半定量法檢測糞便鈣衛蛋白在炎癥性腸病中的應用價值

單智惠，時培美，吳 萍，周 琳*，施 斌

(1.上海中醫藥大學附屬市中醫醫院 檢驗科，上海200071;2.海軍軍醫大學附屬長征醫院 消化內科，上海200003;3.海軍軍醫大學附屬長征醫院 實驗診斷科，上海200003)

炎癥性腸病(IBD)是一種腸道慢性非特異性炎癥性疾病，包括克羅恩病(CD)和潰瘍性結腸炎(UC)，常常緩解與活動交替發作，反復復發，對于IBD的臨床管理，一直是臨床醫生面臨的難題。目前臨床上用于評估病情的方法有：內鏡檢查、實驗室檢查、影像學檢查和臨床活動指數評分等，但分別具有侵入性、非特異性、放射性和主觀性等特點[1]。因此，一項能客觀地、非侵入性、可反復檢測、價格低廉、耗時短、簡單易行地評估IBD活動度的方法是臨床上所期待的。糞便中的鈣衛蛋白(FC)來源于中性粒細胞，能反映腸道的炎癥程度[2]。本研究采用半定量的膠體金快速檢測方法檢測糞便中的鈣衛蛋白，以探討糞便鈣衛蛋白與IBD活動度的關系，從而為IBD患者的管理提供有意義的檢測指標。現將結果報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料71份IBD患者的糞便樣本全部來源于上海長征醫院樣本庫，同時收集10例健康人糞便樣本作為對照，納入的IBD患者均為2015年至2020年本院消化內科收治并確診的病例，診斷符合2018版《炎癥性腸病診斷與治療的共識意見》。根據患者的疾病情況分為緩解組、活動組和健康對照組。活動組44例，緩解組27例，健康對照組10例。活動組男性為24例，女性20例，年齡(46.52±16.72)歲；緩解組男性 13 例，女性 14例，年齡(38.48±14.65)歲；健康對照組男性7 例，女性3例，年齡(21-69)歲。三組患者的性別、年齡等基本資料無顯著差異，具有可比性(P>0.05)。

1.2 納入標準①年齡18-80歲；②在上海長征醫院完成結腸鏡檢查；③糞便留取在結腸鏡檢查之前。排除標準：①患有嚴重器質性疾病患者；②合并IBD以外的其他消化道疾病者；③近期服用阿司匹林或非甾體抗炎藥者。

1.3 方法

1.3.1糞便樣本的采集及臨床信息收集 留取患者腸道準備前的糞便樣本于糞便收集容器內，-80℃保存，用于后期FC檢測。由專業醫師記錄患者的性別、年齡、Mayo評分及簡化CDAI評分。Mayo的評分方法及病情分析見表1，CDAI的活動指數計算見表2。

表1 評估潰瘍性結腸炎活動性的改良Mayo評分系統

表2 簡化克羅恩活動指數計算法

1.3.2FC的膠體金法半定量檢測 嚴格按照鈣衛蛋白檢測試劑盒(膠體金法)說明書進行操作(廈門為正生物科技股份有限公司，閩械注準20152400169)。糞便標本于室溫解凍后，用取樣棒在糞便的不同部位挑取樣本約50 mg，放入裝有稀釋液的糞便采集管中，旋緊蓋子后，充分混勻。若腹瀉患者的糞便較稀，則用一次性吸管吸取樣本，滴加3滴(約100 μl)樣本至糞便采集管中，將樣本和稀釋液充分搖勻。然后垂直滴加3滴樣本至檢測卡加樣孔中心，10-15 min內判讀結果。

1.4 FC的結果判斷正常參考區間：<15 μg/g，提示樣本中鈣衛蛋白處于正常水平。

炎癥參考區間：≥60 μg/g，提示存在腸炎疾病風險。FC濃度在15 μg/g-60 μg/g之間，提示可能處于正常水平，也可能存在腸易激綜合征風險。根據以上判讀結果分組，該方法為半定量，可以將60 μg/g作為臨界值。

1.5 觀察指標(1)比較IBD患者與健康人糞便中鈣衛蛋白含量的差異；(2)根據IBD患者的疾病活動性分為活動組和緩解組，比較兩組糞便鈣衛蛋白的差異；(3)計算糞便鈣衛蛋白用于診斷IBD的靈敏度、特異性。

