壯藥龍盤止咳方通過調控p38 MAPK/NF-κB/NLRP3通路減輕急性支氣管炎小鼠肺損傷*

韋 杏， 鄒 敏， 李崇進， 農志飛， 藍毓營△

（1廣西中醫藥大學壯醫藥學院，廣西南寧 530001；2廣西國際壯醫醫院兒科，廣西南寧 530200；3茂名市中醫院兒科，廣東茂名 525000；4廣西中醫藥大學第一附屬醫院兒科，廣西南寧 530023）

急性支氣管炎是一種由病毒、細菌或理化因素（如冷空氣和粉塵等）引起的以急性咳嗽為表現的下呼吸道炎癥。據報道，大多數患者治療方法不恰當或無效［1］，多達60%的急性支氣管炎抗生素處方不合理［2］，增加了抗生素抗藥性的患病率和醫療成本［3-4］。因此，醫師面臨著提供循證有效的癥狀控制療法的挑戰。中醫在本病治療上具有獨特優勢，可調理體質，從根本上減少疾病發生和反復發作。壯藥作為中醫藥學的一個組成部分，在治療上也獲得明顯的療效。壯藥龍盤止咳方（Longpan-Zhike decoction，LPZKD）由龍脷葉、魚腥草、不出林、柿葉、盤龍參及甘草組成，治療小兒急性支氣管炎（風熱犯肺證）療效顯著，且安全性好［5］，但其作用機制尚不明確。

炎癥因子是本病發病過程中的重要組成部分，核苷酸結合寡聚化結構域樣受體蛋白3（nucleotidebinding oligomerization domain-like receptor protein 3，NLRP3）與許多炎性疾病的發生發展密切相關，是最重要的炎癥小體類型之一［6］。NLRP3 炎癥小體的過度激活，在呼吸道的大多數病毒感染過程中能夠導致炎癥反應和組織損傷［7］。核因子κB（nuclear factor-κB，NF-κB）是NLRP3炎癥小體激活的重要因素，兩者之間存在正相關關系［8］。p38 絲裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinase，MAPK）可通過NF-κB 調節細胞腫瘤壞死因子α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）、白細胞介素1β（interleukin-1β，IL-1β）和IL-18 的表達，介導肺損傷［9-10］。在急性支氣管炎模型中，p38 MAPK 通路被激活，參與了呼吸道炎癥反應［11］。故本研究旨在探究壯藥龍盤止咳方對急性支氣管炎發揮保護作用的潛在機制，以期為更廣泛的應用提供實驗參考。

材 料 和 方 法

1 動物

SPF 級KM 小鼠80 只，4 周齡，雌雄各半，體質量（20±2）g，購自濟南朋悅動物繁育有限公司，合格證號為SCXK（魯）2019-0003。在溫度（20±2）℃、濕度45%～55%、12 h光照/12 h黑暗周期的條件下飼養，可自由飲食和攝水。實驗經廣西中醫藥大學倫理委員會批準，并嚴格遵守《實驗動物的護理和使用指南》的指導原則。所有小鼠適應性飼養7 d，然后開始實驗。

2 主要藥品、試劑及儀器

壯藥龍盤止咳方含龍脷葉10 g、魚腥草10 g、不出林5 g、柿葉5 g、盤龍參5 g 和甘草5 g，這些藥材均購自北京同仁堂；上述藥材加入8 倍量的水分充分浸泡30 min，煎煮40 min，過濾藥液，藥渣再加入6 倍量的水繼續煎煮40 min 后過濾藥液，合并兩次藥液，煎煮濃縮至100 mL，1 mL相當于生藥0.4 g。

