自噬流在細(xì)顆粒物誘導(dǎo)的氣道炎癥中的變化及成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子10調(diào)控自噬流的抗炎效應(yīng)*

董 年， 王 強(qiáng)， 施強(qiáng)強(qiáng)， 劉玲靜， 陳俊杰

（溫州醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院呼吸與危重癥醫(yī)學(xué)科，浙江省介入肺臟病學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，浙江溫州 325000）

日益嚴(yán)重的空氣污染是我國目前呼吸道疾病發(fā)病率居高不下的重要原因，細(xì)顆粒物（particulate matter，PM）是空氣污染物中的重要成分，流行病學(xué)調(diào)查發(fā)現(xiàn)生活中PM 暴露強(qiáng)度與呼吸道炎癥效應(yīng)密切相關(guān)［1］。目前在PM 暴露相關(guān)呼吸道炎癥效應(yīng)方面沒有特別的干預(yù)措施，深入研究其中的病理生理過程，在呼吸道疾病的防治方面具有一定的公共衛(wèi)生意義。我們經(jīng)氣道滴注PM的方式構(gòu)建PM短時(shí)暴露動(dòng)物模型研究呼吸道炎癥效應(yīng)，發(fā)現(xiàn)PM 短時(shí)暴露導(dǎo)致以氣道炎癥為主的病理改變［2］，伴隨肺組織成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子10（fibroblast growth factor 10，F(xiàn)GF10）的表達(dá)升高［3］。FGF10是一個(gè)經(jīng)典的旁分泌FGF，經(jīng)間充質(zhì)-上皮交互作用的方式介導(dǎo)間充質(zhì)細(xì)胞與上皮信號(hào)之間的信號(hào)傳導(dǎo)［4］，在病理狀態(tài)下的支氣管-肺上皮損傷修復(fù)中發(fā)揮重要調(diào)控作用［5］。目前圍繞FGF10 在PM 氣道炎癥方面的研究甚少，間充質(zhì)來源的FGF10 在病理狀態(tài)下參與支氣管-肺上皮修復(fù)的分子機(jī)制仍待闡明。自噬是細(xì)胞在應(yīng)激條件下的一種防御調(diào)控機(jī)制，參與肺臟的損傷修復(fù)病理生理過程［6］。Chen 等［7］報(bào)道PM 可以誘導(dǎo)氣道上皮細(xì)胞的自噬，參與氣道上皮細(xì)胞的炎癥反應(yīng)，自噬抑制發(fā)揮抗炎作用［8］。至于自噬與FGF10 之間的聯(lián)系，Tan等［9］發(fā)現(xiàn)在腎臟缺血再灌注條件下FGF10 可以調(diào)控自噬相關(guān)蛋白LC3 抑制腎小管上皮細(xì)胞自噬水平，在腎臟缺血再灌注下發(fā)揮保護(hù)作用。結(jié)合以上文獻(xiàn)研究報(bào)道，本研究擬在構(gòu)建PM 短時(shí)暴露動(dòng)物模型和細(xì)胞模型的基礎(chǔ)上，探討自噬流在PM 誘導(dǎo)氣道炎癥中的變化以及FGF10是否調(diào)控自噬流發(fā)揮抗炎效應(yīng)和潛在的分子機(jī)制。

2.2.4 ATCI溶液 精密稱取適量ATCI粉末，用PBS緩沖液（pH 8.0）配制成0.075 mol/L的溶液。

材 料 和 方 法

1 材料

6～8 周齡SPF 級(jí)雄性C57BL/6 小鼠（20～22 g）購自北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)公司，許可證號(hào)為SCXK（京）2016-0011。人正常氣道上皮細(xì)胞BEAS-2B購自上海中科院細(xì)胞庫。PM購自NIST，具體類型SRM 1649b，主要成分包括多環(huán)芳烴類、硝基多環(huán)芳烴、苯醚、多氯聯(lián)苯同系類、含氯有機(jī)農(nóng)藥、八氯莰烯同系物、多氯二苯并對(duì)二英、二苯并呋喃同系物和其他無機(jī)顆粒物質(zhì)；RPMI-1640培養(yǎng)液和胎牛血清購自Gibco；動(dòng)物實(shí)驗(yàn)重組FGF10 購自溫州醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院；細(xì)胞實(shí)驗(yàn)重組FGF10 購自Peproptech；抗自噬相關(guān)分子（LC3 和p62）的抗體和抗NF-κB 通路分子（pp65、p65、p-IκBα 和IκBα）的抗體購自Cell Signaling Technology；自噬抑制劑3-甲基腺嘌呤（3-methyladenine，3-MA）購自Sigma；BCA 蛋白濃度測(cè)定試劑盒、預(yù)染蛋白Marker和ECL發(fā)光液購自Thermo。

