藤茶保肝片的制備工藝研究*

張 政，鄧月婷，△，盧 英，仲萬春，賈繼禧，王小芳，張 智

1 甘肅省中藥固體分散制劑重點實驗室,甘肅 蘭州730102；2 甘肅隴神戎發藥業股份有限公司

藤茶保肝片是以藤茶、茯苓、綠豆、高良姜為原料加工制成的對化學性肝損傷有輔助治療功能的保健食品。藤茶為顯齒蛇葡萄（Ampelopsis grossedentata）的嫩葉，藤茶的使用已有三千多年的歷史。我國最早在《詩經》中稱之為古剎鉤藤，唐朝陸羽在《茶經》里將其歸為藤茶，于是藤茶的命名沿用至今。其藥性味甘淡、功效清熱解毒，主治黃疸型肝炎、風熱感冒、咽喉腫痛等。顯齒蛇葡萄葉在2013 年被中華人民共和國衛生部批準為新食品原料。現代藥理學實驗表明藤茶有保肝護肝作用［1-3］。藤茶中水溶性糖含量約為10%；氨基酸含量約為5%；多酚類化合物含量約為20%；黃酮類化合物含量在40% 左右，其中二氫楊梅樹皮素含量可達38.5%［4-5］；二氫楊梅素對四氯化碳致大鼠肝纖維化有明顯保護作用［6］，并且具有預防和治療酒精性肝損傷的功效［7］，以及防醉、解酒作用［8-10］；茯苓是藥食兩用的藥材，茯苓的化學成分主要為多糖、三萜、脂肪酸、甾醇、酶等；茯苓多糖具有抗腫瘤、保肝、利尿、抗衰老、抗炎、降血脂、增強免疫、催眠等作用；茯苓三萜具有抗腫瘤、保肝、抗衰老、增強免疫等作用［11］；綠豆的成分主要有蛋白質、脂肪、碳水化合物、粗纖維、鈣、磷、鐵、胡蘿卜素、維生素等，具有清熱解毒，消暑除煩，止渴健胃，利水消腫等作用，還具有降血脂、降膽固醇、抗過敏、抗菌、抗腫瘤、增強食欲、保肝護腎等藥理作用［12-13］；高良姜主要含黃酮類、揮發油和二芳基庚烷類化合物，高良姜有較強的抗潰瘍、抗腹瀉、利膽、鎮痛、抗炎、抗缺氧、抗凝、抗血栓等作用［14-17］。本產品配方中藤茶清胃熱、利酒濕，為君藥。茯苓、綠豆淡滲利濕，使酒濕之邪從小便出，茯苓健脾，同時促進脾胃運化，綠豆甘涼壓熱，可解酒毒，故為臣藥；高良姜性辛熱，少用起到反佐功效，同時起止嘔作用，故為佐藥。全方配伍，清熱利濕，滲濕健脾，解毒止嘔，共奏解酒保肝之效。同時，中藥片劑是一種常見劑型，便于儲存、運輸、攜帶和服用。本研究以藤茶、茯苓、綠豆、高良姜為原料，制成對化學性肝損傷有輔助治療作用的保健食品。

1 材料

1.1 藥物與試劑藤茶（貴州江口梵凈山云峰野生植物開發有限公司）；茯苓、高良姜（亳州發揚中藥材有限責任公司）；玉米淀粉（西安國維淀粉有限責任公司）；交聯羧甲基纖維素鈉（安徽山河藥用輔料股份有限公司）；花旗松素對照品（中國食品檢定研究院，批號：111816-201102）；無水乙醇（分析純，天津市大茂化學試劑廠）。