2 結果

2.1 IBD患者與健康對照的鈣衛蛋白比較71例IBD患者與10例健康對照的鈣衛蛋白檢測結果見表3，采用秩和檢驗。結果顯示，以60 μg/g作為臨界值，兩組的鈣衛蛋白含量差異有統計學意義(P<0.05)；與健康人相比，IBD患者的FC含量明顯升高。

表3 IBD患者與健康對照的鈣衛蛋白比較(N，n%)

2.2 活動組與緩解組患者的鈣衛蛋白含量比較以60 μg/g作為臨界值時，活動組與緩解組患者的鈣衛蛋白含量有顯著差異(P<0.05)，見表4。

表4 活動組與緩解組患者的鈣衛蛋白含量比較

2.3糞便鈣衛蛋白用于診斷IBD的靈敏度為67.61%、特異性為80.00%，IBD組與健康對照組的FC檢測結果見表5。

表5 IBD組與健康對照組的FC檢測結果

3 討論

IBD是一種慢性腸道肉芽腫性的炎癥性疾病，無法根治，具有終生復發傾向，常常活動期與緩解期交替發作。臨床常用腸鏡來評價疾病活動度，但成本高且具有侵入性；血液標志物CRP及ESR也可用來進行活動性評估，但敏感性和特異性都不高[1]。目前臨床常用的評價疾病活動的方法都有各自的優缺點，對治療疾病的指導有限，因此，急需一種非侵入性、可靠的標志物來檢測IBD的活動度，對治療做出及時、準確的指導。

FC是S100蛋白家族的成員之一，主要來源于中性粒細胞，它存在于各種體液中，具有直接的抗菌作用，與炎癥的嚴重程度呈正比關系，且其在糞便中的濃度約為血漿中的六倍。因此在IBD患者的腸道中，大量中性粒細胞破壞，導致糞便中FC的含量增高[3]。

目前檢測FC的方法有很多，包括ELISA、化學發光免疫分析法、免疫濁度分析法、免疫熒光分析法及膠體金法等，其中臨床上最常用的檢測方法是ELISA，但該方法比較耗時、需要特定的檢測儀器，不能適用于床旁檢驗，膠體金半定量檢測方法操作簡便、且不需要昂貴設備、減少人力物力及低成本、花費時間短、適用于床旁檢驗，給患者帶來了極大的方便[4]。

FC與患者的感染程度密切相關，FC濃度越高表明患者腸道炎癥越重[5]，FC濃度正常水平表明無感染狀態。本研究顯示與健康人相比，IBD患者的糞便FC是顯著上升的(P<0.05)，說明FC的含量可以用于反映腸道的感染狀態。可能是因為IBD患者發生腸道炎癥時，腸黏膜細胞受到炎癥刺激，通透性增高，白細胞遷徙進入腸道內發揮抗炎作用，炎癥反應中破壞的白細胞釋放出糞便鈣衛蛋白，導致腸道中鈣衛蛋白增多，糞便中的FC檢測濃度升高。本研究還發現，當以<60 μg/g為臨界值時，IBD患者的緩解期與活動期的FC水平是有差異的，說明FC與腸道炎癥的活動性有關，炎癥活動性越強，FC水平越高。FC可以用來評估IBD患者的活動度，從而指導臨床用藥。本研究發現半定量法檢測FC用于診斷IBD的靈敏度和特異性不高，分別為67.61%和80.00%。10例健康人中有2例陽性，建議一周之后復查FC以排除腸道感染。本研究存在一定的局限性，樣本量太少，有待于提高樣本量，進一步驗證。

目前已有文獻報道ELISA的方法檢測FC用于評估疾病活動度，而半定量的膠體金方法檢測糞便鈣衛蛋白尚無報導。由于膠體金的方法操作簡便，不需要專業訓練及昂貴儀器，因此病人可以在家里測量其糞便中鈣衛蛋白的含量，并通過智能手機拍照傳給醫生[4]，以指導其臨床用藥。所以，與ELISA相比，該方法作為一種床旁工具，促進遠程會診，減少病人如此頻繁的就醫需要。由于IBD的反復發作的特點，許多患者經常性地往返于醫院與家之間，給正常的生活及工作帶來不便。

綜上所述，采用膠體金的方法檢測糞便中的鈣衛蛋白，可判斷疾病的活動度，且具有耗時短、經濟方便、痛苦小等優點。對于拒絕反復來院復查腸鏡的患者，可以采用居家檢測糞便鈣衛蛋白的方式，初步評估疾病的活動度。