2 方法

2.1 動(dòng)物模型的建立 選取40 只6～8 周齡SPF 級(jí)雄性C57BL/6 小鼠（20～22 g），均以10 mL/kg 的劑量腹腔注射水合氯醛麻醉，隨機(jī)分為4 組（n=10）：（1）空白對(duì)照（vehicle）組：25 μL PBS 氣道滴注，連續(xù)氣道滴注2 d；（2）FGF10 組：5 mg/kg FGF10 溶于25 μL PBS 中，連續(xù)氣道滴注2 d；（3）PM 組：4 mg/kg PM 溶于25 μL PBS 中，連續(xù)氣道滴注2 d；（4）FGF10+PM組：預(yù)先1 h給予5 mg/kg FGF10氣道滴注，然后4 mg/kg PM 氣道滴注，連續(xù)2 d。各組均在末次氣道滴注PM 24 h后處死小鼠獲取動(dòng)物標(biāo)本進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

從總資本充足率變化看，中行與工行下降，農(nóng)行和建行上升，且達(dá)到了近年來最高水平。中行降幅較去年同期收窄0.46個(gè)百分點(diǎn)，下降情況明顯好轉(zhuǎn)；農(nóng)行得益于外部補(bǔ)充，增幅最大，資本充足率首次超過14%，排名超越中行和工行，躍居第二；建行扭轉(zhuǎn)以往半末下降態(tài)勢(shì)，逆勢(shì)上升0.14個(gè)百分點(diǎn)。

中國古代社會(huì)管理是適應(yīng)小農(nóng)經(jīng)濟(jì)的生產(chǎn)關(guān)系以及封建的社會(huì)倫理制度而建立起來的一整套社會(huì)管控體制。其中，它是主要由以血緣關(guān)系為基礎(chǔ)的家規(guī)、族律，以及體現(xiàn)為非血緣關(guān)系的國法構(gòu)成的一個(gè)嚴(yán)密的“三元結(jié)構(gòu)”社會(huì)管理體系。

2.2 病理分級(jí) 在末次氣道滴注PM 24 h后處理動(dòng)物，經(jīng)氣管插管灌注多聚甲醛填充肺臟，獲取完整的肺臟置于多聚甲醛中固定，隨后進(jìn)行石蠟包埋，常規(guī)HE 染色后在光學(xué)顯微鏡下進(jìn)行病理分級(jí)評(píng)分。以0～4 分的主觀等級(jí)評(píng)估支氣管周圍和血管周圍的炎癥程度：0 分為未觀察到炎癥；1 分為偶見炎癥細(xì)胞；2 分為氣道或血管周圍不均勻分布的炎癥細(xì)胞或炎癥細(xì)胞圍繞成薄的環(huán)狀（層厚1～5 個(gè)炎癥細(xì)胞）；3 分為氣道或血管周圍分布均勻的炎癥細(xì)胞或炎癥細(xì)胞圍繞成厚的環(huán)狀（層厚＞5 個(gè)炎癥細(xì)胞）；4 分為氣道、血管或肺泡分布彌漫聚集的炎癥細(xì)胞。

動(dòng)物實(shí)驗(yàn)分組造模成功后，收集BALF進(jìn)行炎癥介質(zhì)檢測(cè)，ELISA 結(jié)果顯示，PM 組炎癥介質(zhì)IL-6、IL-8、PGE2和TNF-α 含量較vehicle 組升高，PM+FGF10組炎癥介質(zhì)IL-6、IL-8、PGE2和TNF-α 含量較PM 組降低（P＜0.01），見圖2。