1.2 儀器與設備MS205DU型電子天平（METTLER TOLRDO）；JA2603B 型電子天平（上海精科天美科學儀器有限公司）；TU-1901 型紫外可見分光光度計（北京普析通用儀器有限公司）；HWS26 型恒溫水浴鍋（上海一恒科學儀器有限公司）；DGG-9240B型電熱恒溫鼓風干燥箱（上海森信實驗儀器有限公司）；DNT-03-00 型多功能提取濃縮機組（浙江溫兄機械閥業有限公司）；FBWS3 型實驗室多功能沸騰制粒機（浙江迦南科技股份有限公司）；ZP35B型旋轉式壓片機（上海天祺藥機械有限公司）；YPD-3000 型片劑硬度儀（上海黃海藥檢儀器有限公司）；ZB-1E 型智能崩解儀（天津市天大天發科技有限公司）；FT-2000AE 型脆碎度檢查儀（天津市天大天發科技有限公司）。

1.3 方法

1.3.1 提取工藝 將藤茶與茯苓、綠豆、高良姜分別采用正交水提方法優選提取工藝參數。

1.3.1.1 藤茶提取工藝 采用正交試驗設計，對提取時間、提取次數及料液比三因素進行考察，各取3個水平進行試驗設計，以出膏得率、二氫黃酮（以二氫槲皮素計）含量為指標進行工藝優選。L9（34）正交表見表1。

表1 藤茶提取因素水平

1.3.1.2 茯苓、高良姜、綠豆提取工藝 采用正交試驗設計，對提取時間、料液比和提取次數三因素進行考察，各取3 個水平進行試驗，以出膏得率為指標進行工藝優選，L9（34）正交表見表2。

表2 茯苓、高良姜、綠豆提取因素水平

1.3.2 藤茶片制備工藝

1.3.2.1 制粒 將兩種提取液混合后濃縮干燥并粉碎成細粉。采用沸騰制粒機將浸膏粉與不同輔料制粒：進風溫度70～90℃，物料溫度40～60℃，進風風量60～100 m3/h，黏合劑流速5～10 r/min，霧化壓力0.15 Mpa，以顆粒合格率、休止角、堆密度為考察指標，確定填充劑。見表3。

表3 浸膏粉與不同輔料配比

1.3.2.2 黏合劑的確定 將浸膏粉∶填充劑∶崩解劑按1∶0.2∶0.025 充分混勻，選擇不同黏合劑，采用沸騰制粒機制粒后壓片，以硬度、脆碎度、崩解時限為指標，確定合適的黏合劑。

1.3.3 壓片 按優選工藝，以淀粉為填充劑，交聯羧甲基纖維素納為崩解劑，4% 淀粉漿為黏合劑，硬脂酸鎂為潤滑劑，按浸膏粉∶填充劑∶崩解劑=1∶0.2∶0.025 的比例充分混勻，用一步制粒機制粒后壓片。

1.3.4 出膏得率測定 將提取液過濾并定容至500 mL，從中精密量取10 mL 提取液至恒重的蒸發皿中，水浴濃縮至干，然后放入烘箱中于105℃干燥至恒重后稱重。

出膏得率（%）=干膏重/藥材重量×100%

1.3.5 二氫黃酮含量測定［16］

1.3.5.1 標準曲線的制備 精密稱取花旗松素（二氫槲皮素）對照品10.17 mg，置50 mL 容量瓶中，加70%乙醇溶解并定容至刻度，搖勻，即得二氫槲皮素對照品溶液。精密吸取0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4 mL 二氫槲皮素對照品溶液，分別置25 mL具塞比色管中，各加70%乙醇稀釋至2 mL，加pH 6.6 的枸櫞酸-磷酸氫二鈉緩沖液4 mL，混勻，再加2%四氫硼鈉甲醇溶液3 mL，搖勻，放置20 min，再加濃鹽酸3 mL，在50℃水浴上加熱15 min，取出后放冷，加70% 乙醇至刻度，搖勻，放置30 min，以相應試劑作為空白，于紫外可見分光光度計290 nm 的波長處測定吸光度，以吸收度（Y）為縱坐標，濃度（X）為橫坐標線性回歸，得回歸方程：Y=0.0618X-0.0036（R2=0.9994），二氫槲皮素在1.609～11.265 μg/mL 范圍內與吸光度成良好的線性關系。

