兒童不同亞型呼吸道合胞病毒感染的臨床流行特征及氣候因素分析

吳守業，林道炯，王亞洲

(海南省婦女兒童醫學中心兒科，海南 海口 570206)

呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus,RSV)是急性下呼吸道感染(acute lower respiratory tract infections,ALRTIs)的最為常見病原菌，是引起支氣管肺炎、毛細支氣管炎、大葉性肺炎、間質性肺炎及哮喘發展的主要原因，常表現為發熱、咳嗽咳痰、喘息等癥狀，可聞及肺部濕羅音或哮鳴音，RSV感染后可出現氣道黏膜水腫、黏液分泌增多、上皮細胞脫落，呈現為氣道高反應、氣道慢性炎癥，是患兒出現反復感染喘息甚至哮喘的重要原因[1,2]。RSV可分為RSV-A和RSV-B兩種亞型，可引起不同的臨床流行病學特征，給患兒及家庭帶來了一定疾病負擔，嚴重影響患兒的生活質量[3]。目前有關兒童RSV流行病學特征及疾病負擔的相關研究較多，而兒童不同亞型RSV臨床流行病學特征及氣候因素的系統性研究甚少。因此，本研究擬分析不同亞型RSV感染的流行特征、臨床特點及氣候因素的相關性研究，以期為RSV的預防控制及診治提供重要的參考依據。

1 資料與方法

1.1研究對象:選擇2018年1月至2020年12月我院住院RSV感染急性下呼吸道感染患兒309例，男188例(60.84%)，女121例(39.16%)，平均年齡為5.05(2.02～13.56)月，所有研究對象均進行鼻咽分泌物病毒檢測。入選標準：病程在1個月內存在急性下呼吸道感染及哮喘發作的患兒，鼻咽分泌物檢測存在RSV感染者。排除標準：存在先天性心臟病、支氣管發育不良、肺大泡、肺膿腫、支氣管擴張、其他系統性疾病患兒；鼻咽分泌物檢測非RSV感染者。

1.2方 法

1.2.1鼻咽分泌物采集:一側鼻腔咽部以下插入一次性無菌吸痰管快速吸取，將鼻咽分泌物置于2mL無菌生理鹽水中稀釋，進行病原學檢測，先震蕩混勻，將標本移至離心管中，500rmp，離心5min，棄上清，加入PBS 300μL吹打為懸液。

1.2.2免疫熒光法檢測RSV:取25mL懸液于干燥玻片上，干燥箱干燥1h，加入冷丙酮溶液固定細胞，采用美國Chemicon公司呼吸道病毒檢測試劑盒檢修檢測，在玻片上加入10μL熒光標記的呼吸道病毒單抗，37℃孵育30min，PBS洗3次，干燥后加入固定液，蓋上蓋玻片后于顯微鏡下觀察，在200倍熒光顯微鏡下≥5個熒光細胞為RSV感染陽性。

1.2.3熒光定量PCR檢測RSV分型:將鼻咽部分泌物用Trizol(美國Invitrogen公司)裂解充分后，加入200μL氯仿，震蕩混勻，12000rpm離心10min，取上層液至新的EP管中，加入100μL異丙醇，充分震蕩混勻后離心，棄上清，采用乙醇洗后離心，加入無酶水制為RNA，采用逆轉錄酶(南京諾唯贊公司)逆轉錄為cDNA，采用Xpert Xpress Flu/RSV Assay檢測盒對RSV亞型檢測，進行熒光定量PCR擴增(RT-PCR)，引物：RSV-AF：5’-AGATCACTTCTGTCATCCAGCAA-3’、RSV-AR:5’-TTCTGCACATCATAATTAGGAG-3’，RSV-A探針:CACCATCCAACGGAGCACAGGAGAT，RSV-BF:5’-AAGATGCAAATCATAAATTCACAGGA-3’，RSV-BR:5’-TGATATCCAGCATCTTTAAGTA-3’，RSV-B探針：TTTCCCTTCCTAACCTGGACATA，反應條件：95℃ 30s 預變性，95℃ 10s，60℃ 30s，40個循環，37℃ 5S結束。S型擴增曲線為相應HSV亞型陽性，典型S型曲線設定閾值為循環次數CT值≤40。混合感染檢測：采用熒光定量PCR對HSV陽性患兒進行流感病毒、副流感病毒、腺病毒、偏肺病毒、冠狀病毒、鼻病毒、博卡病毒等檢測。