2.4 ELISA 實(shí)驗(yàn) 獲取小鼠支氣管肺泡灌洗液（bronchoalveolar lavage fluid，BALF）或細(xì)胞培養(yǎng)上清，1 000 r/min、4 ℃離心后獲取上清液，ELISA 板中添加標(biāo)準(zhǔn)品和檢測(cè)樣品，37 ℃培養(yǎng)箱孵育2 h后移除ELISA 板每孔中的液體，添加100 μL 的生物素抗體在37 ℃培養(yǎng)箱孵育1 h，再次洗滌去除液體，添加HRP-抗生物素蛋白，37 ℃培養(yǎng)箱孵育1 h，重復(fù)洗滌過程5 次，然后顯色和終止，利用酶標(biāo)儀計(jì)算每孔吸光度（A），根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算每孔檢測(cè)樣品的濃度。

動(dòng)物實(shí)驗(yàn)分組造模成功后，針對(duì)肺組織進(jìn)行病理分級(jí)評(píng)分，PM 組氣道周圍炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，氣道上皮細(xì)胞變厚，伴隨PM 氣道沉積，PM 組病理分級(jí)評(píng)分較vehicle 組升高，PM+FGF10 組病理分級(jí)評(píng)分較PM組降低（P＜0.01），見圖1A。Western blot 結(jié)果顯示，PM 組自噬流信號(hào)改變，具體表現(xiàn)為L(zhǎng)C3-II/LC3-I 比值升高和p62 降解阻滯，PM+FGF10 組自噬流信號(hào)發(fā)生逆轉(zhuǎn)（P＜0.05或P＜0.01），見圖1B。

3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

細(xì)胞模型分組造模成功后，收集細(xì)胞上清液進(jìn)行炎癥介質(zhì)檢測(cè)，ELISA 檢測(cè)結(jié)果顯示，PM 可以誘導(dǎo)氣道上皮細(xì)胞炎癥介質(zhì)IL-6、IL-8、PGE2和TNF-α分泌，3-MA 可以逆轉(zhuǎn)PM 誘導(dǎo)氣道上皮炎癥介質(zhì)分泌（P＜0.05 或P＜0.01），見圖3A～D。與此同時(shí)，4 mmol/L 3-MA 預(yù)先處理2 h，200 mg/L PM 刺激BESA-2B細(xì)胞1 h，Western blot結(jié)果顯示，PM可以誘導(dǎo)氣道上皮細(xì)胞NF-κB 通路的改變，具體表現(xiàn)p65 和IκBα磷酸化水平升高，3-MA 可以逆轉(zhuǎn)PM 誘導(dǎo)NF-κB 通路的改變（P＜0.05），見圖3E。

作為生肖的老虎，深得中國人歡心。虎年春節(jié)請(qǐng)一批虎娃上臺(tái)虎虎生風(fēng)地蹦跳，就是一個(gè)好節(jié)目。但我更傾向于將這些“老虎”形象認(rèn)定為大貓，因?yàn)槿藗兘?jīng)常是通過貓去想象虎的。真實(shí)的老虎無法表現(xiàn)得如此歡樂，它們嚴(yán)肅的表情、穩(wěn)重的步伐，已經(jīng)表明它們對(duì)待這個(gè)世界的基本態(tài)度。

結(jié)果

1 FGF10 逆轉(zhuǎn)PM 誘導(dǎo)的C57BL/6 小鼠氣道炎癥和自噬流信號(hào)改變

2.5 Westernblot 實(shí)驗(yàn) 獲取生長(zhǎng)狀況良好的對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的BEAS-2B 細(xì)胞，不同實(shí)驗(yàn)干預(yù)之后獲取細(xì)胞，細(xì)胞裂解液裂解細(xì)胞，4 ℃、20 913×g離心10 min提取上清液，使用BCA 測(cè)定蛋白濃度。兩組細(xì)胞分別取30 μg 蛋白跑凝膠電泳，濕轉(zhuǎn)至PVDF 膜，5%脫脂牛奶室溫下封閉2 h，Ⅰ抗（1∶1 000）4 ℃孵育過夜，TBST緩沖液洗膜10 min×3次，Ⅱ抗（1∶5 000）室溫孵育1.5 h，再用TBST 緩沖液洗膜10 min×3 次，化學(xué)發(fā)光法顯影條帶。