p38 MAPK 特異性抑制劑SB203580 和CelLytic?NuCLEAR?提取試劑盒（NXTRACT）購自Sigma-Aldrich；HE 染色試劑、RIPA 裂解液和BCA 試劑盒購自碧云天生物科技公司；小鼠TNF-α、IL-1β 和IL-18 ELISA 檢測試劑盒購自武漢貝茵萊生物科技有限公司；Trizol、PrimeScript?RT 試劑盒和SYBR?Premix Ex Taq?Ⅱ試劑盒購自TaKaRa；RT-qPCR 引物購自上海吉瑪基因（GenePharma）；兔源Ⅰ抗（p38 MAPK、p-p38 MAPK、NF-κB p65、NLRP3、cleaved caspase-1、β-actin 和histone H3）和山羊抗兔IgG（H+L）購自Cell Signaling Technology。

iMark680 多功能酶標儀、蛋白轉膜裝置和Quantity One 4.6.2 軟件（Bio-Rad）；Prism?7300 型熒光定量PCR系統（ABI）；BX61電動顯微鏡（Olympus）。

3 主要方法

3.1 模型的建立與分組 適應性飼養7 d 后，隨機選取16 只小鼠作為對照，其余小鼠采用煙熏法建立急性支氣管炎模型［12-13］。具體操作為：將小鼠置于自制煙熏箱（用有機玻璃制作，80 cm×80 cm×80 cm）中，取刨花和煙葉各50 g，于每天8：00 和15：00 各煙熏1 次，每次30 min，連續7 d。當小鼠出現咳嗽、流涕、呼吸急促、精神萎靡、形體消瘦、聚集、瞇眼等表現后，停止煙熏，從對照組和造模小鼠中各隨機選取4 只小鼠（雌雄各2 只），處死后取氣管和肺組織，4%多聚甲醛固定，石蠟包埋，進行HE染色，觀察小鼠氣管和肺組織病理變化。對照小鼠光鏡下顯示：肺內各級支氣管結構正常，肺泡結構清晰，肺泡腔內無滲出，未見炎癥細胞浸潤；造模小鼠可見支氣管壁增厚，黏膜充血、水腫，管壁和管腔內炎癥細胞浸潤，且肺組織有滲出液，明顯水腫、充血，肺泡間隔增寬、肺泡壁增厚，肺泡腔內和肺泡之間有炎癥細胞浸潤，提示造模成功。

將造模成功的60 只小鼠隨機分為模型（model）組、SB203580（5 mg/kg［14］）組、高劑量（10.4 g/kg）龍盤止咳方（LPZKD-H）組、低劑量（5.2 g/kg）龍盤止咳方（LPZKD-L）組、龍盤止咳方（10.4 g/kg）+SB203580（5 mg/kg）組（LPZKD+SB203580 組），每組12 只，雌雄各半。剩余12 只對照小鼠設為對照（control）組。給藥時，SB203580 組小鼠按照10 mL/kg 的劑量灌胃生理鹽水，然后腹腔注射5 mg/kg 的SB203580；龍盤止咳方各劑量組按照10 mL/kg 的劑量灌胃相應的藥物；龍盤止咳方+SB203580 組小鼠先按照10 mL/kg 的劑量灌胃10.4 g/kg 的龍盤止咳方，然后腹腔注射5 mg/kg 的SB203580；對照組和模型組灌胃和腹腔注射等體積的生理鹽水。每天1次，連續給藥1周。

劑量換算：給藥劑量按平均體質量70 kg 成人的體表面積換算，小鼠體質量按20 g 計，對應給藥劑量為成人的9.1 倍；壯藥龍盤止咳方成人每日給藥劑量相當于生藥40 g，則小鼠每日給藥劑量為5.2 g/kg，因此設置龍盤止咳方的低、高劑量分別為5.2 和10.4 g/kg。

