胃特安片質(zhì)量標準研究*

李先飛，封傳華，張 靜，徐 蘭，肖漢揚，李 剛

聯(lián)勤保障部隊第九〇八醫(yī)院，江西 南昌330002

胃特安片是聯(lián)勤保障部隊第九〇八醫(yī)院研制的非標制劑，處方由白術(shù)、川芎、厚樸、砂仁、甘草、馬蘭草、陳皮、黃柏等多味中藥材配伍而成，具有和胃止痛、健脾消食、安神寧心等功效，臨床主要用于治療胃及十二指腸潰瘍、慢性胃炎等疾病［1-4］。由于白術(shù)、川芎、陳皮、黃柏為處方中的重要組成藥材，本研究將建立基于薄層色譜鑒定白術(shù)、川芎及高效液相色譜測定陳皮、黃柏中橙皮苷、鹽酸小檗堿含量的方法，為控制胃特安片的質(zhì)量提供依據(jù)。

1 材料

1.1 儀器島津高效液相色譜儀（包括CTO 柱溫箱，SIL-10AF 自動進樣器，LC-15C 泵，SPD-15C 紫外檢測器）；ZF7-C 型三用紫外分析儀（上海康華生化儀器制造有限公司）；ZNCL-GS 型磁力攪拌器（上海越眾儀器設(shè)備有限公司）；DZF 型系列真空干燥箱（上海躍進醫(yī)療器械有限公司）；AUW-120D型分析天平（島津公司）；電熱恒溫水浴鍋（上海醫(yī)療器械五廠）；KQ3200E 型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；DFT-50 型手提式高速萬能粉碎機（溫嶺市林大機械有限公司）。

1.2 試藥鹽酸小檗堿（中國食品藥品檢定研究院，批號：110713-201212，含量以99.8% 計）；橙皮苷（中國食品藥品檢定研究院，批號：110721-201316，含量以99.8%計）；乙腈（高效液相色譜用，西隴化工股份有限公司，批號：1810013）；磷酸（南昌鑫光精細化工廠，分析純，批號：201609104）；醋酸（西隴化工股份有限公司，分析純，批號：1304011）；川芎對照藥材（中國食品藥品檢定研究院，批號：120918-201411）；白術(shù)對照藥材（中國食品藥品檢定研究院，批號：121272-201404）；硅膠G 板（青島海洋化工分廠，批號：20150702）；香草醛（天津市大茂化學試劑廠，批號：20140228）；無水乙醇（西隴化工股份有限公司，批號：130201）；正己烷（天津市大茂化學試劑廠，批號：20150320）；乙酸乙酯（天津市恒興化學試劑制造有限公司，批號：20111516）；甲醇（天津市恒興化學試劑制造有限公司，批號：20130320）；石油醚（60～90℃，天津市大茂化學試劑廠，批號：20131128）；胃特安片（醫(yī)院自制，批號：150501、150512、151218）；白術(shù)、枳實、茯苓、川芎、黃芩等藥材均購自匯仁醫(yī)藥有限公司，經(jīng)江西中醫(yī)藥大學曹嵐教授鑒定為正品；水為超純水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 薄層鑒別

2.1.1 川芎 稱取本品粉末5 g，加乙醚30 mL，加熱回流提取60 min，過濾后將所得濾液揮干，用2 mL 乙酸乙酯溶解殘渣，作為供試品溶液。取0.5 g川芎對照藥材，按照上述方法制成對照藥材溶液。照薄層色譜法（中國藥典2015年版四部通則0502）試驗，吸取上述兩種溶液各2 μL，點于硅膠G 薄層板上，用正己烷-乙酸乙酯（9∶1）為展開劑，展開，取出，晾干后置于紫外光（365 nm）下檢視。供試品色譜中在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上顯相同顏色的熒光斑點。見圖1。

圖1 川芎的薄層色譜圖

2.1.2 白術(shù) 取本品粉末5 g，加正己烷20 mL，超聲處理15 min，濾過，濾液作為供試品溶液。另取白術(shù)對照藥材0.5 g，同法制成對照藥材溶液。照薄層色譜法（中國藥典2015 年版四部通則0502）試驗，吸取上述兩種溶液各10 μL，分別點于同一硅膠G 薄層板上，以石油醚（60～90℃）-乙酸乙酯（50∶1）為展開劑，展開，取出，晾干，噴含5%香草醛的10%硫酸醇溶液，在105℃加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中在與對照藥材色譜相應(yīng)位置上顯相同顏色的斑點。見圖2。

圖2 白術(shù)的薄層色譜圖

2.2 含量測定

2.2.1 色譜條件及系統(tǒng)適應(yīng)性 色譜柱：迪馬ODS2 C18（4.6 mm×150 mm，5 μm）。流動相：乙腈-0.1%磷酸溶液（19∶81），流速：1 mL/min，檢測波長：265 nm，柱溫：30℃，進樣量：10 μL，理論板數(shù)按鹽酸小檗堿峰計算應(yīng)不低于5000。在此色譜條件下，其他成分無干擾。見圖3。

圖3 胃特安片HPLC圖譜

2.2.2 對照品溶液制備［5］取鹽酸小檗堿對照品、橙皮苷對照品適量，精密稱定，置于10 mL量瓶中，加適量甲醇超聲，溶解并定容至刻度，搖勻，即得混合對照品溶液，濃度分別為0.5 mg/mL的鹽酸小檗堿和1.4 mg/mL的橙皮苷，備用。

