胃癌組織中溶酶體相關四次跨膜蛋白B、三葉因子家族1表達與胃癌的關系

宋鐵英，李瑩瑩，郭娟

胃癌是消化系統發病率較高的惡性腫瘤，其已經成為臨床上威脅病人生存預后的重要疾病。在長期飲酒或者幽門螺桿菌感染的人群中，胃癌的發病率顯著上升。臨床上通過對于胃癌發病機制的研究，可以為胃癌的診斷及治療預后的預測提供參考指標。溶酶體相關四次跨膜蛋白B（lysosomeassociated protein transmembrane 4 beta ，LAPTM4B）是細胞器相關的跨膜蛋白，可以影響癌細胞的異常分裂速度，使其加快，使得癌細胞增殖穩定性受到影響，導致惡性腫瘤發生；三葉因子家族（trefoil factor family，TFF）是一種轉錄調控相關因子，它激活轉錄上游的開放閱讀區會增加癌細胞持續核分裂的風險。為了揭示LAPTM4B、TFF1 蛋白的表達與胃癌病人的病情關系，本研究收集80例胃癌組織，探討LAPTM4B、TFF1 蛋白的表達情況，并分析LAPTM4B、TFF1 蛋白的表達與胃癌病人臨床病理特征的關系。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2015 年8 月至2018 年6 月鄭州人民醫院病理科收集的胃癌組織80 例，男44 例、女36 例，年齡（61.2±8.6）歲，年齡范圍為47～75 歲；TNM 分期：Ⅰ期20 例、Ⅱ期27 例、Ⅲ期29 例、Ⅳ期4例；組織學分化程度：高分化23 例、中分化26 例、低分化28例、未分化3例；發生淋巴結轉移43例；浸潤深度達到漿膜層31 例；病灶最大徑≥3.0 cm 45 例。選取距離胃癌病灶邊緣2～5 cm 的癌旁組織40 例，男20 例、女20 例，年齡（60.8±9.2）歲，年齡范圍為50～73 歲。兩組性別、年齡比較，差異無統計學意義（

P

>0.05）。

1.2 納入與排除標準

診斷標準：胃癌的診斷標準參考人民衛生出版社《外科學》第七版中的標準。納入標準：①手術病理學或胃鏡活檢證實；②病人不具有放化療等治療病史；③各項基礎資料完整；④病人或其近親屬知情同意。排除標準：①轉移性胃癌；②伴有風濕免疫性疾病；③關鍵資料缺失，無法進行統計分析。本研究符合《世界醫學協會赫爾辛基宣言》相關要求。

1.3 方法

1.3.1 免疫組織化學染色

使用石蠟切片。 脫水后室溫孵育20 min。磷酸鹽緩沖液洗滌3 次，每次5 min。磷酸鹽緩沖液稀釋山羊血清，封閉抗體5 min。加入一抗（購自賽默飛中國，濃度：1∶1 000）5 mL，37 ℃孵育2 h，或4 ℃冰箱孵育過夜，磷酸鹽緩沖液洗3 次，每次5 min，加入生物素熒光標記二抗（購自賽默飛中國，濃度：1∶2 000）3 mL，37 ℃孵育20～30 min，磷酸鹽緩沖液洗3 次，每次5 min，加入Streptavidin/HRP 辣根酶標記streptavidin，37 ℃孵育20～30 min，磷酸鹽緩沖液洗3次，每次5 min，用增強型HRP-DAB 底物顯色試劑盒（PA110）顯色，自來水沖洗，復染，封固。

1.3.2 LAPTM4B、TFF1染色結果評分標準

LAPTM4B蛋白在癌組織的細胞質中，TFF1蛋白在癌組織的細胞核中，顯微鏡下觀察時如果蛋白呈黃色、棕黃色、褐色則可判定為陽性。①依據蛋白染色情況進行評分：無著色（0分）、淡黃色（1分）、棕黃色（2分）、褐色、黑色等深色（3 分）。②依據陽性染色細胞在總細胞中所占比例進行評分：≤10%（1 分）、>10%～50%（2分）、>50%～75%（3分）、>75%（4分），兩種類型的積分相乘為總分，總分<3 分為陰性、總分≥3 分為陽性。

2 結果

2.1 兩組LAPTM4B 蛋白、TFF1 蛋白陽性表達率比較

胃癌組織中LAPTM4B 蛋白陽性表達率61.25%、TFF1 蛋白陽性表達率68.75%，胃癌癌旁組織中LAPTM4B 蛋白陽性表達率25.00%、TFF1 蛋白陽性表達率35.00%；胃癌組織均高于癌旁組織（

P

<0.05），見表1、圖1，2。

表1 胃癌組織與癌旁組織中的溶酶體相關四次跨膜蛋白B（LAPTM4B）、三葉因子家族1（TFF1）蛋白陽性表達率比較/例（%）

2.2 LAPTM4B 蛋白陽性表達率與胃癌病理學參數的關系

在TNM 分期（Ⅲ期+Ⅳ期）、發生淋巴結轉移的胃癌組織中LAPTM4B 蛋白陽性表達率分別為78.79%、74.42%，高于TNM 分期（Ⅰ期+Ⅱ期）48.94%、未發生淋巴結轉移45.95%（