Figure 1. FGF10 reversed PM-induced airway inflammation and autophagic flux change. A：representative images of lung sections with HE staining and the inflammation scores for the images；B：the expression of autophagy-related proteins LC3 and p62 in lung tissues. Mean±SD.n=3.*P＜0.05，**P＜0.01vs vehicle group；#P＜0.05，##P＜0.01vs PM group.圖1 FGF10逆轉(zhuǎn)PM誘導(dǎo)的C57BL/6小鼠氣道炎癥和自噬流信號(hào)改變

2 FGF10 逆轉(zhuǎn)PM 誘導(dǎo)的C57BL/6 小鼠BALF 中炎癥介質(zhì)分泌

2.3 細(xì)胞模型的建立 BEAS-2B 細(xì)胞使用含10%胎牛血清和1%青霉素/鏈霉素的RPMI-1640 培養(yǎng)液，置于37 ℃、5% CO2恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。使用0.25%胰酶溶液進(jìn)行消化傳代，獲取生長(zhǎng)狀況良好的對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞。涉及細(xì)胞實(shí)驗(yàn)，統(tǒng)一使用200 mg/L PM、10 μg/L FGF10 和4 mmol/L 3-MA，其中涉及FGF10/3-MA 和PM 聯(lián)合處理細(xì)胞時(shí)，F(xiàn)GF10/3-MA預(yù)先1 h處理。具體實(shí)驗(yàn)分組如下：vehicle組、FGF10組、PM 組和PM+FGF10 組，檢測(cè)自噬蛋白LC3 和p62及炎癥介質(zhì)白細(xì)胞介素6（interleukin-6，IL-6）、IL-8、前列腺素E2（prostaglandin E2，PGE2）和腫瘤壞死因子α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）的表達(dá)，研究自噬蛋白和炎癥介質(zhì)的表達(dá)在FGF10干預(yù)下是否存在相關(guān)性；vehicle組、3-MA組、PM組和PM+3-MA組，檢測(cè)炎癥介質(zhì)IL-6、IL-8、PGE2和TNF-α 及NF-κB 信號(hào)通路蛋白表達(dá)，研究NF-κB 信號(hào)通路和炎癥介質(zhì)的表達(dá)在3-MA干預(yù)下是否存在相關(guān)性。

菊芋生長(zhǎng)高度在1～3 m不等，秋季開花，花如菊，黃色。葉子是橢圓形，多毛。根莖系統(tǒng)深埋于地下并且比較結(jié)實(shí)粗壯，葉子互生于莖的頂端，較低的葉子能夠長(zhǎng)30 cm，長(zhǎng)而寬，中央是花頭，5.0～7.5 cm，被莖分支下單獨(dú)生出的側(cè)花包圍。多瘤的塊莖在地下不均勻生長(zhǎng)，其顏色有淺褐色、白色、紅色等[1]。

Figure 2. FGF10 reversed PM-induced secretion of inflammatory mediators in the BALF from C57BL/C mice. The levels of inflammatory mediators IL-6（A），IL-8（B），PGE2（C）and TNF-α（D）in BALF were measured by ELISA. Mean±SD.n=3.**P＜0.01vs vehicle group；#P＜0.05，##P＜0.01vs PM group.圖2 FGF10逆轉(zhuǎn)PM誘導(dǎo)的C57BL/6小鼠BALF中炎癥介質(zhì)的分泌

3 3-MA 逆轉(zhuǎn)PM 誘導(dǎo)的氣道上皮細(xì)胞炎癥介質(zhì)分泌及NF-κB通路改變

使用SPSS 20.0 統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。數(shù)據(jù)均以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（mean±SD）表示。多組間比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用Bonferroni 校正的t檢驗(yàn)。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

