血清miR-650、miR-19b1和ACR在預測妊娠高血壓綜合征腎功能損害中的價值

汪 倩

復旦大學附屬婦產科醫院產科，上海 200090

妊娠高血壓綜合征(以下簡稱妊高征)是女性妊娠過程中特有的疾病，多發生在妊娠20～24周，臨床表現為高血壓、蛋白尿和水腫等，常常累及多個臟器的損害，以腎臟損害最為常見[1]。妊高征在我國發病率為9%～12%，嚴重威脅孕產婦及胎兒的生命安全[2]。因此，早期對妊高征患者進行診斷，并在其腎功能損害可逆期進行干預，對于改善患者預后具有重要的臨床意義。尿微量蛋白/肌酐(ACR)是反映腎功能的重要指標，它不受尿量、尿液濃縮程度和時間的影響，因此可以比較客觀地反映尿蛋白含量，其水平越高，腎功能損害越嚴重[3]。微小核糖核酸是一類非編碼RNA，參與多種疾病的病理生理過程，包括先兆子癇和妊娠期腎功能的損害過程[4]。本研究聯合檢測miR-650、miR-19b1和ACR，觀察其對妊高征患者腎功能損害的預測價值，現報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選擇2019年1月至2020年12月在本院診治的妊高征患者130例為妊高征組，根據妊高征的嚴重程度將患者分為輕度組(48例)、中度組(45例)和重度組(37例)。標準如下，輕度：妊娠前20周基礎血壓正常，妊娠20周后血壓≥140/90 mm Hg，在產后的12周內能夠恢復正常，并且蛋白尿為陰性；中度：妊娠20周后血壓為140/90～160/110 mm Hg，尿蛋白≥0.5 g/24 h；重度：血壓>160/110 mm Hg，且尿蛋白≥5.0 g/24 h，可伴有水腫。根據患者肌酐清除率(Ccr)水平將妊高征組進一步分為腎功能異常組(Ccr<80 mL/min，96例)和腎功能正常組(Ccr≥80 mL/min，34例)。妊高征組患者年齡25～45歲、平均(34.29±4.68)歲，體質量指數(BMI)為(26.35±3.17)kg/m2，孕周21～36周、平均(34.94±4.95)周。選擇同期在本院產檢的健康孕婦65例為健康妊娠組，年齡25～45歲、平均(35.08±5.18)歲，BMI為(26.09±4.15)kg/m2，孕周20～35周、平均(35.18±5.07)周。另選擇同期本院健康體檢女性45例為健康對照組，年齡21～46歲、平均(34.86±5.17)歲，BMI為(26.18±4.18)kg/m2。妊高征組納入標準：(1)妊高征組患者符合妊高征的診斷標準；(2)妊娠者孕期超過20周，且均為單胎妊娠的初產婦；(3)入院前均未經有效治療。妊高征組排除標準：(1)原發性腎功能損害；(2)原發性高血壓；(3)合并急慢性感染，包括肝炎、結核和肺炎等；(4)合并冠心病和糖尿病等慢性疾病。妊高征組、健康妊娠組、健康對照組的一般資料比較，差異無統計學意義(P>0.05)，具有可比性。本研究經醫院倫理委員會批準，所有研究對象均簽署知情同意書。

1.2方法 研究對象入院后抽取肘靜脈血5 mL，在室溫下靜置20 min，3 000 r/min離心10 min，離心半徑為15 cm，去上清液3 mL，放置于-80 ℃的冰箱中待測。采用TaqMan miRNA試劑盒提取細胞總RNA，采用實時熒光定量PCR檢測血清miR-650和miR-19b1水平。根據目標基因的mRNA序列，設計引物，以軟件Primer express 3.0設計反轉錄產物。miR-650擴增引物正向：5′-AGGAGGCAGCGCTCTC-3′；擴增引物反向：5′-CTGCCCCAGGTGCTGCT-3′；miR-19b1擴增引物正向：5′-GGGCGACCTACGTTTGGACG-3′；擴增引物反向：5′-CAGTGCGTGTCGTGGAGT-3′；U6擴增引物正向：5′-GGGCTCGCTTCGGCAGCACA-3′；擴增引物反向：5′-TGGTGTCGTGGAGTCG-3′。反轉錄后以反轉錄產物為模板，于實時定量PCR儀上進行擴增，反應條件為85 ℃反應3 min，85 ℃反應20 s，42 ℃反應40 s，總共循環35次，采用2-ΔΔCt表示miR-650和miR-19b1的相對表達量。

