痰GeneXpert MTB/RIF在涂陰活動性肺結核診斷中的價值分析

謝 丹，李 強，吳文恩

（中山市第二人民醫院呼吸感染科，廣東中山 528447）

結核病為國際關注的重點公共衛生問題，而我國為結核病高發區，防治形勢嚴峻。目前臨床治療結核病主要依賴痰涂片抗酸染色結核臨床放射影像學、痰結核分枝桿菌（MTB）培養等傳統實驗室檢驗方法，但以上方法均存在不同的缺陷，如痰涂片抗酸染色，雖然成本低、耗時短，但檢測敏感度差，難以通過影像學表現出結核患者的特異性，且需耗費長時間展開耐藥檢測，易錯過最佳診治時機；而MTB培養中的高污染問題難以得到解決[1-2]。因而，亟需一種高效、準確的肺結核診斷與檢測MTB耐藥性的實驗方法。痰GeneXpert MTB/RIF具有操作方便、簡單、靈敏度高的優勢，早在2010年便被世界衛生組織（WTO）推薦為檢測結核病和耐利福平結核病的方法，但在引入國內后，相關報道較少，對于其在國內的適用性仍缺少系統評價[3]。為此，本研究展開對于痰GeneXpert MTB/RIF在涂陰活動性肺結核診斷中的臨床價值的討論，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2020年5月至2021年4月間中山市第二人民醫院接收的47例涂陰活動性肺結核患者作為本次研究對象，采用前瞻性研究，其中男性患者26例，女性患者21例；男性患者年齡21～72歲，平均（39.46±7.85）歲；女性患者年齡19～76歲，平均（41.83±6.77）歲。納入標準：3次痰涂片均為陰性者；經胸部影像學檢查顯示為活動性肺結核且存在可疑癥狀（咳嗽、咳痰、咯血）者；結核菌素實驗為強陽性、或抗結核抗體檢查為陽性、或肺外組織病理檢查證實為結核病變者、或疑似肺結核病例者等。排除標準：存在精神疾病者；合并心肝腎功能不全者；合并惡性腫瘤疾病者；合并其他重大感染、傳染類疾病者等。本研究已經院內醫學倫理委員會審核批準，且患者均簽署知情同意書。

1.2 研究方法 痰標本的采集：即時痰為患者就診時留取的痰液，清晨痰為清晨起床后，在清水漱口后留取的痰液，夜間痰為留取清晨痰前1 d傍晚至睡前咳出的痰液；痰量以3～5 mL為宜。并對痰標本進行痰常規檢查，若痰液不合格者，則重新采集送檢。

1.2.1 痰MTB培養檢測 采用萋 - 尼氏染色鏡檢抗酸桿菌，并進行金標準痰液分離培養，按《中國結核病防治規劃痰涂片鏡檢標準化操作及質量保證手冊》[4]中的要求進行；取1 mL痰液進行分枝桿菌分離培養，具體方式按照《分枝桿菌分離培養標準化操作程序及質量保證手冊》[5]要求進行。酸性羅氏培養基斜面有MTB菌落生長則為陽性，未見MTB菌落生長則為陰性。

1.2.2 比例法藥敏實驗檢測 將培養陽性MTB菌株采用微孔板比例法，嚴格按照《結核分枝桿菌藥物敏感性實驗標準化操作程序及質量保證手冊》[6]要求進行藥物敏感性實驗。

1.2.3 痰GeneXpert MTB/RlF檢測 在痰液標本中以1∶2的比例加入處理液，后將其放置于渦旋振蕩器中，旋渦式震蕩15～30 s后放置15 min。在反應盒中加入2 mL處理后的樣本，同時放入檢測模塊，2 h后進行檢測。MTB數量以MTB DNA拷貝的高低分為高、中、低、極低和未檢出5個量級。利福平檢測結果為敏感或耐藥。

1.3 觀察指標 ①比較不同檢測方法對結核分枝桿菌與利福平耐藥性的陽性檢出率，并分別以MTB培養與比例法藥物敏感性實驗為金標準。②分析不同性別患者痰GeneXpert MTB/RIF檢測MTB的診斷效能（敏感度、特異度、陽性預測值及陰性預測值）。敏感度=真陽性例數/（真陽性＋假陰性）例數×100%；特異度=真陰性例數/（真陰性＋假陽性）例數×100%；陽性預測值=真陽性例數/（真陽性＋假陽性）例數×100%；陰性預測值=真陰性例數/（真陰性+假陰性）例數×100%。③分析不同性別患者痰GeneXpert MTB/RIF檢測利福平耐藥的診斷效能（敏感度、特異度、陽性預測值及陰性預測值）。

