MTHFR C677T基因多態性在孕前檢查和妊娠狀態中的臨床應用分析

嵇如月，趙晨蕊，方 玲

(吉林大學中日聯誼醫院 檢驗科，吉林 長春130033)

葉酸參與生物系統RNA和DNA的合成及氨基酸的代謝，懷孕期間由于細胞生長和增殖非常迅速，因而需要更多[1]。攝取量不夠或遺傳因素導致葉酸的利用能力降低，都能引起機體葉酸缺乏，亞甲基四氫葉酸還原酶(MTHFR)作為葉酸代謝通路中的一個關鍵酶，它包含11個外顯子及10個內含子，位于1號染色體1p36.3上[2]。常見的突變如MTHFR第4外顯子677位上胞嘧啶被胸腺嘧啶替代，從而使其編碼的纈氨酸被丙氨酸替代。MTHFR突變可造成葉酸代謝障礙，同型半胱氨酸水平升高，C677T位點的突變使酶對熱不耐受而使其活性降低，影響葉酸的代謝和利用。與CC型個體酶活性相比，CT型只有65%，而TT型僅有30%[3]。妊娠狀態的婦女該酶活性降低可導致葉酸代謝和利用障礙，增加流產發生的可能性，已有研究表明MTHFR基因多態性與原因不明復發性流產相關[4]。本研究調查了育齡女性MTHFR C677T基因多態性在長春地區的頻率分布情況，報道如下。

1 對象與方法

1.1 研究對象

2019年2月到2020年5月在吉林大學中日聯誼醫院門診進行葉酸利用能力遺傳檢測的900例育齡女性作為研究對象,年齡跨度從19歲到43歲,平均年齡29.4±4.1歲。其中進行孕前檢查的有360人，平均年齡29.3±4.1歲；妊娠狀態的有540人，平均年齡29.4±4.2歲。所收集對象均排除患有糖尿病、系統性紅斑狼瘡等基礎疾病及停經原因待查等不確定是否為妊娠狀態的女性。

1.2 檢測方法

抽取每個待檢者2 ml EDTA 抗凝靜脈血，準備一對0.2 ml無菌的PCR薄壁管，分別在蓋子上標好M和WT，每份都需要做兩個反應，從4℃冰箱中把試劑拿出放置室溫后，迅速離心，把44 μl M擴增液加到M管中，再加入1 μl反應液；把44 μl WT擴增液加到WT管中，再加入1 μl反應液，蓋緊，漩渦樣混勻，快速離心以備使用。把5 μl待檢測的血樣本分別加入M、WT管中，蓋緊混勻，進行離心。把檢測卡取出，將M與WT管中的待檢測產物滴到樣品滴加處，3 min左右觀察檢測線上有沒有出現條帶，以此判斷結果即C677T位點的基因型。CC型結果顯示為M管在檢測線上不出現條帶，WT管在檢測線上出現條帶；TT型結果顯示為M管在檢測線上出現條帶，WT管在檢測線上不出現條帶；CT型結果顯示M管和WT管在檢測線上都出現條帶。

1.3 統計學分析

采用SPSS 20.0軟件包對數據進行統計學分析，所有數據均為計數資料，組間比較采用χ2檢驗方法，P<0.05表示為差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 孕前檢查中不孕不育女性與對照組女性基因型頻數分布情況

在進行孕前檢查的360名女性中，165人被診斷為不孕不育(45.8%)，195人作為正常對照。經χ2檢驗，CC、CT和TT基因型頻率在不孕不育組(8.5%、77.0%、14.5%)和對照組(7.7%、79.0%、13.3%)之間沒有顯著差異(P>0.05)。對等位基因C和T在兩組間的頻率進行χ2檢驗，發現MTHFR C677T在該隊列中與不孕不育無關(P=0.96，OR [95%CI]=1.01[0.75-1.35])。見表1。