1.3.5.2 樣品處理 將正交試驗提取的樣品搖勻后，分別取1 mL置25 mL容量瓶中，加水定容，搖勻為供試品溶液，待測。

1.3.5.3 樣品測定 精密量取供試品溶液1 mL，置25 mL 具塞比色管中，用70% 乙醇稀釋至2 mL，加pH 6.6 的枸櫞酸-磷酸氫二鈉緩沖液4 mL，混勻，再加2% 四氫硼鈉甲醇溶液3 mL，搖勻，放置20 min，再加濃鹽酸3 mL，在50℃水浴上加熱15 min，取出后放冷，加70 %乙醇至刻度，搖勻，放置30 min，同時精密量取1 mL 70% 乙醇溶液，同上操作，作為空白。紫外可見分光光度計290 nm波長處測定吸光度，根據公式計算樣品中二氫黃酮含量。

式中：X為樣品中二氫黃酮含量（g/100g）；C為由標準曲線求得被測液中二氫黃酮濃度（μg/mL）；M為樣品質量（g）。

1.3.6 顆粒合格率測定 顆粒合格率是制粒、干燥、整粒后所得的合格顆粒比率：

顆粒成型率（%）=所得合格顆粒重量/所用藥粉與輔料重量×100%

1.3.7 顆粒休止角測定 采用固定漏斗法：將3只漏斗串聯并固定于水平放置的坐標紙上約3 cm高度處，將制得的顆粒沿漏斗倒入第一只漏斗中，直到最下面漏斗形成的藥粉圓錐體尖端接觸到漏斗口為止，這時顆粒形成一圓錐體堆，通過坐標紙測出圓錐底部的半徑R，并測定其堆高H，根據tgα=H/R，計算得顆粒休止角α。

1.3.8 顆粒壓縮松密度及振實密度測定

1.3.8.1 松密度測定 精密稱取約30 g 顆粒通過短頸漏斗，緩慢沿漏斗壁倒入100 mL量筒中，使量筒中粉末表面鋪平，不得振蕩，讀出其體積（V1），松密度=m/V1。

1.3.8.2 振實密度測定 將上述裝有顆粒的量筒，由2 cm 高度自墜落臺面上，反復操作100 次，量體積V0，繼續上述操作30 次，量體積V2，當V0與V2相差小于2 mL 時，記錄振實后的體積（V2），則振實密度=m/V2。

顆粒壓縮度=（振實密度-松密度）/振實密度×100%

1.3.9 硬度測定 根據《中華人民共和國藥典（2015 年版）》中的標準。取樣品20 片，每片放入硬度儀中分別測量其硬度，計算平均值。

1.3.10 脆碎度測定 根據《中華人民共和國藥典（2015 年版）》標準。取樣品若干片，使其總重約為6.5 g，用吹風機吹去片劑脫落的粉末，精密稱重，置圓筒中，轉動100 次，取出吹去的粉末，精密稱重，計算減失重量與樣品原重量的比值。

1.3.11 崩解時限測定 根據《中華人民共和國藥典（2015 年版）》標準，取藤茶保肝片劑6 片，將其分別置于潔凈吊籃玻璃管中，每管各放1 片。將裝有供試品的吊籃浸入溫度為（37±1）℃的水中，啟動崩解儀進行檢查，直至樣品完全崩解。記錄每片樣品崩解時間，計算平均值。