3.2 小鼠一般狀態觀察及體質量測定 觀察給藥前后各組小鼠的一般狀態變化，包括咳嗽、流涕、呼吸急促、活動度、毛色等，并測定體質量。

3.3 支氣管肺泡灌洗液（bronchoalveolar lavage fluid，BALF）中炎癥相關因子的測定 處死小鼠，放入75%乙醇中浸泡2 min，然后暴露氣管，行氣管插管，結扎右肺，用注射器將0.3 mL 的生理鹽水溶液緩慢注入左肺后回抽，重復以上過程3 次，合并3 次灌洗液（共計0.70 mL，回收率約為77.78%），紗布過濾去除黏液后離心（4 ℃、447×g離心10 min），取上清保存于-20 ℃冰箱。按照ELISA 試劑盒說明書進行操作，檢測各組小鼠BALF 中TNF-α、IL-1β 和IL-18水平。

3.4 肺組織病理學觀察 取出小鼠的肺組織，生理鹽水沖洗后，濾紙吸干表面水分；取右側肺組織，4%多聚甲醛固定，乙醇梯度脫水，石蠟包埋，連續切3 μm 薄片，二甲苯脫蠟，梯度乙醇脫苯1 min，蒸餾水沖洗。蘇木精染色8 min，自來水沖去浮色，1%鹽酸酒精分色，伊紅染色5 min，自來水流水洗至無色，梯度乙醇脫水，二甲苯透明，中性樹脂封片，光鏡下觀察肺組織病理學變化，根據肺泡腔或肺泡間質炎癥細胞浸潤、肺泡間隔增寬、肺泡腔出血和肺泡壁厚度進行病理學評分，按程度“無、輕、中、重”分別計“0、1、2、3 分”，取評分之和為肺損傷評分，評分越高，損傷越嚴重。每只小鼠肺切片任取5 個獨立區域進行評分。

3.5 免疫組化法檢測肺組織NF-κB p65的表達 取3.4 石蠟包埋肺組織，切片；將切片于3% H2O2中在37 ℃下放置30 min 以滅活內源性過氧化物酶活性。然后在微波爐中用0.01 mol/L 檸檬酸鹽緩沖液進行抗原修復8 min，滴加Ⅰ抗（NF-κB p65，1∶100），4 ℃箱孵育過夜，加入Ⅱ抗（1∶300，生物素標記的山羊抗兔IgG 聚合物）并在37 ℃下孵育40 min。室溫DAB染色2 min 后，蘇木精復染，室溫3 min。光學顯微鏡觀察NF-κB p65蛋白陽性表達，用Image-Pro Plus 6.0計算平均吸光度。

3.6 RT-qPCR 檢測肺組織NLRP3、ASC、caspase-1和IL-1β 的mRNA 水平 左側肺組織分為兩部分，一部分液氮速凍后，-80 ℃冰箱保存，用于Western blot實驗；另一部分用于RT-qPCR實驗。使用Trizol從各組肺組織中提取總RNA，按照試劑盒說明書將RNA反轉錄為cDNA，進行RT-qPCR 擴增。反應體系（20 μL）：cDNA（200 ng/μL）2 μL，SYBR?Premix Ex TaqTM（2×）10 μL，上、下游引物（序列見表1）各0.4 μL，ddH2O 7.2 μL。反應條件：94 ℃預變性10 min；95 ℃變性15 s，60 ℃退火20 s，75 ℃延伸20 s，40 個循環。以GAPDH 為內參照，采用2-ΔΔCt法計算目的基因相對表達量。

建議：男性肝臟的承受能力是每天40克酒精，女性減半。一般40克酒精相當于含酒精6度的啤酒1000毫升，含酒精12度的紅酒500毫升，含酒精度50度的白酒100毫升。