1.3觀察指標 (1)觀察各組血清miR-650、miR-19b1水平和ACR的變化。(2)分析血清miR-650、miR-19b1水平和ACR與妊高征嚴重程度和腎功能損害的關系。(3)分析血清miR-650、miR-19b1和ACR預測妊高征患者發生腎功能損害的效能。

2 結 果

2.1各組血清miR-650、miR-19b1水平和ACR比較 妊高征組血清miR-650水平和ACR高于健康妊娠組和健康對照組(P<0.05)，而健康妊娠組明顯高于健康對照組(P<0.05)；妊高征組血清miR-19b1水平明顯低于健康妊娠組和健康對照組(P<0.05)，而健康妊娠組明顯低于健康對照組(P<0.05)。見表1。

表1 各組血清miR-650、miR-19b1水平和ACR比較

2.2血清miR-650、miR-19b1水平和ACR與妊高征嚴重程度的關系 妊高征患者重度組和中度組的血清miR-650水平和ACR明顯高于輕度組(P<0.01)，而重度組明顯高于中度組(P<0.05)；重度組和中度組血清miR-19b1水平明顯低于輕度組(P<0.05)，而重度組明顯低于中度組(P<0.05)。見表2。

表2 血清miR-650、miR-19b1水平和ACR與妊高征嚴重程度的關系

2.3血清miR-650、miR-19b1水平和ACR與妊高征患者腎功能損害的關系 腎功能異常組血清miR-650水平和ACR明顯高于腎功能正常組(P<0.05)，而血清miR-19b1水平明顯低于腎功能正常組(P<0.05)。見表3。

表3 血清miR-650、miR-19b1水平和ACR與妊高征患者腎功能損害的關系

2.4妊高征患者血清miR-650、miR-19b1、ACR間的相關性分析 妊高征患者血清miR-650水平(r=-0.684，P<0.05)和ACR(r=-0.752，P<0.05)與miR-19b1呈負相關，而血清miR-650水平與ACR呈正相關(r=0.717，P<0.05)。

2.5血清miR-650、miR-19b1和ACR預測妊高征患者腎功能損害的效能 根據是否發生腎功能損害將血清miR-650、miR-19b1和ACR進行二元Logistic回歸，得到方程Y=1.086×XmiR-650-1.554×XmiR-19b1+0.031×XACR-5.776。聯合檢測3項指標預測妊高征患者發生腎功能損害的靈敏度為91.2%，特異度為81.2%，其曲線下面積(AUC)為0.926，高于miR-650(Z=2.867，P<0.05)，miR-19b1(Z=2.369，P<0.05)和ACR(Z=2.419，P<0.05)，而miR-650、miR-19b1和ACR的AUC比較，差異無統計學意義(P>0.05)。見表4、圖1。