P

<0.05）；LAPTM4B蛋白陽性與陰性病人的病灶最大徑、腫瘤分化程度、腫瘤浸潤深度比較，均差異無統計學意義（

P

>0.05）。見表2。

表2 溶酶體相關四次跨膜蛋白B（LAPTM4B）蛋白陽性表達率與胃癌參數的關系

2.3 TFF1蛋白陽性表達率與胃癌病理學參數的關系

在TNM 分期（Ⅲ期+Ⅳ期）、發生淋巴結轉移、低分化的胃癌組織中TFF1 蛋白陽性表達率分別為90.91%、81.40%、87.10%，高于TNM 分期（Ⅰ期+Ⅱ期）53.19%、未發生淋巴結轉移54.05%、高分化和中分化的57.14%，差異有統計學意義（

P

<0.05）；TFF1蛋白陽性與陰性病人的病灶最大徑、腫瘤浸潤深度比較，均差異無統計學意義（

P

>0.05）。見表3。

表3 三葉因子家族1（TFF1）蛋白陽性表達率與胃癌參數的關系

3 討論

胃癌具有較高的基礎發病率和年病死率，其整體臨床預后不佳。胃癌臨床治療方案以及病人預后評估的參考依據均來自胃癌臨床病理特征。腫瘤蛋白如糖鏈蛋白125或者糖鏈蛋白199，雖然能夠在胃癌的診療中發揮臨床病情評估作用。但糖鏈蛋白125 或者糖鏈蛋白199 評估胃癌臨床病情的可靠性較低。

LAPTM4B蛋白是細胞膜跨膜調控相關因子，可以降低癌細胞膜的穩定性，這與LAPTM4B 蛋白具有調節癌細胞膜結構蛋白的作用密不可分。癌細胞膜內層蛋白LAPTM4B 蛋白的活化可增加癌細胞第二信使的活化，增加惡性腫瘤細胞周期的調控紊亂風險；TFF1 蛋白是三葉因子調控的成員，它修飾轉錄閱讀區的重復羧基結構，可以增加癌基因異常轉錄的風險。研究揭示了TFF1 蛋白在胃癌病人中的表達。 認為胃癌病人TFF1 蛋白表達陽性率明顯升高，但對LAPTM4B蛋白的分析較少。

本研究在研究免疫組織化學相關結論的過程中，可以發現在胃癌病灶組織中，LAPTM4B 蛋白、TFF1蛋白的表達陽性率明顯高于胃癌癌旁組織，表明LAPTM4B 蛋白、TFF1蛋白的高表達，可能在胃癌的整體性病情進展中發揮了作用。從癌旁組織到癌組織的病變過程中，LAPTM4B 蛋白、TFF1 蛋白誘導的上皮細胞生物學行為的惡化，或者通過誘導上皮細胞浸潤和黏附能力的增強，能夠促進惡性腫瘤病灶的形成。張靜怡等發現，在胃癌等胃腸道腫瘤病人中，LAPTM4B 蛋白表達陽性率可超過50%。在具有腹腔轉移或者胸腔積液、腹水的病人中，LAPTM4B蛋白的表達陽性率可進一步上升。通過本研究免疫組織化學染色分析可見，LAPTM4B蛋白、TFF1 蛋白在病灶組織中具有較高的染色強度，其中在癌細胞異型性較為明顯的區域，LAPTM4B蛋白、TFF1 蛋白的染色深度更為明顯。本研究探討LAPTM4B 蛋白和TFF1蛋白的表達與胃癌病人臨床病理特征的關系中發現，在TNM 分期晚期或淋巴結轉移的病人中，LAPTM4B 蛋白表達陽性率較高，提示LAPTM4B 蛋白對胃癌病人臨床病理特征的影響是有效的。這主要由于LAPTM4B 蛋白的高表達能夠通過提高胃黏膜上皮細胞偽足形成的能力，這將使得癌細胞黏附淋巴組織的風險提高，加速了病理學的進展。特別是LAPTM4B 對于淋巴結內皮黏附分子adherin 的表達調控，能夠提高腫瘤細胞對于淋巴結組織的黏附浸潤能力；而在不同TNM 分期、是否發生淋巴結轉移、不同分化程度的胃癌組織中，TFF1 蛋白的表達同樣差異有統計學意義，提示TFF1 蛋白也能夠影響到胃黏膜上皮細胞的病變過程，這主要由于TFF1 蛋白能夠影響到腫瘤細胞內MAPK 或者P16 信號通路的激活，最終加劇了癌細胞生物學行為的惡化。特別是TFF1 蛋白能夠通過影響到腫瘤細胞分化成熟誘導因子cyc，導致胃癌上皮細胞定向分化障礙，導致低分化比例的胃癌細胞明顯增加。

綜上所述，胃癌組織中LAPTM4B、TFF1 表達強度明顯較癌旁組織增強，可能與胃癌的發生及發展有一定的關系。關于LAPTM4B、TFF1 的表達與胃癌病人臨床轉歸或者臨床預后的關系，仍然需要后續研究的探討。