Figure 3. 3-MA reversed PM-induced secretion of inflammatory mediators in culture supernatant from BEAS-2B cells with the change of NF-κB pathway. The BEAS-2B cells were pretreated with 3-MA for 1 h before challenged with PM for 24 h. The levels of inflammatory mediators IL-6（A），IL-8（B），PGE2（C）and TNF-α（D）in culture supernatant were quantified by ELISA.The protein levels of p-p65，p65，p-IκBα and IκBα were determined by Western blot（E）. Mean±SD.n=3.**P＜0.01vs vehicle group；#P＜0.05，##P＜0.01vs PM group.圖3 3-MA逆轉(zhuǎn)PM誘導(dǎo)的氣道上皮細(xì)胞炎癥介質(zhì)分泌及NF-κB通路改變

4 FGF10 逆轉(zhuǎn)PM 誘導(dǎo)的氣道上皮細(xì)胞炎癥介質(zhì)分泌及自噬流信號(hào)改變

10 μg/L FGF10 預(yù)先處理BESA-2B 細(xì)胞1 h，200 mg/L PM 刺激24 h，ELISA 結(jié)果顯示，PM 可以誘導(dǎo)氣道上皮細(xì)胞炎癥介質(zhì)IL-6、IL-8、PGE2和TNF-α分泌，F(xiàn)GF10可以逆轉(zhuǎn)PM 誘導(dǎo)氣道上皮炎癥介質(zhì)分泌（P＜0.01），見圖4A～D。與此同時(shí)，Western blot 結(jié)果顯示，PM可以誘導(dǎo)氣道上皮細(xì)胞自噬流改變，具體表現(xiàn)為L(zhǎng)C3-II/LC3-I 比值升高和p62 降解阻滯，F(xiàn)GF10 可以逆轉(zhuǎn)PM誘導(dǎo)的自噬流改變（P＜0.05），見圖4E。

Figure 4. FGF10 reversed PM-induced secretion of inflammatory mediators in culture supernatant from BEAS-2B cells with the change of autophagy-related proteins LC3 and p62. The BEAS-2B cells were pretreated with FGF10 for 1 h before challenged with PM for 24 h. The levels of inflammatory mediators IL-6（A），IL-8（B），PGE2（C）and TNF-α（D）in culture supernatant were quantified by ELISA. The expression of autophagy-related proteins LC3 and p62 was determined by Western blot（E）. Mean±SD.n=3.**P＜0.01vs vehicle group；#P＜0.05，##P＜0.01vs PM group.圖4 FGF10逆轉(zhuǎn)PM誘導(dǎo)的氣道上皮細(xì)胞炎癥介質(zhì)分泌及自噬流信號(hào)改變