1.2.4觀察指標:收集所有研究對象的一般臨床資料(月齡、出生體重、性別、生產方式、足月兒、濕疹史、過敏史、喘息史)、流行特征(年份、年齡、季節、病情程度)、臨床特點(發熱、咳嗽、喘息、混合感染、病程和住院時間)及氣候因素，病情程度依據2013年版社區獲得性肺炎管理指南判斷輕度和重度患兒[4]，氣候因素包括平均氣溫(℃)、月總降雨量(mm)、月相對濕度(%)、月日照時間(h)、月平均風速(m/s)、空氣污染PM2.5(μg/m3)、PM10(μg/m3)、O3(μg/m3)、SO2(μg/m3)、NO2(μg/m3)、CO(mg/m3)的含量。

2 結 果

2.1不同RSV亞型感染的一般臨床資料分析:309例RSV患兒中，RSV-A患兒186例(60.19%)，RSV-B患兒123例(39.81%)，以RSV-A型為優勢，兩組患者在月齡、出生體重、性別、生產方式、足月兒、濕疹史、過敏史、喘息史等一般臨床資料上比較差異無統計學意義(P均>0.05)，見表1。

表1 不同亞型RSV感染患兒一般臨床資料比較n(%)

2.2不同 RSV亞型感染的流行特征分析:流行病學特征分析中，RSV-A和RSV-B組在不同年份、不同季節上差異有統計學意義(P均<0.05)，2018年和2019年以RSV-B感染為優勢，2020年以RSV-A感染為優勢，RSV-A和RSV-B感染患兒以3歲以內、冬春季感染和輕度癥狀為主，RSV-A和RSV-B組在不同月齡、病情程度上差異無統計學意義(P均>0.05)，見表2。

表2 不同亞型RSV感染患兒流行病學特征分析n(%)

2.3不同 RSV亞型感染的臨床特點分析:臨床特點分析中，RSV-A和RSV-B組在發熱、咳嗽、喘息、混合感染等臨床癥狀、病程及住院時間上差異無統計學意義(P均>0.05)，見表3。

表3 不同亞型RSV感染患兒臨床特點

2.4不同RSV亞型感染與氣候因素的相關性分析:經Spearman相關性分析示，RSV-A感染與PM2.5、PM10、SO2、NO2、CO呈正相關(r=0.658，P<0.001；r=0.612，P=0.002；r=0.501，P=0.008；r=0.728，P=0.001；r=0.642，P<0.001)，與平均氣溫、月總降雨量、月平均風速及O3呈負相關(r=-0.592，P=0.001；r=-0.502，P=0.005；r=-0.618，P=0.002；r=-0.654，P<0.001)，與月相對濕度、月日照時間無明顯相關性(P>0.005)；RSV-B感染與CO呈正相關(r=0.559，P<0.001)，與月平均溫度、月總降雨量及O3呈負相關(r=-0.581，P=0.001；r=-0.368，P=0.025；r=-0.598，P<0.001)；與月相對濕度、月日照時間、月平均風速、PM2.5、PM10、SO2、NO2無明顯相關性(P>0.05)，見表4。

表4 不同亞型RSV感染患兒與氣候因素的Spearman相關性分析

3 討 論

RSV是導致嬰幼兒ALRTIs的主要病因，主要表現為毛細支氣管炎、間質性肺炎和哮喘急性發作，由于嬰幼兒免疫功能相對薄弱，發生感染機率增加，易導致暴發流行和重復感染，而RSV的反復感染最為常見，尤其是2歲以內兒童至少經歷過一次RSV感染[5]。RSV屬于副黏病毒科的肺病，由基質蛋白、疏水性小蛋白和糖基化表面蛋白(F蛋白和G蛋白)等構成的包膜，可根據G蛋白的記憶特性和對抗體的反應，可分為RSV-A和RSV-B型[6]。近年來，世界范圍內流行的RSV-A株為ON1基因型，RSV-B株為BA基因型[7]。不同國家及地區RSV感染存在一定特征，因此，本研究通過分析海南地區不同亞型RSV感染的流行特征、臨床特點及氣候特征，為該病的防治提供重要的臨床流行病學特征。