表1 孕前檢查女性MTHFR C677T基因型及等位基因分析

2.2 妊娠狀態中診斷為先兆流產女性與對照組女性基因型頻數分布情況

在妊娠狀態的540名女性中，80人被診斷為先兆流產(14.8%)，460人為正常對照。經χ2檢驗，CC、CT和TT基因型頻率在先兆流產組(3.8%、78.8%、17.4%)和對照組(10.0%、83.5%、6.5%)之間具有顯著差異(P<0.05)。對等位基因C和T在兩組間的頻率進行χ2檢驗，發現MTHFR C677T在該隊列中與妊娠先兆流產風險增加有關(P=0.04，OR[95%CI]=1.41[1.01-1.98])。見表2。

表2 妊娠狀態女性MTHFR C677T基因型及等位基因分析

3 討論

不孕不育是一個全球性熱點問題，近年來其患病率在不斷上升，其中約50%的病因源自女性不孕[5]，即使是備孕成功的女性，也存在著流產的風險。引起先兆流產的原因復雜多樣，某些先天性因素難以預防，因此臨床難以做出確切診斷[6]。MTHFR是參與葉酸的轉運和代謝的一種關鍵酶。目前，MTHFR 基因檢測被廣泛用于臨床診斷葉酸代謝能力，并為醫生在懷孕或懷孕期間使用葉酸等藥物提供了參考。本研究旨在調查MTHFR C677T基因型在長春地區孕前檢查和妊娠狀態的女性中的頻率分布情況，分析其是否與女性不孕不育及先兆流產相關。

研究顯示，尚未發現MTHFR C677T 位點在該隊列中與不孕不育具有相關性，這與Soligo等人的報道相符[7]，該研究對巴西130名不孕癥婦女及260名育齡婦女進行分析，病例組突變頻率為58.5%(n=76)，對照組突變頻率為49.2%(n=128)，攜帶突變等位基因在兩組之間無顯著差異。其中，病例組中13名婦女(10%)和對照組中23名育齡婦女(8.8%)發生了純合子突變，經分析后，純合子突變在兩組之間也無顯著差異。該研究結果表明，即使是純合MTHFR C677T突變，尚不能作為不孕癥的危險因素。但也有文獻表明C677T基因型與女性不孕不育存在相關性[8-9]。因此MTHFR C677T基因多態性對女性不孕不育的研究仍有爭議，這可能由于患者入選及排除標準不一致，且存在種族和地域的差異，人們長期的生活環境、飲食習慣也不盡相同，因此結果存在偏差。

在本隊列中，妊娠狀態女性先兆流產組與對照組比較，TT基因型頻率及T等位基因頻率均有顯著差異。因此推斷TT基因型突變可能是長春地區女性先兆流產的易感因素之一。楊瑞利等[10]對西安長安醫院452名孕婦進行研究，其中先兆流產組(n=132，CC 17.4%，CT 50.0%，TT 32.6%)和對照組(n=320，CC23.8%，CT 49.6%，TT 26.6%)基因型差異具有統計學意義,MTHFR C677T位點突變可能與女性先兆流產的發生有關。周青等[11]進行meta分析結果表明MTHFR C677T 基因多態性可能增加中國婦女先兆流產的風險(OR=1.13,95% CI 1.06-1.20)。以上研究均與本隊列結果一致。如果能在孕前盡早對備孕女性MTHFR C677T基因型進行檢測，并及時、合理地補充葉酸，可以降低先兆流產的發生。因此，MTHFR C677T檢測不僅為育齡婦女的葉酸補充提供了參考依據，對孕期不良狀態的預防也具有重要參考價值。鑒于本研究只針對長春地區女性，有一定局限性，今后有必要擴大隊列，對更大范圍地區的女性進行相應探究。在了解基因多態性等遺傳特征的基礎上，有針對性的制定出適合的衛生政策，更好地幫助孕期及備孕女性合理補充葉酸。隨著分子生物學和基因工程的快速發展，臨床醫生和科研人員對于MTHFR C677T基因多態性的研究也將更為深入，這將為生殖疾病及其他相關疾病的診治及預防發揮重要作用。