑癌基因，定位于人染色體1p36.1區域，能夠調控宮頸癌細胞的生長、遷移和侵襲[9]。孫建莉等[10]研究發現，胃癌組織中RUNX3陽性表達率較癌旁組織低，且與病理分期、浸潤程度及淋巴結轉移有關，在胃癌的發生、發展中扮演重要角色。喬莉等[11]研究認為，RUNX3基因與骨肉瘤存在必然的聯系，其中RUNX3啟動子甲基化不僅可抑制抑癌基因功能，同時其與骨肉瘤腫瘤血管也存在信號通路的調節關系，可作為治療骨肉瘤的新靶向藥物。本研究中，骨巨細胞瘤瘤組織RUNX3陽性表達率較瘤旁組織低，與患者腫瘤直徑、影像學分級、病理學分級、組織浸潤程度均有關。提示RUNX3可能與骨巨細胞瘤的發生及病情有關，RUNX3呈現低表達應可能與其啟動子富含的胞嘧啶-磷酸-鳥嘌呤基序過度甲基化有關[12]。同時本研究發現，與未復發組相比，復發組RUNX3陽性表達率較低，提示RUNX3可能用于患者預后狀況的評估。

Lian等[13]研究發現，喉癌患者中EZH2過表達，RUNX3表達缺失，EZH2可通過調節RUNX3的表達促進喉癌細胞增殖。本研究Spearman相關分析結果顯示，骨巨細胞瘤瘤組織中EZH2、RUNX3表達呈負相關，原因可能是EZH2與RUNX3的啟動子結合，通過催化H3組蛋白第27位賴氨酸三甲基化達到抑制基因表達的作用，使RUNX3低表達或缺失，從而調控腫瘤細胞的增殖、分化，表現為EZH2對RUNX3的表達存在抑制作用，促進腫瘤細胞增殖[14]。

綜上所述，骨巨細胞瘤瘤組織中EZH2為高表達，RUNX3為低表達，均與患者腫瘤直徑、影像學分級、病理學分級、組織浸潤程度相關，兩者呈負相關，可能成為骨巨細胞瘤的分子標志物，對病情及預后評估提供參考依據。本研究也存在一定的局限性，未對EZH2、RUNX3作用機制進行深入研究，在以后的工作中將圍繞此重點展開。