Filmarray全自動(dòng)醫(yī)用PCR分析系統(tǒng)檢測臨床疑似呼吸道感染患者的數(shù)據(jù)分析*

付曉蕊，康蓓佩，賀文芳，張鵬亮，周 磊

空軍軍醫(yī)大學(xué)第一附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科，陜西西安 710032

急性呼吸道感染在社區(qū)和醫(yī)院較為常見，尤其是近年來，禽流感病毒、嚴(yán)重急性呼吸綜合征(SARS)冠狀病毒、新型冠狀病毒的大肆出現(xiàn)[1]，讓人類對呼吸道病毒相關(guān)傳染性疾病的關(guān)注度不斷上升[2-3]。當(dāng)前，呼吸道病毒感染檢測主要靠PCR[4]，靈敏度和特異度高。本研究應(yīng)用的Filmarray全自動(dòng)醫(yī)用PCR分析系統(tǒng)可檢測17種呼吸道病毒和3種細(xì)菌/非典型病原體，包括人呼吸道合胞病毒、人偏肺病毒、甲型流感病毒H1型、甲型流感病毒H3型、甲型流感病毒H1N1-2009型、乙型流感病毒、腺病毒、副流感病毒1～4型、人鼻/腸病毒、人冠狀病毒(hCoV)-OC43、hCoV-229E、hCoV-NL63、hCoV-HKU1、百日咳鮑特菌、肺炎衣原體、肺炎支原體等[5-7]。

目前，臨床上對病毒性感染的關(guān)注度還不夠高，存在一定程度上的認(rèn)識(shí)不足、觀念落后、意識(shí)淡薄。全球每年新發(fā)病毒型肺炎200多萬例，成人和兒童各100多萬例，亟須臨床醫(yī)生加強(qiáng)應(yīng)對能力。本研究旨在分析本院常見呼吸道相關(guān)病原體檢測結(jié)果，明確相關(guān)病原體感染類型，從而縮短診斷時(shí)間，為臨床呼吸道病原體感染快速診斷提供依據(jù)。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2016年8月至2019年6月本院診治的發(fā)熱、咳嗽，疑似呼吸道感染的患者(0～89歲)231例為研究對象，其中住院患者160例(呼吸科患者98例，非呼吸科患者62例)，門診患者71例；0～<10歲15例，10～<20歲8例，20～<30歲18例；30～<40歲21例，40～<50歲31例，50～<60歲38例，60～<70歲42例，70～<80歲37例，80～89歲21例；檢測標(biāo)本包括咽拭子164例、支氣管肺泡灌洗液38例、痰液29例。本研究經(jīng)本院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，所有患者均知情同意并簽署知情同意書。

1.2方法 采集痰液、咽拭子及支氣管肺泡灌洗液，放入轉(zhuǎn)運(yùn)培養(yǎng)基中；痰液及支氣管肺泡灌洗液留取在無菌痰杯中，及時(shí)送檢。標(biāo)本運(yùn)輸和儲(chǔ)存條件：室溫下最多保存4 h，2～8 ℃最多保存3 d，-15 ℃下最多保存30 d，標(biāo)本避免反復(fù)凍融。

采用Filmarray快速呼吸道病原體檢測試劑盒(法國生物梅里埃公司)同步對多種呼吸道病原體的核酸進(jìn)行擴(kuò)增與檢測，嚴(yán)格按照產(chǎn)品說明書進(jìn)行操作。在檢測結(jié)果的基礎(chǔ)上再次分析其基本病歷資料和臨床感染相關(guān)指標(biāo)，比如基礎(chǔ)疾病、發(fā)熱情況、住院時(shí)間、生化指標(biāo)和炎癥指標(biāo)等。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS26.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理和分析，不呈正態(tài)分布的計(jì)量資料以中位數(shù)和四分位數(shù)[M(P25，P75)]表示，組間比較采用秩和檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以例數(shù)和百分率表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1住院和門診患者呼吸道病原體分布情況 住院患者呼吸道病原體檢測總例數(shù)為160例，陽性61例，陽性率為38.13%；其中呼吸科患者檢測總例數(shù)最多，占61.25%，陽性35例，陽性率為35.71%；兒科患者陽性率最高，為77.78%。門診患者檢測總例數(shù)為71例，陽性26例，陽性率為36.62%；其中急診科患者檢測總例數(shù)最多，占32.39%，陽性9例，陽性率為39.13%，感染科和兒科患者陽性率較高，均為50.00%。見表1、2。

表1 住院患者呼吸道病原體分布情況

表2 門診患者呼吸道病原體分布情況

2.2各年齡段呼吸道病原體分布情況 0～<10歲年齡段患者為易感人群，陽性率最高，為80.00%，各年齡段呼吸道病原體分布情況見表3。

表3 各年齡段呼吸道病原體分布情況

2.3呼吸科住院患者與非呼吸科住院患者基本病歷資料比較 呼吸科住院患者與非呼吸科住院患者在年齡、吸煙、慢性阻塞性肺疾病(COPD)、體溫、咳嗽、肌肉痛或疲勞、咳痰、平均住院時(shí)間比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表4。

