白細胞介素-9對血清學陰性類風濕關節炎的診治意義研究

劉 暢,陶曉峰,戴冰冰,李 然,遲 冰,劉佳麗

(1.大連市中心醫院 風濕免疫科,遼寧 大連116033;2.大連市中心醫院 病理科;3.大連醫科大學碩士研究生在讀)

白細胞介素-9(IL-9)在多種自身免疫病中起著重要作用，近來國外研究發現IL-9在類風濕關節炎(RA)中發揮重要致炎作用[1]。本研究擬通過檢測血清學陰性RA(SNRA)患者血清和關節液IL-9水平，為SNRA的早期診斷治療和預后判斷提供依據。

1 對象與方法

1.1 對象

選取大連市中心醫院風濕免疫科2017年1月至2019年1月就診的初治SNRA患者50例，同時選取骨關節炎(OA)患者52例、健康對照47例，收集臨床資料，留取血清，每組入選20例觀察對象留取關節液。RA診斷符合1987年美國風濕病學會(ACR)推薦的分類標準[2]或2010年美國風濕病學會/歐洲抗風濕病聯盟(EULAR)制定的RA分類標準[3]。所有患者在試驗前1個月內未應用過激素或免疫抑制劑治療。對初治SNRA患者分別進行治療后3個月、6個月隨訪，留取血清，部分留取關節液，進行不同時間點的IL-9水平檢測，同時收集患者不同時間點的臨床資料，包括關節腫痛數目、RF、C反應蛋白(CRP)、血沉(ESR)、疾病活動度評分(DAS28)、肌肉骨骼超聲等資料進行相關性分析。

1.2 方法

血清和關節液IL-9水平應用酶聯免疫法(ELISA)檢測(R&D公司)，實驗步驟按說明書進行。采用7關節超聲評分法[4]，對滑膜炎和骨侵蝕程度進行超聲等級評分。

1.3 統計學處理

2 結果

2.1 臨床及實驗室特征

入選的SNRA患者共有50例，其中男12例，女38例，男女之比約為1∶3，平均年齡為47.44±9.64歲，平均病程14.00±9.09月。SNRA組與OA組、健康對照組的性別、年齡無顯著性差異(P>0.05)，SNRA組的ESR、CRP水平較OA組和健康對照組顯著升高(P<0.01)(表1)。

表1 三組受試者臨床資料和實驗室檢查指標的比較

2.2SNRA患者治療前的血清、關節液IL-9水平顯著高于OA組和健康對照組(P<0.001)(表2)。

表2 三組受試者血清、關節液IL-9比較

2.3SNRA患者治療后3個月、6個月疾病活動度DAS28和超聲滑膜血流評分明顯減低，血清和關節液IL-9水平也顯著下降(P<0.001)(表3)。

表3 SNRA組患者治療前后血清、關節液IL-9水平和疾病活動度的比較

2.4SNRA組患者血清、關節液IL-9水平與骨侵蝕的相關性分析 Spearman相關分析結果顯示，SNRA組患者基線期的血清、關節液IL-9水平與基線期及治療后6個月的骨侵蝕評分均呈正相關(P<0.05)(表4)。

表4 SNRA組患者基線期血清、關節液IL-9水平與骨侵蝕評分的相關性分析

3 討論

IL-9由Th9細胞分泌產生，Th9細胞是一種促炎細胞，IL-9通過與其相應受體IL-9R結合發揮生物學效應，參與多種自身免疫性疾病的病理過程[5]。研究證實，Th9細胞和IL-9在過敏性疾病、寄生蟲感染、自身免疫性腸炎、系統性紅斑狼瘡等疾病中均發揮重要作用[6]。

本研究發現，SNRA患者血清和關節液的IL-9水平均顯著高于OA組和健康對照組，提示IL-9可能參與了RA的發病過程。動物實驗證實，膠原誘導關節炎小鼠(CIA)模型的IL-9水平升高，并且伴隨STAT3的持續活化、急性相延長、免疫反應增強和自身免疫性關節炎[7]。近年研究發現，RA患者外周血中Th9細胞及IL-9的表達水平明顯高于健康對照組[8]。Ciccia等[9]證實RA患者的滑膜組織中IL-9和IL-9R表達顯著增加，并與患者滑膜炎癥浸潤程度和異位淋巴濾泡組織有關。關于RA中IL-9升高的機制尚不明確，Th9細胞發育需要來自不同細胞因子的信號，尤其是IL-4；RA中IL-9過表達的同時伴隨著IL-4的過表達，提示適應性免疫參與調節Th9細胞的發育，并且提示RA中免疫系統失調的復雜性。

本研究還發現，SNRA患者治療后血清、關節液的IL-9水平下降，同時伴隨疾病活動度和超聲下滑膜炎癥的明顯改善，提示IL-9持續參與RA的疾病發展過程，IL-9減低與治療后的病情好轉相關。同時SNRA患者治療前的血清、關節液的IL-9水平與治療前、后骨侵蝕評分均呈正相關，提示基線期的IL-9水平與遠期骨侵蝕發生風險有關。Khan等[10]發現給RA患者應用利妥昔單抗可以顯著下調IL-9的表達，減輕炎癥，緩解疾病進展，提示IL-9與RA炎癥程度相關。用骨髓間充質干細胞(MSCs)處理佐劑誘導關節炎(AIA)模型，通過組織學評估評價關節炎癥和軟骨損傷，結果發現MSCs治療可以減輕AIA的關節炎癥，同時降低了AIA中的IL-9表達[11]。研究發現，IL-9及IL-9R參與RA中成纖維樣滑膜細胞(FLS)的增殖、促炎因子的誘導和金屬蛋白酶3(MMP3)的上調，這些都是血管翳形成的關鍵環節。因此，IL-9/IL-9R是RA細胞因子網絡中的重要促炎因子[12]。

本研究證實，SNRA患者的IL-9水平升高，且與疾病活動度相關，提示IL-9可能參與了RA的發生和發展過程。SNRA患者的基線期IL-9水平與遠期發生骨侵蝕相關，提示IL-9有望成為SNRA早期診斷、治療效果評定、預測骨侵蝕發生風險以及判斷預后的有益指標，并可能為RA治療提供新的治療靶點。