表1 RT-qPCR引物序列Table 1. RT-qPCR primer sequences

3.7 Western blot 檢測肺組織p38 MAPK/NF-κB/NLRP3 通路相關蛋白的表達 取-80 ℃冰箱保存的肺組織，加入RIPA 裂解液研磨后，置于冰上，靜置后離心，提取上清液為總蛋白溶液，并采用CelLytic?NuCLEAR?提取試劑盒提取細胞核中的蛋白質。用BCA 法測量蛋白濃度后取等量蛋白質樣品（每孔30 μg），在10% SDS-PAGE 凝膠上進行電泳分離，然后轉移到PVDF膜上，5%脫脂奶粉封閉，加入相應Ⅰ抗（抗p38 MAPK、p-p38 MAPK、NF-κB p65、NLRP3 和cleaved caspase-1 抗體按照1∶1 000 比例進行稀釋，抗β-actin 和histone H3 抗體按1∶2 000 比例進行稀釋）于4 ℃下孵育過夜，HRP 標記的羊抗兔IgG Ⅱ抗（1∶5 000）室溫孵育1 h，隨后洗滌膜并使用Super ECL Plus 超靈敏發光溶液進行顯色。使用Quantity One 4.6.2 軟件測量每個條帶的灰度。以目的蛋白灰度值與β-actin 或histone H3 灰度值的比值作為各目的蛋白的相對表達量。

4 統計學處理

采用SPSS 22.0、GraphPad Prism 9.0 和Image-Pro Plus 6.0 軟件進行統計分析。數據以均數±標準差（mean±SD）表示。多組間比較采用單因素方差分析（one-way ANOVA），組間有差異進一步采用SNK-q檢驗進行兩兩比較。以P＜0.05 為差異有統計學意義。

結果

1 壯藥龍盤止咳方對小鼠一般狀態及體質量的影響

對照組小鼠精神狀態良好，毛色順滑有光澤，較活躍，未出現咳嗽和氣喘等癥狀；模型組小鼠精神萎靡，倦怠，毛色暗淡無光澤，活動減少，好聚集扎堆，出現咳嗽、流涕、呼吸急促等癥狀，且飲食減少，體質量較對照組顯著降低（P＜0.05）；給藥后，與模型組相比，SB203580組和高、低劑量龍盤止咳方組小鼠狀態有不同程度的改善，活動和飲食量增加，咳嗽、呼吸急促等癥狀減輕，體質量有所增加，但差異無統計學意義（P＞0.05）；龍盤止咳方+SB203580 組小鼠一般狀態改善程度優于SB203580 組和高劑量龍盤止咳方組。各組小鼠體質量的變化見表2。

表2 各組小鼠給藥前后體質量的變化Table 2. Changes in body mass of mice before and after administration（g. Mean±SD.n=12）

2 壯藥龍盤止咳方對小鼠BALF 中TNF-α、IL-1β和IL-18水平的影響

與對照組相比，模型組小鼠BALF 中TNF-α、IL-1β 和IL-18 水平顯著升高（P＜0.05）；與模型組相比，SB203580 組和高、低劑量龍盤止咳方組小鼠BALF中TNF-α、IL-1β 和IL-18 水平顯著降低（P＜0.05）；與SB203580 組和高劑量龍盤止咳方組相比，龍盤止咳方+SB203580 組小鼠BALF 中上述炎癥因子水平顯著降低（P＜0.05），見表3。

表3 各組小鼠BALF中TNF-α、IL-1β和IL-18水平Table 3. The levels of TNF-α，IL-1β and IL-18 in BALF of mice in each group（ng/L. Mean±SD.n=12）