表4 呼吸科住院患者與非呼吸科住院患者基本病歷資料比較

2.4呼吸科住院患者與非呼吸科住院患者臨床相關(guān)指標(biāo)比較 呼吸科住院患者與非呼吸科住院患者白細(xì)胞計(jì)數(shù)、B型腦鈉肽水平比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表5。

表5 呼吸科住院患者與非呼吸科住院患者臨床相關(guān)指標(biāo)比較

2.5Filmarray 檢測的多項(xiàng)陽性結(jié)果 共檢測出陽性標(biāo)本87例，單一病毒感染標(biāo)本52例，其中檢出最多的是鼻/腸病毒22例，占42.31%；2種病毒合并感染19例，3種病毒合并感染14例，4種病毒合并感染2例。檢測標(biāo)本中包括2例暫未判斷出型別的甲型流感病毒，即甲型流感病毒核酸檢測陽性，但因?yàn)榉磻?yīng)測試條中引物的局限性不能做出型別判定，需送市級疾控中心檢測，后咨詢市級疾控中心回報(bào)流感H5N1型。見表6。

表6 Filmarray 檢測多項(xiàng)陽性結(jié)果

3 討 論

Filmarray全自動(dòng)醫(yī)用PCR分析系統(tǒng)是一個(gè)多功能集成的快速病原體檢測設(shè)備，允許檢測17種呼吸道病毒和3種細(xì)菌/非典型病原體，F(xiàn)ilmarray系統(tǒng)呼吸道感染模塊操作僅需要5 min的人工標(biāo)本處理和65 min的儀器檢測時(shí)間，快速方便、特異度和靈敏度高[8-9]，可以快速向臨床報(bào)告檢測結(jié)果，是一種新的分子即時(shí)檢測方法。

本研究結(jié)果顯示，本院住院患者呼吸道病原體陽性率為38.13%，低于華山醫(yī)院的檢測結(jié)果[10]。其中呼吸科患者檢測陽性例數(shù)最多(35例)，陽性率為35.71%，兒科患者陽性率最高，為77.78%，與后面的年齡分布統(tǒng)計(jì)結(jié)果0～<10歲的患兒陽性率80.00%相吻合，與國內(nèi)外研究報(bào)道基本一致[11-14]。0～<10歲的兒童為每年呼吸道感染易感人群[15]，并且以常見的鼻/腸病毒、副流感病毒和呼吸道合胞病毒多見，這提示0～<10歲兒童呼吸道病毒性感染不容忽視，需作好相關(guān)病毒性感染的宣傳教育活動(dòng)。本院門診患者急診科檢測呼吸道病原體總例數(shù)最多，占32.39%，陽性9例，陽性率為39.13%，提示對于急診患者快速高效的呼吸道相關(guān)病原體檢測十分有必要，能迅速明確感染類型，便于醫(yī)生診斷和臨床用藥。

本研究中呼吸科住院患者與非呼吸科住院患者的年齡、吸煙、COPD、體溫、咳嗽、肌肉痛或疲勞、咳痰，以及白細(xì)胞計(jì)數(shù)、B型腦鈉肽水平比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，提示有呼吸系統(tǒng)相關(guān)癥狀的患者出現(xiàn)呼吸系統(tǒng)疾病的概率會(huì)比其他患者要大一些，應(yīng)密切關(guān)注。

除此之外，本研究共檢測出陽性標(biāo)本87例，鼻/腸病毒檢測陽性率最高，共檢出33例，占37.93%。檢測結(jié)果可以通過樣品和質(zhì)控品的反應(yīng)曲線讀取，但也有碰到部分檢測標(biāo)本中包括暫未判斷出型別的甲型流感病毒，即甲型流感病毒核酸檢測陽性，但因?yàn)榉磻?yīng)測試條中引物的局限性不能做出型別判定，需送市級疾控中心檢測，這對發(fā)現(xiàn)檢測試劑條范圍以外的相關(guān)性感染也有一定的提示作用。

Filmarray全自動(dòng)醫(yī)用PCR分析系統(tǒng)有其獨(dú)特的優(yōu)勢，比如患者受肺炎支原體、肺炎衣原體、非典型病原體、百日咳鮑特菌感染困擾，因其培養(yǎng)條件苛刻常規(guī)實(shí)驗(yàn)室無法快速明確病原體，而此方法可以很快向臨床報(bào)告結(jié)果，還可以同時(shí)檢測到多種呼吸道相關(guān)病原體感染，對疑難病例有重要臨床指導(dǎo)價(jià)值，便于醫(yī)生及時(shí)了解患者感染狀態(tài)，全面防控相關(guān)病原體感染。但因其費(fèi)用昂貴，一般情況不建議使用，如遇病情遷延不愈或高度懷疑病毒感染而又暫時(shí)無法確認(rèn)或者混合感染時(shí)，可以考慮采用Filmarray全自動(dòng)醫(yī)用PCR分析系統(tǒng)快速檢測常見呼吸道感染相關(guān)的病原體，它能更好地服務(wù)于感染性疾病的診斷與臨床藥物的合理使用中，對臨床呼吸道感染患者的診斷和治療具有重要意義。