誘導痰中細胞因子與支氣管哮喘嚴重程度和氣道反應性的關系分析

周敏 陶東英 郭鳳

支氣管哮喘是一種氣道慢性炎性病變，往往涉及到多種細胞。當支氣管哮喘發病時，患者往往會出現喘息、氣促、胸悶、咳嗽等癥狀表現，而且在夜間、凌晨時發作頻率較高[1]。誘導痰技術是一種無創操作方法，將其應用到支氣管哮喘的診斷治療中具有重要價值[2]。痰液內炎性介質往往具有較高含量，可對疾病進行有效檢測與病情評估，對臨床診斷治療具有明顯作用[3]。誘導痰技術的運用可對氣道炎癥細胞、趨化因子進行檢測，可由此使氣道炎癥嚴重程度得到有效評估，對制定合理治療方案具有重要作用[4]。本研究選取130例支氣管哮喘患者，探討誘導痰中各種細胞因子與支氣管哮喘嚴重程度和氣道反應性的關系。如下所示。

資料與方法

一、一般資料

選取2018年8月至2019年9月130例支氣管哮喘患者，按哮喘控制測試(ACT)評分將患者分成完全控制組(n=52)、緩解組(n=42)和急性發作組(n=36)。納入標準：患者均確診為支氣管哮喘；患者均知情同意。排除標準：重要臟器嚴重功能障礙；精神異常；溝通交流障礙。急性發作組(ACT<20分)中男20例(55.56%)，女16例(44.44%)；年齡36～68歲，平均年齡(50.26±2.03)歲。緩解組(ACT 20～25分)中男25例(59.52%)，女17例(40.48%)；年齡35～69歲，平均年齡(50.31±2.01)歲。完全控制組(ACT>25分)中男30例(57.69%)，女22例(42.31%)；年齡35～67歲，平均年齡(50.22±2.05)歲。三組患者一般資料進行比較，均無統計學差異(P>0.05)。

二、方法

誘導痰獲取：在誘導前，患者吸入沙丁胺醇2噴(400μg)，對患者肺功能進行檢測。通過壓縮霧化吸入機吸入4%高滲鹽水5mL，通常持續5min，指導患者深咳痰液。在吸入高滲鹽水過程中，若患者自感有痰，可停止吸入，咳痰，之后霧化吸入到劑量充足。

誘導痰液標本制備：得到痰液量1g以上后，將痰標本進行處理。痰液在無唾液成分時，放置到離心管內，混合2倍體積0.1%二硫蘇糖醇，持續震蕩15s，放置到37℃恒溫水浴振蕩箱內進行振蕩，持續15min。將其進行離心處理，轉速3500r/min，持續20min，分離上清液，放置到-70℃環境下保存。痰標本合格標準：顯微鏡下，每低倍視野中白細胞數量多于25個，鱗狀上皮細胞數低于10個。

氣道反應性檢測：對患者實施檢查時，應確保患者在至少8h內未采用吸入短效β2受體激動劑進行治療，12h內未采用長效β2受體激動劑、吸入激素進行治療,12h內未采用抗組胺劑進行治療。采取1高滲鹽水激發試驗法進行檢查，在室溫環境下，通過氧氣射流霧化吸入4.5%高滲鹽水,在第1次時吸入時間為30S,在間隔60～90S后,檢測患者第1秒用力呼氣容量(FEV1),當FEV1降低幅度>10%時,可再次吸入；當FEV1降低幅度<10%時,可倍增患者吸入時間,可按照1、2、4、8min的倍增法進行吸入。一直持續到FEV1降低幅度≥12%,會使試驗結果呈現為陽性，此時表明患者氣道高反應性,并對吸入的高滲鹽水總量進行計算，當吸入量>12mL，或是總霧化時間超過30min，FEV1降低幅度<12%,可停止試驗。如有必要可對患者實施支氣管舒張劑進行癥狀緩解。

三、觀察指標

比較完全控制組、緩解組、發作組的氣道反應性及ECP、TNF-α、ICAM-1、IL-13水平，將深咳痰液進行稱重處理，放置4倍量0.1%二硫蘇糖醇(DTT)，在37℃溫水中進行震蕩，持續15min，然后根據痰液4倍量，再放置磷酸鹽緩沖液(PBS)，對其實施震蕩，持續5min，轉動速度200r/min，持續10min。分離上清液，放置于-80℃環境下進行保存。通過酶聯免疫吸附法，對痰標本內細胞間黏附因子-1(ICAM-1)、嗜酸細胞陽離子蛋白(ECP)和白細胞介素-13(IL-13)、嗜酸性粒細胞趨化因子(Eotaxin)。分析支氣管哮喘患者誘導痰細胞因子與ACT評分、氣道反應性關系；比較哮喘發作患者不同病情程度時的Ectaxin、肺功能一秒率；分析急性發作患者痰液Ectaxin與ECP、肺功能相關性。