3 壯藥龍盤止咳方對小鼠肺組織病理損傷的影響

對照組小鼠肺內各級支氣管結構正常，上皮細胞排列整齊，無變性壞死等損傷性改變，支氣管黏膜未見充血、水腫，肺泡結構清晰，肺泡上皮細胞及肺間質結構正常，肺泡腔內無滲出液，未見炎癥細胞浸潤；模型組小鼠可見支氣管壁增厚，管徑明顯變小，氣管和支氣管黏膜可見明顯的充血、水腫，管壁和管腔內炎癥細胞浸潤，肺組織有滲出液，肺泡間隔增寬、肺泡壁增厚，肺泡腔內和肺泡之間有炎癥細胞浸潤。與對照組（0.64±0.08）相比，模型組小鼠肺組織損傷評分（7.38±0.11）顯著升高（P＜0.05）；與模型組相比，SB203580 組（5.65±0.06）、高劑量龍盤止咳方組（5.49±0.08）和低劑量龍盤止咳方組（6.15±0.09）小鼠肺組織上述病理損傷有不同程度的改善，肺組織損傷評分顯著降低（P＜0.05）；與SB203580 組和高劑量龍盤止咳方組相比，龍盤止咳方+SB203580 組小鼠肺組織損傷評分（4.25±0.09）顯著降低（P＜0.05）。見圖1。

Figure 1. Pathological changes of mouse lung tissues（HE staining，scale bar=50 μm）. A：control group；B：model group；C：SB203580 group；E：LPZKD-H group；D：LPZKD-L group；F：LPZKD+SB203580 group. The structure of the bronchus at all levels in the lungs of the control group mice was normal，and there was no obvious inflammatory cell infiltration. The alveolar walls were thickened，and there was inflammatory cell infiltration in the alveolar cavity and between the alveoli in the model group. The above-mentioned pathological damage of mouse lung tissues in SB203580 group，LPZKD-L group，LPZKD-H group and LPZKD+SB203580 group were attenuated to varying degrees.圖1 小鼠肺組織病理學變化

4 壯藥龍盤止咳方對小鼠肺組織NF-κB p65 蛋白陽性表達的影響

對照組小鼠肺組織部分細胞質呈棕黃色；模型組小鼠肺組織可見NF-κB p65呈強陽性表達，分布于支氣管黏膜上皮細胞和肺泡上皮細胞，且其陽性表達不僅分布在陽性細胞的胞質內，胞核中也呈陽性反應，平均吸光度顯著高于對照組（P＜0.05）；與模型組相比，SB203580 組、高劑量龍盤止咳方組、低劑量龍盤止咳方組和龍盤止咳方+SB203580 組小鼠肺組織細胞核內呈NF-κB p65 陽性表達的細胞數顯著減少，平均吸光度顯著降低（P＜0.05）；且龍盤止咳方+SB203580 組NF-κB p65 核陽性表達的細胞數較SB203580 組和高劑量龍盤止咳方組顯著減少，平均吸光度顯著降低（P＜0.05），見圖2、表4。

表4 各組小鼠肺組織NF-κB p65陽性表達的平均吸光度Table 4. Average absorbance of NF-κB p65 positive expression in lung tissues of the mice in each group（Mean±SD.n=12）

Figure 2. Positive expression of NF-κB p65 in mouse lung tissues（IHC staining，scale bar=50 μm）. A：control group；B：model group；C：SB203580 group；E：LPZKD-H group；D：LPZKD-L group；F：LPZKD+SB203580 group. Brown-yellow was positive expression. Part of the cytoplasm of the lung tissue in the control group was brownish yellow，while the lung tissue in the model group showed strong positive expression of NF-κB p65. The positive expression of NF-κB p65 in the nucleus of mouse lung tissues in SB203580 group，LPZKD-L group，LPZKD-H group and LPZKD+SB203580 group decreased.圖2 小鼠肺組織NF-κB p65陽性表達

5 壯藥龍盤止咳方對小鼠肺組織NLRP3、ASC、caspase-1和IL-1β mRNA水平的影響

表5 各組小鼠肺組織中NLRP3、IL-1β、ASC和caspase-1的mRNA表達水平Table 5. The mRNA expression levels of NLRP3，IL-1β，ASC and caspase-1 in mouse lung tissues of each group（Mean±SD.n=12）