討論

空氣污染是我國目前嚴(yán)重危害健康的公共衛(wèi)生問題，作為空氣污染物中固態(tài)顆粒狀物質(zhì)和液態(tài)顆粒狀物質(zhì)的總稱，PM 可以隨呼吸氣流廣泛沉積于氣道或肺泡［10］。PM 短時(shí)暴露導(dǎo)致的呼吸道炎癥效應(yīng)包括氣道-肺泡炎癥，在呼吸系統(tǒng)疾?。ò詺獾兰膊『头螑盒阅[瘤等）發(fā)生發(fā)展中扮演了始動(dòng)角色［11］。針對(duì)PM 短時(shí)暴露的呼吸道炎癥效應(yīng)在呼吸系統(tǒng)疾病發(fā)生發(fā)展中的始動(dòng)角色，結(jié)合目前文獻(xiàn)圍繞細(xì)胞自噬在PM 的誘導(dǎo)氣道炎癥中的作用以及FGF10 在支氣管-肺上皮損傷后的修復(fù)作用，本文擬深入研究自噬流在PM 誘導(dǎo)的氣道炎癥中的變化及FGF10 是否通過調(diào)控自噬流發(fā)揮抗炎效應(yīng)。由于臨床上難以獲取PM 短時(shí)暴露下的人體肺組織，我們使用PM 連續(xù)2 d 氣道滴注的動(dòng)物模型，造模方法參考已發(fā)表的文章［12］。獲取動(dòng)物肺組織進(jìn)行病理分級(jí)評(píng)分，發(fā)現(xiàn)PM 氣道滴注可以導(dǎo)致肺組織以氣道炎癥為主的病理改變，具體包括氣道PM 沉積和氣道周圍炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，而肺泡腔內(nèi)無明顯的炎癥細(xì)胞滲出。PM 按其空氣動(dòng)力學(xué)直徑，可以廣泛沉積于氣道-肺泡［13］，以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果可能與氣道滴注的實(shí)驗(yàn)方式相關(guān)，因?yàn)镻M 氣道滴注難保證PM 沉積到氣道終末的肺泡，在后續(xù)的研究中設(shè)計(jì)霧化方式可能會(huì)更加貼合臨床實(shí)踐。在PM 氣道滴注動(dòng)物模型中，預(yù)先氣道滴注FGF10干預(yù)可以緩解PM 誘導(dǎo)氣道炎癥，肺組織病理分級(jí)評(píng)分降低。與肺組織病理分級(jí)評(píng)分一致的是，BALF 中炎癥介質(zhì)IL-6、IL-8、PGE2和TNF-α 的分泌變化。無論是肺組織病理分級(jí)評(píng)分或是炎癥介質(zhì)的分泌，給予額外FGF10 可以補(bǔ)充肺損傷情況下自分泌FGF10的含量，發(fā)揮抗炎保護(hù)作用。至于PM 短時(shí)暴露下自噬水平的變化，我們發(fā)現(xiàn)LC3-II和p62蛋白表達(dá)水平升高，LC3-II/LC3-I 蛋白比例升高，而FGF10 干預(yù)可以逆轉(zhuǎn)自噬流的變化。已知自噬涉及自噬誘導(dǎo)發(fā)生及自噬泡生成、自噬溶酶體生成和自噬溶酶體降解3個(gè)主要環(huán)節(jié)［6］。本研究中LC3-II/LCI 蛋白比值和p62 蛋白水平升高，說明PM 誘導(dǎo)自噬流紊亂，表現(xiàn)為PM 誘導(dǎo)自噬發(fā)生而自噬降解阻斷，與Zhao等［14］報(bào)道的超細(xì)顆粒物誘導(dǎo)肺泡上皮細(xì)胞自噬流紊亂的結(jié)果相似。伴隨著FGF10可以逆轉(zhuǎn)自噬流紊亂，推測(cè)FGF10主要作用在PM 誘導(dǎo)自噬發(fā)生的核心環(huán)節(jié)。肺泡上皮的自噬流紊亂是肺纖維化重要的病理生理過程［6］，而肺組織自噬在PM 誘導(dǎo)的氣道炎癥中的作用仍待深入研究。自噬具有雙重性，一定程度的自噬可以維護(hù)氣道上皮的穩(wěn)定，而持續(xù)刺激下過度的自噬可以介導(dǎo)氣道上皮的損傷［15］。

