抗中性粒細胞胞質抗體、抗心磷脂抗體聯合β2-MG對早期糖尿病腎病診斷的應用價值

白芳 楊雪芬 馬瑩

(東營市人民醫院腎內科，山東 東營 257091)

糖尿病腎病(DN)是現今發現的由糖尿病引起的嚴重性和危害性最大的腎臟損傷疾病，屬于糖尿病微血管并發癥之一。目前DN尚無特效治療方式，臨床期一旦出現大量蛋白尿，治療往往難以奏效，因此對早期DN患者病情進行診治至關重要〔1，2〕。現有臨床診斷指標多是通過糖尿病的發病因素進行分析所得，大多為糖代謝指標、腎臟血流動力學指標、氧化應激指標、炎癥指標等，其中β2-微球蛋白(MG)的表達情況及其與相關指標的聯合檢測在DN患者診斷的加之分析是當下研究的熱點〔3〕。此外，眾多學者通過研究發現自身抗體在DN的發生發展中發揮重要作用，主要包括抗心磷脂抗體(ACLA)、抗中性粒細胞胞質抗體(ANCA)，但關于自身抗體與β2-MG聯合應用于DN診斷的研究報道甚少〔4，5〕。本研究通過對早期DN患者和早期糖尿病患者的自身抗體和β2-MG表達情況進行檢測與分析，以期為DN患者的臨床診治提供理論依據。

1 資料與方法

1.1一般資料 經醫學倫理研究委員會審核通過后，將2017年5月至2019年3月在東營市人民醫院腎內科就診的早期DN患者納入DN組(60例)，男36例，女24例；體重指數(BMI)21～29 kg/m2，平均(25.61±1.86)kg/m2；年齡62～75歲，平均(73.56±9.32)歲；病程2～17年，平均(8.53±3.78)年。另將同期在醫院內分泌科就診的早期糖尿病患者納入糖尿病組(60例)，男33例，女27例；BMI 22～30 kg/m2，平均(25.70±1.83)kg/m2；年齡61～77歲，平均(74.35±9.25)歲；病程2～16年，平均(8.26±3.32)年。納入標準：①早期糖尿病患者符合世界衛生組織(WHO)糖尿病診斷標準中2型糖尿病的診斷要求〔6〕；②DN患者符合DN的相關診斷標準，并根據病史、臨床表現、輔助檢查或經腎臟活檢病理檢查確診為DN者〔7〕；③根據Mogensen分期判斷屬于早期DN，即患者白蛋白排泄率為30～300 mg/24 h，尿白蛋白排泄率持續升高20～200 μg/min，尿白蛋白/尿肌酐為 30～300 μg/mg〔8〕；④精神正常，對研究知情且自愿參與；⑤無惡性腫瘤病史；⑥所有DN患者為2型糖尿病繼發。排除標準：①遺傳因素所致DN者；②伴有心、肝、腦等重要器官功能嚴重障礙者；③尿病急性代謝紊亂性疾病(酮癥酸中毒等)者；④嚴重傳染性疾病、酒精成癮史、藥物濫用史、腎功能損傷病史及腎臟疾病史；⑤伴有紫癜性腎炎、系統性紅斑狼瘡性腎炎等疾病。兩組一般資料差異無統計學意義(P>0.05)，具有可比性，且所有患者知情同意。

1.2方法 所有患者入組后給予臨床常規基礎對癥治療。并于治療前對兩組各項指標進行檢測，主要為自身抗體和血清指標。包括ACLA、ANCA及β2-MG，其中ANCA包括核周型ANCA (pANCA)、胞質型ANCA (cANCA)、不典型 ANCA(aANCA)，比較兩組抗體及β2-MG表達情況，并對各項指標與DN的相關性進行Logistic回歸分析，比較各檢測方法準確性。

1.2.1檢測標本 分別采用真空無抗凝管抽取兩組空腹靜脈血 3～6 ml，3 000 r/ min離心10 min后，采用1.5 ml Eppendorf 管取血清，并保存于 -20℃待測。

1.2.2檢測方法 所有儀器為德國羅氏診斷有限公司提供的免疫分析系統(型號：cabas 8000)。①pANCA、cANCA、aANCA水平采用間接免疫熒光法進行測定，檢測儀器由歐蒙杭州醫學實驗診斷有限公司提供，型號：EUROBMⅡ，首先于待檢標本片上滴加磷酸鹽緩沖液(PBS，0.01 mol/L)保持10 min 后擦去，然后滴加稀釋后的熒光標記抗體(歐蒙杭州醫學實驗診斷有限公司，批號：CF200721AC)溶液并保溫0.5 h，浸泡、振蕩后采用熒光顯微鏡進行觀察，對照顯示為(+)或(-)，且待檢標本特異度熒光染色強度達到“”以上可判定為陽性。②ACLA水平采用酶聯免疫吸附試驗進行檢測，試劑及儀器均為歐蒙杭州醫學實驗診斷有限公司提供，型號：ST-360，所有操作嚴格按照試劑盒進行；③β2-MG采用散射比濁法(定量)進行檢測，β2-MG>3.0 mg/L為陽性，所用儀器由德國羅氏診斷有限公司提供，試劑由美康生物科技股份有限公司(批號201106204)提供。

1.3統計方法 采用SPSS22.0軟件進行χ2檢驗、Logistic回歸分析。

2 結 果

2.1兩組抗體及β2-MG表達比較 DN組抗體及β2-MG陽性率高于糖尿病組，差異有統計學意義(P<0.05)。見表1。

表1 兩組抗體及β2-MG表達比較〔n(%)，n=60〕

2.2各血清學指標與DN的單因素相關性 不同ACLA〔88.89%(16/18)〕、pANCA〔81.82%(9/11)〕、cANCA〔76.92%(10/13)〕、aANCA〔84.21%(16/19)〕、β2-MG〔84.62%(22/26)〕水平下DN的發生率均具有顯著差異(χ2=12.810、4.904、4.227、10.568、15.908，均P<0.05)。