2.2.3 胃特安片溶液制備 取胃特安片適量，研碎，精密稱取胃特安片細粉約0.25 g，加適量甲醇，超聲提取60 min，靜置并冷卻至室溫，過濾，濾液轉(zhuǎn)至50 mL 量瓶中，用適量甲醇定容至刻度，搖勻，測定前用微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液，進樣［6］。

2.2.4 陰性樣品溶液制備 按處方比例稱取藥材（黃柏、陳皮除外），置70℃烘箱中烘干，粉碎，按照“2.2.3”項中制備方法制備陰性樣品溶液。

2.2.5 標準曲線繪制 分別精密吸取混合對照品溶液0.1、0.2、0.5、1、2、5 mL置于10 mL量瓶中，加甲醇稀釋并定容至刻度，搖勻。精密吸取各對照品溶液10 μL 注入高效液相色譜儀，照“2.2.1”項下色譜條件測定。以鹽酸小檗堿濃度對其峰面積繪制標準曲線。鹽酸小檗堿線性回歸方程為：Y=109 637X-63 435，R2=0.9995；以橙皮苷濃度對其峰面積繪制標準曲線，橙皮苷的線性回歸方程為：Y=254 369X-10 011，R2=0.9992。結(jié)果表明鹽酸小檗堿在5～250 μg/mL 范圍內(nèi)線性關(guān)系良好；橙皮苷在14～700 μg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.2.6 定量限和檢測限 將混合對照品溶液（鹽酸小檗堿濃度0.5 mg/mL）用流動相稀釋，按照“2.2.1”項下色譜條件測定。結(jié)果顯示鹽酸小檗堿對照品最低定量限為5 μg/mL（S/N≥10），檢測限為2 μg/mL（S/N≥3）。

2.2.7 精密度試驗 取胃特安片供試品溶液，連續(xù)進樣6 次，每次進樣量為10 μL，按照“2.2.1”項下色譜條件測定，計算鹽酸小檗堿峰面積RSD 值為1.87%，橙皮苷峰面積RSD 值為1.76%。結(jié)果表明精密度良好，符合含量測定的基本要求。

2.2.8 穩(wěn)定性試驗 取胃特安片供試品溶液，于0、2、4、6、8、12、24 h精密吸取10 μL注入高效液相色譜儀，按照“2.2.1”項下色譜條件測定，計算鹽酸小檗堿峰面積RSD 值為1.75%，橙皮苷峰面積RSD 值為1.82%，結(jié)果表明，鹽酸小檗堿和橙皮苷在24h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.2.9 重復性試驗 精密稱取胃特安片（批號：150501）5 份，按照“2.2.3”項下方法制備供試品溶液，分別精密吸取10 μL 注入高效液相色譜儀，按照“2.2.1”項下色譜條件測定，計算鹽酸小檗堿峰面積RSD 值為1.68%，橙皮苷峰面積RSD 值為1.54%。結(jié)果表明該方法重復性較好。

2.2.10 加樣回收率 精密稱取胃特安片細粉6份，每份約0.4g，精密稱定并置于量瓶中，分別精密加入鹽酸小檗堿對照品溶液和橙皮苷對照品溶液適量，按照“2.2.3”項下方法制備供試品溶液，精密吸取10 μL 注入高效液相色譜儀，按照“2.2.1”項下色譜條件測定，計算回收率，結(jié)果見表1—2。

表1 鹽酸小檗堿的加樣回收率試驗結(jié)果

表2 橙皮苷的加樣回收率試驗結(jié)果

2.2.11 樣品含量測定 根據(jù)已建立的鹽酸小檗堿含量測定方法，取3 批胃特安片，按照“2.2.3”項下方法制備胃特安片供試品溶液，按照“2.2.1”項下色譜條件測定鹽酸小檗堿的峰面積，計算胃特安片中鹽酸小檗堿的含量，結(jié)果顯示3批胃特安片樣品（150501、150512、151218）中每片含鹽酸小檗堿分別為45.18、45.09、45.24 μg；橙皮苷分別為1.3496、1.3513、1.389 mg。

3 討論

因陳皮、黃柏、白術(shù)、川芎分別為胃特安片中的君藥和臣藥，故本研究采用高效液相色譜法對陳皮、黃柏中主要成分橙皮苷、鹽酸小檗堿進行測定，采用薄層色譜法對白術(shù)、川芎進行鑒別，達到有效控制胃特安片質(zhì)量的目的，從而保障臨床用藥的安全性。白術(shù)鑒別過程中發(fā)現(xiàn)，以新近上市的白術(shù)飲片為原料制備而成的胃特安片其特征斑點更明顯，而常溫保存時間超過12 個月的胃特安片中白術(shù)的特征斑點幾乎消失，可能與白術(shù)特征斑點的物理特性（如揮發(fā)性、穩(wěn)定性等）有關(guān)［5-9］。

本研究通過參考相關(guān)文獻［10-14］及《中華人民共和國藥典》（2015 版）［15-17］中關(guān)于鹽酸小檗堿含量測定的色譜條件，同時根據(jù)實際情況，針對性優(yōu)化流動相，最終確定以乙腈-0.1% 磷酸溶液（19∶81）為流動相，可將目標成分鹽酸小檗堿和橙皮苷與其他物質(zhì)有效分離，其中加入0.1% 的磷酸，可防止出現(xiàn)拖尾現(xiàn)象，從而獲得較好的色譜峰。

本研究采用薄層色譜法鑒定胃特安片中白術(shù)、川芎，采用高效液相色譜法同時測定胃特安片中鹽酸小檗堿和橙皮苷的含量，專屬性強，陰性樣品無干擾，能夠為胃特安片的質(zhì)量控制提供參考。