本研究中，分析了2018年至2020年兒童RSV感染的流行病學特征，研究發現RSV-A患兒186例(60.19%)，RSV-B患兒123例(39.81%)，以RSV-A型為優勢，與大部分國家支持的觀點以RSV-A感染為流行株，可能是RSV-A患兒基因型內的遺傳變異度高，致病性更高，易引起A亞型的流行[8]。通過不同年齡段分析不同亞型RSV感染的流行特征中，2018年和2019年以RSV-B感染為優勢，2020年以RSV-A感染為優勢，冬春季感染為主，表明RSV存在兩亞型交叉循環感染趨勢，在每個流行季以一個亞型為優勢群，而發病主要集中在春秋季。另外，RSV-A和RSV-B感染患兒以3歲以內感染為主，尤其是1歲以內嬰幼兒感染占72.49%(224/309)，但RSV-A和RSV-B組在不同月齡上無顯著差異，與既往研究報道存在一致性[9,10]。可見，RSV感染好發于小年齡的嬰幼兒，可能是嬰幼兒各系統尚未發育完全，免疫系統尚不成熟，針對融合蛋白F和吸附蛋白G的IgA、IgM、IgG等抗體較少，而胎兒通過胎盤傳遞的母體IgG抗體不足，機體免疫力低下，易引起RSV感染增加[11]。

既往研究提示，不同亞型RSV感染所引起的病情嚴重度存在差異，而不同地區報道存在不一致性[11]。在本研究中，以輕度癥狀為主，RSV-B型病情嚴重度稍高，但兩組間在病情嚴重度上尚未達到統計學意義。在臨床特點分析中，相對較高比例的患者出現咳嗽和喘息等癥狀，發熱、混合感染癥狀少見，但兩組不同亞型RSV感染中在發熱、咳嗽、喘息、混合感染等臨床癥狀、病程及住院時間上無顯著差異，今后需進一步擴大樣本量和多中心進行臨床特點分析，以及分析不同亞型RSV感染的基因型特點。

研究表明，RSV流行與氣溫、降水等氣候特征密切相關，而不同亞型RSV感染與氣溫、降雨量、日照時間及風速存在相關性[12]。海南地區處于熱帶地區，四季溫差小，常年日照時間長，夏季高溫濕熱，低風速和降雨量較多，全年相對濕度變化不大，冬春季節溫度有所降低可引起上呼吸道黏膜血管收縮，纖毛擺動下降，氣道分泌物的排除下降，易導致RSV感染。大氣中O3是一種強氧化劑，可與RSV發生反應，阻止病毒輔助，可將紫外線轉化為熱能，具有保護作用。SO2長期接觸可引起氣道黏膜水腫、滲出增多，有利于RSV的粘附復制。空間中PM2.5、PM10顆粒物質易在肺內沉積，可導致呼吸道黏膜破壞，造成感染幾率增加。本研究發現RSV-A感染與氣溫、降雨量、風速和O3呈負相關，與空氣PM2.5、PM10、SO2、NO2、CO呈正相關，RSV-B感染與CO呈正相關，與月平均溫度、月總降雨量及O3呈負相關，提示不同亞型RSV-A感染與氣候特征存在明顯相關性。

綜上，RSV-B感染在2018年和2019年流行，RSV-A感染在2020年流行，RSV-A和RSV-B感染患兒以3歲以內、冬春季感染和輕度癥狀為主，主要表現為咳嗽和喘息等臨床癥狀，不同亞型RSV感染與氣候環境因素存在相關性，RSV-A與氣溫、降雨量、風速和空氣質量相關性，RSV主要與氣溫、降雨量、O3及CO相關。這些不同亞型RSV感染的2018年至2020年RSV感染的流行病學、臨床特征及氣候特點，為早期防控RSV感染患兒提供重要的理論依據。