2.3兩組血清學指標與DN Logistic 多因素分析 ACLA、pANCA、cANCA、aANCA、β2-MG與早期DN的發生有顯著相關性(P<0.05)。見表2。

表2 兩組血清學指標與DN的Logistic多因素分析

2.4各檢測方法準確性比較 聯合檢測的敏感度顯著高于單獨ACLA、pANCA、cANCA、aANCA、β2-MG(P<0.05)，特異度顯著低于單獨ACLA、pANCA、cANCA、aANCA、β2-MG(P<0.05)，聯合診斷符合率顯著高于單獨ACLA、pANCA、cANCA、aANCA、β2-MG(P<0.05)。見表3。

表3 各檢測方法準確性比較〔n(%)〕

3 討 論

研究表明，約2/5的糖尿病患者會發生DN，且全世界范圍內DN患病率仍處于增長狀態〔9〕。DN的臨床治療以減少尿蛋白排泄、對癥治療而緩解病情為主，但多數DN患者往往預后較差，具有較高的死亡率，有研究發現DN患者3年死亡率接近40%〔10〕。故而，臨床早期診斷并給予及時治療對于改善預后至關重要。目前，DN的致病機制尚未完全明確，眾多學者認為與高血壓、血液性狀改變、糖脂代謝紊亂、遺傳因素、細胞因子及環境因素等多種因素密切相關。近年來，臨床常采用血清學指標進行輔助檢查，可在一定程度上對DN的臨床診斷起到輔助作用，但單一指標檢測對DN的臨床診斷效率較低。此外，隨著人們對糖尿病患者的研究不斷深入，發現自身相關抗體及β2-MG等介導的免疫損傷與DN密切相關〔11，12〕。

本研究結果顯示，DN組抗體及β2-MG陽性率顯著高于糖尿病組，與王爾萍等〔13〕研究結果相似，進一步說明以上各項指標均可能與DN的發生、發展密切相關。其中，ACLA是一種自身抗體，分布廣泛，主要以血小板和內皮細胞膜上帶負電荷的心磷脂作為靶抗原，參與了多種免疫性疾病的發生〔14〕。王波等〔15〕研究指出，ACLA與血栓形成、血小板減少等密切相關，且血管內皮細胞的損傷可加速ACLA的活化。ANCA是一種能有效反映系統性血管炎活動性的自身抗體，可分為pANCA、cANCA、aANC，能夠與中性粒細胞及單核細胞胞質中溶酶體酶發生反應而產生免疫作用。此外，ANCA還是系統性血管炎的血清標志性抗體〔16〕。β2-MG屬于腫瘤抗原相關低分子蛋白，是人體白細胞抗原分子的一個β輕鏈，主要經腎臟代謝，是反映腎小球濾過率的敏感性指標，現有研究將其應用到惡性腫瘤病情進展速度及遠期預后的評估中〔17〕。而糖尿病患者長期高血糖狀態，使得內環境長期紊亂，容易導致機體血脂代謝、氧化應激、血流動力學、炎癥等相關調節出現異常，且腎臟對于微血管病變較為敏感，以上反應可同時相互作用引起腎臟血管內皮細胞損傷，使其結構和功能發生改變，進而導致相關靶抗原暴露且炎癥反應等加重，刺激ACLA、pANCA、cANCA、aANCA等自身抗體大量形成，β2-MG等細胞因子大量分泌。其中，抗體分泌后還能形成抗原抗體復合物，并激活補體系統，進而產生一系列的級聯反應，導致腎臟血管內皮細胞進一步被破壞。

本研究結果顯示，聯合檢測的敏感度和診斷符合率顯著高于ACLA、pANCA、cANCA、aANCA、β2-MG單獨檢測，但特異度低于ACLA、pANCA、cANCA、aANCA、β2-MG單獨檢測，因血清指標聯合檢測具有創傷較小、方便、客觀、提示作用強等優點，但由于DN發病因素復雜，單一指標檢測敏感性，診斷符合率偏低，無法滿足臨床需要〔18〕。本研究還發現，不同ACLA、pANCA、cANCA、aANCA、β2-MG水平下DN的發生率具有顯著差異，且以β2-MG 的陽性表達者DN的發生率最高，Logistic 多因素分析結果顯示，ACLA、pANCA、cANCA、aANCA、β2-MG均與早期DN的發生均有顯著相關性。考慮原因與β2-MG的代謝有關，因近曲小管是其在體內的唯一處理場所，在經體內淋巴、血小板等處的核細胞產生后，正常情況下能自由通過腎小球，并幾乎全部由腎小管內皮細胞降解為氨基酸而被近曲小管重吸收，一旦機體腎小球濾過功能受損，將導致β2-MG濃度升高，對β2-MG進行檢測有利于臨床對腎損傷程度的診斷，提高糖尿病早期腎功能損害檢出率〔19〕。DN是腎衰竭最常見的原因，早期腎臟損傷具有一定的可逆性，在糖尿病患者中應展開定期ACLA、pANCA、cANCA、aANCA、β2-MG聯合檢測，及時發現腎損傷情況并加以治療以預防和改善DN患者的預后。

綜上，DN患者抗體及β2-MG陽性率顯著高于糖尿病患者，ACLA、pANCA、cANCA、aANCA、β2-MG均與DN的發生發展密切相關，早期DN患者的以上各項指標聯合檢測敏感性、診斷符合率較高，值得臨床推廣與應用。