國產試劑在西門子ADVIA2400全自動生化分析儀上檢測的性能驗證*

彭 麗，唐 婷，李 玲

1.湖北省中醫院檢驗科，湖北武漢 430061；2.湖北省中醫藥研究院，湖北武漢 430074

因日本、歐美國家科技和工業的飛速發展，其生產的醫療檢驗設備也隨之得到高速發展。我國目前發展較好的二級醫院及各三級醫院檢驗科均引進了國外大品牌全自動生化分析儀[1]。近年來國內醫療行業快速發展，國產試劑的穩定性和準確性得到很大的提升。與進口的配套試劑相比，國產試劑在成本、試劑有效期等方面更具優勢，因此國產試劑越來越多地應用于進口生化分析儀[2-4]。檢驗儀器及項目的性能在檢驗醫學界一直備受關注[5-7]。根據《醫學實驗室質量和能力認可準則》[8]相關規定和要求，實驗室檢測系統的性能驗證是臨床檢驗質量管理的重要內容之一。本實驗室根據相關要求，對搭配國產試劑使用的西門子ADVIA2400全自動生化分析儀進行性能驗證和評價，其過程如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 收集湖北省中醫院門診及住院患者各檢測項目的異常低值和高值；隨機收集湖北省中醫院體檢中心體檢健康者的新鮮血清，無乳糜、溶血，無黃疸。

1.2儀器與試劑 所有生化項目的檢測均在西門子全自動生化分析儀上完成，型號為ADVIA2400。天門冬氨酸氨基轉移酶(AST)、γ-谷氨酰轉移酶(GGT)檢測試劑購自北京利德曼生化股份有限公司，其他檢測試劑均購自寧波美康生物科技公司。使用的校準品均購自相應的試劑公司，質控品購自英國朗道公司，使用中、高2個水平，批號分別為1284UN、1005UE。

1.3方法 通過評估丙氨酸氨基轉移酶(ALT)、AST、GGT、堿性磷酸酶(ALP)、總蛋白、清蛋白、三酰甘油(TG)、總膽固醇(TC)、肌酸激酶(CK)、總膽紅素(TBIL)、鈣、磷、葡萄糖、尿素、肌酐、尿酸、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)這18個項目的正確度、精密度、線性范圍、臨床可報告范圍和生物參考區間，結果與生產廠家給出的性能指標進行比較，驗證生產廠家給出的性能指標是否能滿足檢驗科的要求；若無廠家性能指標則與國家衛生健康委臨床檢驗中心規定的標準比較，判斷儀器的性能是否符合要求。

1.3.1正確度驗證 參加2020年國家衛生健康委臨床檢驗中心脂類、電解質、酶類、代謝物、總蛋白正確度驗證計劃、室間質評和湖北省臨床檢驗中心室間質評，依據回報結果判斷是否通過。判定標準：相對偏倚應小于衛生行業標準規定的偏倚或滿足國家衛生健康委臨床檢驗中心室間質評標準對正確度驗證的要求[9]。

1.3.2精密度驗證 選擇低值(中水平)、高值(高水平)質控品和新鮮混合血清標本各20份，測量前先定標，再做質控，質控結果在控制范圍內，連續重復測定20次，計算標準差、變異系數(CV)，得到重復性精密度。判定標準：重復精密度<1/4允許總誤差(TEa)。中間精密度，取1個月的室內質控值(高值、低值)計算CV、標準差，得到批間精密度。判定標準：中間精密度<1/3TEa。

1.3.3線性范圍評價 以50 μL為1個體積單位，將高值標本與低值標本以3∶1、2∶2、1∶3的體積比例混合，加上高、低值標本共5個標本按照由低到高測定2次，計算均值，記錄結果。以直接測定結果計算得出的相應濃度為X，以通過稀釋測定結果為Y，采用線性回歸方程計算得到a、b及r值。結果判斷：若b在0.97～1.03，r2>0.95，作a與0有無差異的t檢驗，如果P>0.05，則可直接判斷線性范圍在已涉及濃度內。若b不在0.97～1.03，a較大，舍去高值或低值數據，縮小分析范圍，另做線性回歸統計，直至其線性回歸方程的a和b均符合要求，則該范圍為線性范圍。

