熒光定量PCR檢測技術在動物檢疫中的應用進展

李 波，蔣慧嫻，楊 瑾，任志彬，商建成

（1.廊坊海關，河北廊坊 065000；2.張家口海關，河北張家口 075000；3邯鄲海關，河北邯鄲 056000）

常規PCR技術在應用過程中暴露出了許多的問題，如假陽性、環境污染問題等，這些問題的存在限制了PCR技術的進一步應用。而熒光定量PCR檢測技術是當前社會最常用的動物檢疫的方法，它本身是很難被替代的，科研人員需嘗試找到并解決熒光定量PCR檢測技術中存在的缺陷，并進行研究，將熒光定量PCR技術應用到了生物、食品等領域，尤其是在動物檢疫方面，本文將具體闡述熒光定量PCR檢測技術及其在動物檢疫中的應用[2]。

1 熒光定量PCR檢測技術簡介

熒光定量PCR技術是將熒光基團加入到PCR反應體系中，并在實驗過程中，通過對熒光信號積累實時檢測整個PCR反應的進程[3]。最后，根據得到的標準曲線對未知的模板進行定量的分析。這一新的檢測技術實現了定量檢測的目的，比常規PCR技術的運用更加廣泛，廣大科研人員需要重視這一檢測技術在動物檢疫中的運用，為動物檢疫工作提供新的檢測思路和方法，為人們提供更加安全無害的食品。

目前，常見的熒光定量PCR技術有TapMan技術、Amplisensor技術、分子信標技術、LightCycler技術以及復合探針定量PCR技術。其中，TapMan技術被廣泛運用到了基因的定量檢測中，在熒光定量PCR技術市場中占據著重要的位置，這項技術所運用的原理是Tap酶的5'外切酶的活性。Amplisensor技術是基于復合探針技術的熒光定量PCR技術，這一技術增加了操作步驟，還可能會產生污染，具有一定的局限性。分子信標技術建立的原理是基于熒光共振能量轉移原理，可以對擴增得到的產物進行定量檢測，而且還能夠避免交叉污染。Lightcycler技術是Roche公司開發的一種新的熒光定量PCR技術，它需要合成兩個比較長的探針，成本較高。復合探針定量PCR技術需要合成兩個探針，一個是熒光探針，另一個是淬滅探針。新型的熒光定量PCR檢測技術的成本較低，檢測比較快速，并且具有高效性，克服了LightCycler技術和分子信標技術等技術中的不足之處，在原有基礎上進行了創新，通過解決原有技術上的短板，成為一種更為先進的技術。熒光定量PCR檢測技術相較于傳統PCR檢測方式具有非常廣泛的應用前景。

2 熒光定量PCR檢測技術優勢

與常規PCR技術相比，熒光定量PCR檢測技術能夠進行定量分析，而且具有更強的靈敏性以及特異性，還有效解決了常規PCR技術污染性較大的問題。另外，熒光定量PCR檢測技術還具有能進行多重反應、準確性較高等優點[4]。這種全新的熒光定量PCR檢測技術能夠在一定程度上取代傳統檢測技術，保障人們身體健康安全。隨著生活水平的提高，人們在選擇食品的時不僅關心價格，還更加注重安全。而肉類是人們生活中必不可缺的營養物質，熒光定量PCR檢測技術其相較于常規PCR技術有較大的進步和顯著的優勢，這一檢測技術在動物檢疫領域的應用非常廣泛，并取得了明顯的成效。

3 熒光定量PCR檢測技術應用

在動物檢疫工作中，其中一項工作是檢測金黃色葡萄球菌，但是傳統的生化檢測方法需要耗費許多的時間，而且靈敏度也不高，不能達到快速檢測的目的。為了解決上述問題，科研人員運用熒光定量PCR技術進行了快速檢測。如唐吉思等運用熒光定量PCR檢測了牛乳中金黃色葡萄球菌腸毒素A基因。在研究過程中，建立了金黃色葡萄球菌腸毒素A基因DNA的SYBR GreenⅠreal-time PCR檢測方法。結果顯示這一檢測方法的特異性較好，為檢測牛乳中金黃色葡萄球菌提供了新的檢測方法。另外，熒光定量PCR檢測技術也可以用來檢測炭疽桿菌、大腸桿菌O157∶H7、沙門氏菌等多種細菌。如杜清春等運用熒光定量PCR檢測技術建立了一種快速檢測炭疽桿菌的方法，在炭疽桿菌感染初期篩查中可有效運用。

熒光定量PCR檢測技術也可以用來檢測病毒，如豬瘟病毒、豬水皰病病毒、口蹄疫病毒等。如胡騎等為了建立一種可以快速、準確檢測O型口蹄疫病毒的TaqMan熒光定量PCR方法，設計了特異性引物和TaqMan探針，并建立了標準曲線，最終結果顯示，這一檢測方法比傳統熒光定量PCR檢測技術靈敏10倍以上，能夠更加快速、準確地檢測出O型口蹄疫病毒。Hui-Hua Zheng等運用熒光定量PCR同時檢測了豬瘟病毒和豬圓環病毒3型。結果表明，這一檢測方法的線性度、重復性和再現性都比較高，是檢測豬瘟病毒和豬圓環病毒3型的可靠方法。

4 結語

運用熒光定量PCR檢測技術開展動物檢疫工作是非常有效的，科研人員需對熒光定量PCR檢測技術進行深入的研究，并要將其廣泛運用到動物檢疫工作中，從而能夠確保食品的安全性[5]。熒光定量PCR檢測技術的出現可提高食品安全水平，肉類是人們生活中的必需品，人們生活水平的提高也讓人們不僅重視價格，更重視食品安全和營養價值。隨著互聯網信息時代的到來，任何細微的問題都可以通過信息得知并被不斷放大，而肉類的主要來源是各種家畜，動物檢疫工作需要更加嚴謹，熒光定量PCR檢測技術的出現可有效解決此問題，通過對傳統PCR檢測技術的改進，保障肉類食品的安全，推動食品行業穩定發展。