1.4 統計學分析 應用SPSS 23.0統計軟件進行數據分析，計數資料以[ 例(%)]表示，采用χ2檢驗，多組間計數資料比較，采用χ2趨勢檢驗。以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 不同檢測方法對MTB檢出率與利福平耐藥性檢出率 痰GeneXpert MTB/RIF檢測MTB與利福平耐藥性檢出率和金標準（MTB培養檢驗、比例法藥物敏感性實驗）檢出率比較，差異均無統計學意義（χ2= 0.172、0.044，均P＞0.05），見表1。

表1 不同檢測方法對MTB與利福平耐藥性陽性檢出率比較[ 例(%)]

2.2 不同性別下痰GeneXpert MTB/RlF檢測MTB的診斷效能 男性患者痰GeneXpert MTB/RIF檢測MTB陽性15例、陰性11例。女性患者痰GeneXpert MTB/RIF檢測MTB陽性12例、陰性9例。不同性別患者采用痰GeneXpert MTB/RIF檢測MTB的敏感度、特異度、陽性預測值、陰性預測值比較，差異均無統計學意義（均P＞0.05），見表2、3。

表2 不同性別涂陰肺結核患者痰GeneXpert MTB/RlF檢測MTB結果（例）

2.3 不同性別下痰GeneXpert MTB/RlF檢測利福平耐藥的診斷效能 男性患者痰GeneXpert MTB/RIF利福平耐藥檢測陽性17例、陰性9例。女性患者痰GeneXpert MTB/RIF利福平耐藥檢測陽性11例、陰性10例。不同性別患者采用痰GeneXpert MTB/RIF檢測利福平耐藥的敏感度、特異度、陽性預測值、陰性預測值比較，差異均無統計學意義（均P＞0.05），見表4、5。

表4 不同性別涂陰肺結核患者痰GeneXpert MTB/RlF檢測利福平耐藥結果（例）

3 討論

目前，臨床將耐藥與診斷困難作為肺結核疾病發病率不斷升高的兩項重要原因，及早發現肺結核、準確診斷、科學給藥是控制疾病發展的關鍵，但臨床上常采用的涂片抗酸染色法、MTB培養等方法均存在或多或少的缺陷，如耗時長、數據采集難等，不能達到理想診斷效果[7]。

本次研究在探究痰GeneXpert MTB/RIF檢測效果中發現，與金標準MTB檢出率對比，痰GeneXpert MTB/RIF檢測檢出率較高且在不同性別患者中均實現較高的敏感度、特異度，在利福平耐藥檢測上檢出率同樣較高，且也在不同性別患者中實現了較高的敏感度與特異度。分析原因可知，GeneXpert系統為一種全自動一體化半巢式實時熒光定量PCR檢測系統，具備MTB培養與比例法藥物敏感性實驗的優勢，在基于樣品準備、DNA擴增及檢測3個步驟實現對樣品的全自動檢測，檢測過程中對光學高度敏感，可快速獲得檢測DNA序列結果，在臨床實踐中，90%以上的檢測結果均可當天獲取；同時，與傳統MTB檢測方法相比，痰GeneXpert MTB/RIF檢測法可有效規避雜菌的污染，提高檢測結果的精準性，因此，在縮短檢測時間的同時可提高檢測敏感度、準確性[8]。采用GeneXpert MTB/RIF檢測過程中，可自動對應低、中、高3個量級對不同樣本量進行分析，配合預處理實現菌量均勻分布，從而確保實際菌量與假陰性、陽性檢出結果相符合，便于臨床治療中清晰觀察療效。此外，有研究指出，在檢驗過程中GeneXpert系統將發現利福平耐藥菌的效率提高了3倍，痰GeneXpert MTB/RIF檢測法的技術性質決定了其能夠根據利福平耐藥核心區的rpoB基因81 bp進行引物與探針設計，檢測是否發生突變現象，獲得關于耐藥情況的準確檢測，也正是對這項結果的檢驗使涂陰活動性肺結核患者化療治療平均時間降低14倍，有效增強治療效果[9]。陳潔等[10]研究中比較了涂片抗酸染色、羅氏培養檢測及痰GeneXpert MTB/RIF檢測3種方法在肺結核診斷中的應用效果，結果顯示，痰GeneXpert MTB/RIF檢測將傳統檢測方法的優勢集于一體，操作更加簡單、快速，應用于肺結核早期診斷中優越性更加明顯。

表3 不同性別涂陰肺結核患者痰GeneXpert MTB/RlF檢測MTB的診斷效能比較（%）

表5 不同性別涂陰肺結核患者痰GeneXpert MTB/RlF檢測利福平耐藥的診斷效能比較（%）

綜上，痰GeneXpert MTB/RIF在涂陰活動性肺結核檢測中優勢顯著，對于結核分枝桿菌與利福平耐藥性陽性檢出率均較高且不受性別限制，具有較高的敏感度與特異度，可進一步推廣于臨床。