四、統計學方法

結 果

一、病情嚴重程度細胞因子與氣道反應情況比較

完全控制組氣道反應性高于緩解組、發作組，ECP、TNF-α低于緩解組、發作組，差異有統計學意義(P<0.05)；緩解組氣道反應性高于發作組，ECP、TNF-α低于發作組，差異有統計學意義(P<0.05)；三組ICAM-1、IL-13對比差異無統計學意義(P>0.05)(見表1)。

表1 病情嚴重程度細胞因子與氣道反應情況比較

二、支氣管哮喘患者誘導痰細胞因子與ACT評分相關性

誘導痰內ECP、TNF-α水平均與ACT評分保持負相關性，差異有統計學意義(P<0.05)；ICAM-1、IL-13與ACT評分具有一定負相關性，但差異無統計學意義(P>0.05)(見表2)。

表2 支氣管哮喘患者誘導痰細胞因子與ACT評分相關性

三、支氣管哮喘患者誘導痰細胞因子與氣道反應性相關性

誘導痰內ECP、TNF-α水平均與氣道反應性保持負相關性，差異有統計學意義(P<0.05)；ICAM-1、IL-13與氣道反應性具有一定負相關性，但差異無統計學意義(P>0.05)(見表3)。

表3 支氣管哮喘患者誘導痰細胞因子與氣道反應性相關性

四、支氣管哮喘發作患者嚴重程度比較

發作患者重度Ectaxin濃度高于輕度、中度，肺功能一秒率低于輕度、中度，差異有統計學意義(P<0.05)；中度Ectaxin濃度高于輕度，肺功能一秒率低于輕度，差異有統計學意義(P<0.05)(見表4)。

表4 支氣管哮喘發作患者嚴重程度比較

五、支氣管哮喘急性發作患者痰液Ectaxin與ECP、肺功能相關性

痰液Ectaxin濃度與ECP具有正相關性，與肺功能一秒率具有負相關性，差異有統計學意義(P<0.05)(見表5)。

表5 支氣管哮喘發作患者痰液Ectaxin與ECP、肺功能相關性

討 論

氣道高反應性在支氣管哮喘患者中較常見，臨床可通過臨床癥狀、肺功能指標對病情進行評估，從而制定治療方案[5]。當患者持續出現氣道高反應性時，往往表明肺功能有持續惡化的趨勢[6]。在支氣管哮喘發病過程中，大量細胞因子參與了炎癥過程，而且大量細胞因子可在痰液內檢出[7]。采用誘導痰技術，可獲得深咳痰液，制定痰液標本后，檢測相關細胞因子，可對支氣管哮喘病情進行有效評估[8]。

經研究可知，完全控制組氣道反應性最高，ECP、TNF-α最低，誘導痰內ECP、TNF-α水平均與ACT評分保持、氣道反應性保持負相關性，P<0.05。由此可知，隨著病變程度緩解，痰液中ECP、TNF-α明顯降低，而且氣道反應性明顯緩解。臨床上可采用合理治療方法，有效控制ECP、TNF-α，從而改善患者病情。ICAM-1作為細胞之間的一種黏附分子，其在炎性細胞浸潤、轉移中具有重要作用[9]。ECP由嗜酸性粒細胞發生活化而形成的堿性蛋白，其細胞毒性較高，具有較強的滅菌效果[10]。IL-13是一種具有調節功能的細胞因子，可以讓嗜酸細胞大量釋放細胞因子、炎性介質，可有效促進血液IgE合成[11]。在研究中，雖然ICAM-1、IL-13與氣道反應性的負相關性并無明顯差異，但兩者在病情評估中均發揮了重要作用[12]。TNF-α水平適宜情況下，可使機體功能得到有效保護，但出現大量釋放的情況后，會導致組織免疫功能受損[13]。因此，TNF-α可用于評估哮喘病情嚴重程度[14]。研究中，痰液Ectaxin濃度與ECP具有正相關性，與肺功能一秒率具有負相關性。Eotaxin是一種細胞趨化因子，其在一定程度上可以反應患者氣道反應性，對患者病情評估具有重要意義[15-16]。

總之，誘導痰中各種細胞因子可反映病情嚴重程度，與氣道反應性、肺功能具有一定相關性，可由此對患者實施合理治療，應用價值高。