1.3.4臨床可報告范圍評價 取濃度偏于線性范圍高值的血清標本，按照1∶5、1∶10稀釋，個別項目可按1∶2、1∶4稀釋。每個項目檢測2次，取均值。判定標準：計算平均稀釋回收率，平均稀釋回收率應在90%～110%。

1.3.5生物參考區間的驗證 選擇20份體檢合格的健康者血清標本，在檢測系統上進行測定，對結果進行統計并與用相關行業標準提供的參考區間進行驗證[10]。R=(測定結果在參考范圍的例數/總測定例數)×100%。結果判斷：20份標本的檢測結果只允許10%的數據超過所驗證參考區間，否則，進行參考區間確立試驗。

1.4統計學處理 所有數據均用EXCEL2010分析處理，計算標準差、CV、線性回歸方程、r等。

2 結 果

2.1正確度驗證結果 清蛋白、TBIL、磷參加國家衛生健康委臨床檢驗中心和湖北省臨床檢驗中心室間質評，室間質評回報結果均顯示通過，CV分別為1.06%(<3.0%)、4.29%(<7.5%)、1.46%(<5.0%)；其他15個生化項目參加2020年國家衛生健康委臨床檢驗中心正確度驗證計劃，每個項目均有2個批號的標本，回報結果均顯示通過。見表1。

表1 正確度驗證結果

2.2精密度驗證結果 18個生化項目的重復精密度和中間精密度結果見表2，CV均通過了精密度驗證，見表2。

表2 精密度驗證結果

2.3線性范圍及臨床可報告范圍驗證結果 所有生化項目的線性范圍均來源于試劑說明書，18個生化項目線性范圍及臨床可報告范圍結果見表3、表4。

表3 線性范圍驗證結果

表4 臨床可報告范圍驗證結果

2.4生物參考區間驗證結果 ALP、尿素、肌酐等項目根據不同的性別、年齡劃分了不同的生物參考區間，分別分組進行驗證。18個生化項目生物參考區間的驗證結果見表5。

表5 生物參考區間驗證結果

3 討 論

檢測系統的性能是實驗室質量的重中之重?！夺t學實驗室質量和能力認可準則在臨床化學檢驗領域的應用說明》中明確規定檢驗方法和程序的分析性能驗證內容，至少包括正確度、精密度和可報告范圍[11]。對于使用內部程序的實驗室，應該進行性能確認試驗，以評估分析性能是否符合預期用途。本實驗室使用的寧波美康生物科技公司和北京利德曼生化股份有限公司生產的18個生化試劑，廠家均在西門子ADVIA2400這一款全自動生化分析儀上進行過性能確認試驗，試劑說明書也明確規定適用于該機型。因此實驗室只需要做性能驗證試驗。

正確度是評價儀器測量結果與真值的一致程度。國家衛生健康委臨床檢驗中心正確度驗證，使用的標本類型為新鮮冰凍血清，全程干冰運輸，基質為人血清，因此不存在基質效應，具有嚴格的均勻性、穩定性，可用于互通性評價。本實驗室參加2020年酶類、電解質、脂類、代謝物、總蛋白正確度驗證，每個測定日(3 d)各批號重復測定5次，15個項目均通過，且CV小。無法參加正確度驗證計劃的清蛋白、TBIL、磷通過參加2020年國家衛生健康委臨床檢驗中心和湖北省臨床檢驗中心室間質評，回報結果顯示通過，即為通過正確度驗證。