表4 血清miR-650、miR-19b1和ACR預測妊高征患者腎功能損害的效能

圖1 血清miR-650、miR-19b1和ACR預測妊高征患者腎功能損害的ROC曲線

3 討 論

妊高征多發生于妊娠中晚期，病理生理表現為全身小動脈的痙攣，導致動脈管腔變窄，外周血管阻力增高，引起血管內皮細胞受損，血管的通透性增加，蛋白滲漏。內皮細胞功能受損常常會導致多個器官的損害，其中以腎功能損害最為常見[5-6]。腎臟出現損害往往表現為腎小球和腎小管基底膜明顯增厚，引起間質纖維化，導致腎小球濾過功能受到損害，出現蛋白尿。24 h尿蛋白是反映尿蛋白水平的金標準，但尿液收集時間較長，影響因素較多，對尿蛋白含量的測定有一定的影響。ACR既可以避免標本收集時間太長的影響，又能有效反映24 h尿蛋白的水平，已經逐漸成為腎功能損害的監測指標[7]。本研究結果顯示，妊高征組患者ACR明顯高于健康妊娠組和健康對照組，并且隨著妊高征嚴重程度的升高，ACR出現明顯升高，與既往研究報道結果一致[8]。本研究結果顯示，妊高征腎功能異常的患者ACR高于腎功能正常患者，并且發現當ACR>132.58 mg/mmol時，其靈敏度為67.6%，特異度為89.6%，AUC為0.839，說明ACR對妊高征患者發生腎功損害具有較高的預測價值，與文獻[9]報道的結果一致。ACR作為一種反映尿蛋白水平的指標，具有操作簡單、方便和依從性好等特點，但ACR主要反映腎小球的受損情況，易受患者飲食、年齡、體內蛋白代謝的影響，同時還受血流動力學的影響，故ACR作為早期診斷妊高征患者發生腎功能損害的指標有一定的不足。

微小核糖核酸在妊娠過程中的表達譜出現明顯變化，其很可能參與了妊娠的生理過程，在妊高征的患者中，微小核糖核酸同樣出現了相應的變化。本研究結果表明,妊高征患者血清miR-650水平明顯高于健康妊娠組和健康對照組，并且健康妊娠組患者血清miR-650水平高于健康對照組，說明miR-650參與了妊高征的發生、發展過程。本研究結果還顯示,妊高征患者血清miR-650水平隨著疾病嚴重程度的升高而升高，說明血清miR-650水平能夠反映妊高征的嚴重程度。miR-650在多種腫瘤中呈高表達，主要表現為促癌，如miR-650在非小細胞肺癌和前列腺癌中呈高表達，而下調miR-650表達對前列腺癌發生具有明顯的抑制作用[10-12]。現有研究證實，miR-650在結直腸癌中呈高表達，抑制miR-650表達后能夠明顯降低癌細胞的增殖速度[13]。目前，miR-650水平的變化是否與妊高征有關的相關報道較少。本研究結果顯示，當miR-650>2.86時，其預測妊高征患者發生腎功能損害具有較高的診斷效能，靈敏度為73.5%，特異度為78.1%，AUC為0.820，說明miR-650參與妊高征的病理生理過程，對妊高征患者發生腎功能損害具有較高的預測價值。

本研究發現妊高征患者血清miR-19b1水平明顯低于健康妊娠組和健康對照組，并且發現miR-19b1水平隨著妊高征嚴重程度的升高而降低，說明血清miR-19b1水平能夠反映妊高征的嚴重程度。現已知miR-19b1在肝癌、腎癌、非小細胞肺癌和乳腺癌等癌癥中均出現異常表達[14]，在乳腺癌和腎癌的研究中，miR-19b1為促癌基因，具有促進癌細胞增殖和抑制凋亡作用[15-16]，而在非小細胞肺癌中，miR-19b1表現為抑癌基因[17]。在胰腺炎和胰腺癌的鑒別診斷中，血清miR-19b1的診斷價值與糖類抗原(CA)199相當[18]。而其在妊娠和病理妊娠方面的研究較少，本研究發現當血清miR-19b1≤1.11時，其預測妊高征患者發生腎功能損害的靈敏度為94.1%，特異度為76.0%，AUC為0.842，說明血清miR-19b1對妊高征患者發生腎功能損害具有較高的預測價值。本研究結果顯示，妊高征患者血清miR-650和ACR與miR-19b1呈負相關，而血清miR-650水平與ACR呈正相關，3項指標聯合檢測能夠明顯提高預測妊高征患者發生腎功能損害的效能，聯合檢測的靈敏度91.2%，特異度為81.2%，AUC為0.926，均高于單個指標檢測，說明3項指標之間存在一定相關性，其具體機制需要進一步研究。

綜上所述，血清miR-650、miR-19b1和ACR在預測妊高征腎功能損害中具有較高的效能，聯合檢測有助于提高預測的靈敏度和特異度。