6 壯藥龍盤止咳方對小鼠肺組織p38 MAPK/NFκB/NLRP3通路相關蛋白表達的影響

與對照組相比，模型組小鼠肺組織中p-p38 MAPK/p38 MAPK、胞核NF- κB p65、NLRP3 和cleaved caspase-1 的蛋白水平顯著升高，胞質NF-κB p65 蛋白水平達顯著降低（P＜0.05）；與模型組相比，SB203580 組和高、低劑量龍盤止咳方組小鼠肺組織p-p38 MAPK/p38 MAPK、胞核NF-κB p65、NLRP3 和cleaved caspase-1 蛋白水平顯著降低，胞質NF-κB p65 蛋白水平顯著升高（P＜0.05）；與SB203580 組和高劑量龍盤止咳方組相比，龍盤止咳方+SB203580組小鼠肺組織p-p38 MAPK/p38 MAPK、胞核NF-κB p65、NLRP3 和cleaved caspase-1 蛋白水平顯著降低，胞質NF-κB p65 蛋白水平顯著升高（P＜0.05），見圖3、表6。

表6 各組小鼠肺組織p38 MAPK/NF-κB/NLRP3通路相關蛋白的表達Table 6. The expression of p38 MAPK/NF-κB/NLRP3 pathway-related proteins in the lung tissue of the mice in each group（Mean±SD.n=12）

Figure 3. The expression of p38 MAPK/NF-κB/NLRP3 pathway-related proteins in mouse lung tissues. A：control group；B：model group；C：SB203580 group；E：LPZKD-H group；D：LPZKD-L group；F：LPZKD+SB203580 group.圖3 小鼠肺組織p38 MAPK/NF-κB/NLRP3通路相關蛋白的表達

討論

目前大多數患者都意識到了抗生素的耐藥性，熱衷于嘗試替代療法，包括中草藥。中草藥被廣泛用于治療急性支氣管炎，在英國，許多患者認為中草藥比抗生素“侵入性小”，并且愿意服用［15］，說明中草藥在急性支氣管炎的治療中被越來越多的人認可和接受。

急性支氣管炎屬于壯醫“奔唉”范疇，病位在肺，常涉及脾、腎，發病機理為外毒侵襲，阻滯于氣道，使氣道不通或者臟腑功能失調，肺失宣降，肺氣上逆。應以疏風清熱、宣肺止咳為主要法則。壯藥龍盤止咳方選用道地壯藥組方，方中龍脷葉，善宣肺止咳；柿葉，肅肺止咳，兩藥合用具通氣道，調龍路之功；魚腥草，清熱解毒、消癰排膿，為“治痰熱壅肺，發為肺癰吐膿血之要藥”，與龍脷葉同為主藥；不出林，理氣化痰，主治咳嗽、咳血，與柿葉同為幫藥；四藥共為母藥，具有解毒的功效［5］。現代藥理研究表明，龍脷葉水提物可通過降低炎性因子水平，減輕哮喘模型大鼠肺組織與支氣管炎性病理改變［16-17］；柿葉具有抗炎、抗氧化和保護心腦血管的作用［18-19］，并可作為一種潛在的化學治療劑用于肺癌早期轉移［18］；魚腥草，可通過抗病反應、免疫反應和生物刺激反應等發揮治療支氣管炎的作用，還對肺炎支原體感染小鼠起抗感染作用［20-21］；甘草可通過促進免疫細胞增殖、影響體內細胞因子和抗體水平以及調控相關酶表達等增強免疫［22］。以上諸藥合用共奏清宣肺氣、化痰止咳、補虛扶正之功；并且所選壯藥大多具有較強的抗菌抗病毒作用。本研究結果顯示，急性支氣管炎小鼠經壯藥龍盤止咳方治療后，小鼠咳嗽、流涕和呼吸急促等癥狀明顯改善，BALF 中炎癥因子TNF-α、IL-1β 和IL-18 水平顯著降低，肺部病理損傷改善顯著，且高劑量組治療效果優于低劑量組，提示壯藥龍盤止咳方可減輕急性支氣管炎小鼠的肺部炎癥，對急性支氣管炎具有一定的治療作用。