精密度是通過檢測每個項目質控品值，計算項目重復精密度和中間精密度，并與寧波美康生物科技公司或者北京利德曼生化股份有限公司實際說明書中的聲明進行比較，核實是否與廠家聲明的一致。如果試驗的精密度>廠家聲明的精密度值，需要進一步計算該項的驗證值，如果重復精密度、中間精密度<驗證值，說明差異無統計學意義(P>0.05)，同樣核實了與允許范圍的一致性，驗證通過。如二者數值很接近，為可靠起見，可以添加2個批次測量，將所得數據與以前數據合并再計算，可能得到更可靠的結果。如果重復精密度、中間精密度>驗證值，精密度驗證未通過，應與廠家聯系并取得幫助。重復精密度是考察儀器檢測方法的隨機誤差。本實驗室的18個項目重復精密度均<1/4TEa，且增加了1個新鮮混合血清。其中重復精密度CV值最高的2個項目分別是ALT、AST。ALT重復精密度低值CV為3.30%，AST重復精密度低值CV為3.50%，這2個項目分別在檢測值為40 U/L、34 U/L時重復性稍差。中間精密度是在檢測系統處于優良的條件下，連續測定20 d，取得20個結果，判斷這20個獨立結果間的一致程度。本實驗室的18個項目中間精密度均<1/3TEa，其中AST中間精密度低值CV為3.38%，HDL-C中間精密度高值CV為3.32%，為中間精密度CV值較高的2個項目。AST、HDL-C的中間精密度允許范圍分別是<5.0%和<10.0%，HDL-C的允許范圍比較大，且AST重復精密度的低值CV為3.50%，雖然結果也能滿足要求，依然需要密切關注AST。

線性范圍是采用未經過任何處理的患者檢驗標本，確定某項目檢測上限的同時驗證其檢測上下限范圍是否呈線性關系[12-13]。臨床可報告范圍上限為線性范圍上限×最大稀釋度。結合最大稀釋度及線性范圍確定臨床可報告范圍。線性范圍關系到能否給臨床提供一份可靠的數據[14]，本實驗室使用的國產試劑可以準確地定量分析出這18個生化項目的檢測范圍，可以在對標本不做任何預處理的情況下得到可靠的線性范圍和臨床可報告范圍。所有項目的b值均在0.97～1.03，r2均>0.95，即表示在標本狀態良好無干擾的情況下，已驗證上述項目的線性范圍與廠家相符。其中AST、葡萄糖、尿素這3個項目驗證出的線性范圍與廠家相比，范圍略窄，體現在低值偏高，驗證的線性范圍是2～600 U/L、0.4～25.0 mmol/L、0.4～35.7 μmol/L，廠家提供的線性范圍分別是1～600 U/L、0.2～25.0 mmol/L、0.3～35.7 μmol/L。臨床可報告范圍是分析各稀釋濃度的線性關系，確定最高稀釋倍數，從而確保高值標本報告的準確性。在日常工作中，經常會遇到超出線性范圍的高值標本，需要稀釋處理才能得到檢測結果[15]。本研究檢測的18個生化項目，最高稀釋倍數均為10倍，平均稀釋回收率均在90%～110%，即在驗證的臨床可報告范圍內，對標本進行稀釋處理，檢驗結果是可靠的，符合臨床要求。

生物參考區間的驗證，也就是參考值范圍的驗證[16]。本實驗室根據相關標準，不同的分組分別進行生物參考區間的驗證。除了AST(女)，總蛋白、清蛋白、尿素(男≥60歲)這3組的R值為95%，其他組別均為100%。說明生物參考區間驗證通過，使用的參考范圍適用于本實驗室。

綜上所述，本實驗室在西門子ADVID2400全自動生化分析儀上對國產試劑的正確度、精密度、線性范圍、臨床可報告范圍、生物參考區間等性能指標進行驗證，結果均達到衛生行業標準要求。國產試劑搭配進口全自動生化分析儀，可以滿足臨床檢測需求。