PM 短時(shí)暴露誘導(dǎo)氣道炎癥時(shí)，氣道上皮細(xì)胞在氣道炎癥中扮演啟動(dòng)細(xì)胞和繼發(fā)受體，于是在研究自噬與氣道炎癥的分子機(jī)制研究方面我們使用了人正常氣道上皮細(xì)胞。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，自噬抑制劑3-MA 可以逆轉(zhuǎn)PM 誘導(dǎo)的氣道上皮細(xì)胞炎癥介質(zhì)分泌，與Zhu 等［16］的基因芯片發(fā)現(xiàn)PM 可以誘導(dǎo)自噬相關(guān)蛋白表達(dá)的結(jié)果一致。炎癥介質(zhì)的分泌與NF-κB通路密切相關(guān)，我們亦發(fā)現(xiàn)3-MA 可以逆轉(zhuǎn)PM 誘導(dǎo)的NF-κB 通路中p65 和IκBα 磷酸化水平的變化，推測(cè)自噬/NF-κB 通路參與PM 誘導(dǎo)的氣道炎癥。與動(dòng)物實(shí)驗(yàn)相似的是，細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中FGF10 干預(yù)可以逆轉(zhuǎn)PM 誘導(dǎo)的炎癥介質(zhì)IL-6、IL-8、PGE2和TNF-α 分泌，伴隨自噬相關(guān)蛋白LC3-II/LC-I 蛋白比值和p62 蛋白表達(dá)的變化。自噬抑制劑3-MA 主要經(jīng)抑制自噬體生成，結(jié)合FGF10逆轉(zhuǎn)PM 誘導(dǎo)的LC3-II/LC-I蛋白比值和p62 蛋白表達(dá)變化，推測(cè)FGF10 在調(diào)控自噬方面的作用機(jī)制與3-MA 作用靶點(diǎn)相似，主要在自噬體生成方面。綜合以上結(jié)果，我們率先發(fā)現(xiàn)了FGF10在PM 誘導(dǎo)的氣道炎癥中經(jīng)調(diào)控自噬流而發(fā)揮抗炎作用，為FGF10 在氣管-肺上皮損傷修復(fù)中的作用闡明了新的分子機(jī)制?？紤]到PM 短時(shí)暴露導(dǎo)致氣道炎癥時(shí)并未發(fā)生氣道重構(gòu)等結(jié)構(gòu)性改變，炎癥損傷具有一定的可逆性，而間充質(zhì)來源的FGF10 介導(dǎo)間充質(zhì)細(xì)胞與上皮信號(hào)之間的信號(hào)傳導(dǎo)本身即是機(jī)體的自我穩(wěn)態(tài)維持機(jī)制［17］。再考慮到在PM 持續(xù)暴露下機(jī)體自我修復(fù)能力的局限，給予重組FGF10 可以補(bǔ)充間充質(zhì)來源的FGF10 的不足，為后續(xù)重組FGF10的臨床轉(zhuǎn)化提供了思路。

目前圍繞FGF10 在PM 誘導(dǎo)氣道炎癥中的抗炎效應(yīng)方面的研究處于起步階段。我們之前研究發(fā)現(xiàn)FGF10 經(jīng)調(diào)控HMGB1 的胞核胞漿轉(zhuǎn)移而發(fā)揮抗炎效應(yīng)［18］，而本研究率先證實(shí)了FGF10 通過調(diào)控自噬流在PM 誘導(dǎo)的氣道炎癥中發(fā)揮抗炎效應(yīng)。然而整個(gè)研究中尚存在較多的不足之處：首先，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)PM 氣道滴注的實(shí)驗(yàn)方法雖然目前被廣泛使用，但PM 氣道滴注不能完全模擬PM 暴露呼吸道吸入的過程，PM 氣道滴注的動(dòng)物模型以氣道炎癥損傷為主，后續(xù)的研究中使用PM 霧化吸入的方法可能更為妥當(dāng)；其次，在PM 誘導(dǎo)自噬流變化方面，無論是動(dòng)物實(shí)驗(yàn)或是細(xì)胞實(shí)驗(yàn)，僅是檢測(cè)了兩個(gè)自噬相關(guān)蛋白LC3 和p62，沒有繼續(xù)研究自噬體生成、溶酶體降解等自噬紊亂過程，需要更深層次的研究以尋找更多可以干預(yù)的靶點(diǎn)；最后，在自噬紊亂和炎癥反應(yīng)之間，本研究證實(shí)了FGF10 可以逆轉(zhuǎn)自噬紊亂和炎癥反應(yīng)，3-MA 可以逆轉(zhuǎn)PM 誘導(dǎo)的NF-κB 通路活化，在FGF10 和自噬/NF-κB 通路信號(hào)之間需要涉及更多的分子機(jī)制實(shí)驗(yàn)來闡明。

綜上所述，本研究從動(dòng)物實(shí)驗(yàn)和細(xì)胞實(shí)驗(yàn)兩個(gè)層面揭示了FGF10 在PM 誘導(dǎo)的氣道炎癥中發(fā)揮抗炎效應(yīng)，其中分子機(jī)制涉及自噬/NF-κB通路，揭示了間充質(zhì)來源的FGF10 參與氣道上皮修復(fù)的嶄新機(jī)制，為后續(xù)FGF10針對(duì)PM 相關(guān)呼吸道炎癥的成藥性提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。