NLRP3 炎癥小體是由NLRP3、ASC 和pro-caspase-1 形成的多蛋白復合物，其中NLRP3 是NLRP3炎癥小體的活性核心，它在許多細胞中都有表達，包括先天免疫細胞［23］和肺支氣管上皮細胞［24］。已有研究證實NLRP3炎癥小體在呼吸道感染及肺部疾病中被激活，隨后pro-caspase-1 會裂解為具有活性的cleaved caspase-1 p10/p20，進而將pro-IL-1β 和pro-IL-18 分別裂解為成熟的IL-1β 和IL-18［25］。因此，NLRP3 蛋白表達和IL-1β 水平常被用于監測NLRP3炎癥小體的活化。在病毒感染和肺損傷過程中，NLRP3 炎癥小體通路非常關鍵；靶向阻斷NLRP3 炎癥小體的激活，是控制肺移植后閉塞性細支氣管炎的一個有前景的策略［7］。因此，我們進行了一些研究，以探討壯藥龍盤止咳方對這些促炎因子及支氣管炎的影響是否與NLRP3 炎癥小體有關。結果顯示，在急性支氣管炎小鼠模型中肺組織NLRP3、IL-1β、ASC 和caspase-1的mRNA 表達水平顯著升高，而經壯藥龍盤止咳方干預后上述指標的表達水平降低，提示壯藥龍盤止咳方對急性支氣管炎的治療作用與抑制NLRP3炎癥小體活化有關。

本研究還觀察到，在急性支氣管炎小鼠模型中肺組織NF-κB p65 呈強陽性表達，且NF-κB p65 在胞核中的表達水平高于胞質，而NF-κB p65從細胞質轉至胞核，可通過轉錄翻譯促進炎癥因子的表達；經壯藥龍盤止咳方干預后NF-κB p65的入核作用被抑制，且NF-κB 與NLRP3 炎癥小體呈正相關，是NLRP3 炎癥小體激活的重要因素［8］，提示壯藥龍盤止咳方可能通過抑制NF-κB p65 的核移位，進而抑制NLRP3炎癥小體活化。p38 是MAPK 家族控制炎癥反應最重要的成員，NF-κB 是p38 MAPK 的下游信號分子，p38 MAPK 信號通路可以促進IκBα 的磷酸化和降解，進而激活NF-κB 通路［26］；抑制p38 MAPK 可抑制NF-κB 的活性進而抑制LPS 誘導的促炎介質如TNFα、IL-6和IL-1β 等細胞因子的產生，減輕肺部病理損傷［9，27］。本研究結果顯示，壯藥龍盤止咳方可降低肺組織p-p38 MAPK/p38 MAPK、胞核NF-κB p65、NLRP3 和cleaved caspase-1 的蛋白水平，增加胞質NF-κB p65 的蛋白水平，抑制p38 MAPK 信號通路的激活，且壯藥龍盤止咳方和p38 MAPK特異性抑制劑SB203580 聯合應用對p38 MAPK/NF-κB/NLRP3 通路及急性支氣管炎小鼠肺部炎癥的抑制作用均優于單獨應用，說明壯藥龍盤止咳方對肺部炎癥的保護作用可能與抑制p38 MAPK 的活化有關。這表明壯藥龍盤止咳方可能通過抑制p38 MAPK/NF-κB/NLRP3通路的激活，減少肺部炎癥細胞因子的產生，從而減輕急性支氣管炎小鼠肺損傷。

綜上所述，壯藥龍盤止咳方可減少肺部炎癥細胞因子的產生，減輕急性支氣管炎小鼠肺損傷，其作用機制可能與抑制p38 MAPK/NF-κB/NLRP3 通路的激活有關。本研究僅從炎癥反應的角度初步探討了壯藥龍盤止咳方對急性支氣管炎的保護機制，其發揮治療作用的具體機制是否與機體免疫有關，仍需進一步研究。