1.3.12 重量差異 取供試品20 片，精密稱定總重量，求得平均片重后，再分別精密稱定每片的重量，每片重量與平均片重進行比較。

2 結果

2.1 藤茶提取結果從出膏得率結果分析，各因素條件影響大小依次為提取次數＞提取時間＞料液比，從二氫黃酮含量結果分析各因素條件影響大小依次為提取次數＞料液比＞提取時間。A因素出膏得率和二氫黃酮含量各水平之間比較差異較小，為提高提取效率，節約生產成本，確定A因素試驗水平為A1；B因素中出膏得率和二氫黃酮含量各水平比較差異較小，因此確定B因素試驗水平為B1；C因素的出膏得率和二氫黃酮含量均為K3值最大，并且C因素對試驗結果有顯著影響，因此確定試驗水平為C3。最后確定藤茶最終提取工藝為A1B1C3，即提取時間為0.5 h，料液比為1∶8，提取次數為3次。見表4—5。

表4 藤茶提取正交試驗結果

2.2 茯苓、高良姜、綠豆提取結果最佳提取條件為A3B3C3，A 因素和B 因素對本試驗結果影響不顯著，但K1與K2之間差異較大，而K2與K3之間的差異不大；從生產周期、生產成本等多個實際因素綜合考慮，確定提取時間和料液比的試驗水平為A2、B2；C因素對出膏得率的K3值最大；提示C因素對試驗結果有顯著影響，因此確定試驗水平為C3。最后確定3 味藥材的最終提取工藝為A2B2C3，即提取時間1.0 h，料液比1∶6，提取次數3次。見表6—7。

表6 茯苓、高良姜、綠豆提取正交試驗結果

2.3 制粒、壓片成型試驗顆粒指標測定結果，見表8。

表8 顆粒指標測定結果

表5 藤茶提取方差分析

表7 茯苓、高良姜、綠豆提取方差分析

從以上結果可以看出，用淀粉為輔料成型率較高，休止角最小，顆粒流動性最好，壓縮度高，說明壓片時的填充量大。綜合可行性、成本考慮最終選擇淀粉作為填充劑。

4% 淀粉漿為黏合劑的硬度、脆碎度雖不如其他黏合劑好，但在合格范圍內，因其崩解時間短，故選擇4%淀粉漿為黏合劑。見表9。

表9 不同黏合劑對素片硬度、脆碎度、崩解時限的影響

2.4 驗證試驗按照正交試驗優選工藝進行3批驗證試驗，驗證試驗結果與正交試驗結果基本一致，證明優選工藝合理、可行。所制得顆粒外形圓整，流動性好，大小均勻，松實適宜，壓片后，素片表面光滑，色澤均勻一致，硬度好，平均脆碎度0.532%，符合產品技術要求，成型工藝可行。見表10。

表10 驗證試驗結果

3 討論

將4 味藥材一起提取，發現過濾過程中隨溫度降低部分物質析出，檢測提取液中二氫黃酮含量較文獻報道低，查閱文獻發現，藤茶中主要黃酮類化合物為二氫楊梅素，其含量在幼葉中達40%［17］，二氫楊梅素在23℃水中溶解度為0.1876 g/100 mL，100℃中的溶解度為1.5050 g/100 mL［18］。提取時可利用二氫楊梅素在不同溫度水中溶解度的差異，將藤茶與茯苓、綠豆、高良姜分開提取，解決了提取液中二氫黃酮含量低的問題。

保健食品一般為口服制劑，常見的如口服液、膠囊、顆粒、片、軟膠囊、顆粒、粉等［19］。本產品初期設計劑型為咀嚼片，因藤茶有特殊苦味，添加不同矯味劑后口味仍較差，后選擇口服素片，其優點如下：1）片劑攜帶、服用、運輸和貯存方便；2）劑量準確，片劑內藥物含量差異較小；3）質量穩定，片劑為干燥固體，光線、空氣、水分等對其影響較小；4）機械化生產產量大，成本低，易達到衛生標準。

本研究通過正交設計優化試驗得到藤茶保肝片的最優提取工藝，通過單因素試驗確定了成型工藝配方，在該工藝下進行中試生產的藤茶保肝片各項指標均符合產品技術要求。后續將中試產品送至有資質的檢測單位進行安全性和保健功能評價，取得報告后向國家市場監督管理總局進行申報。