蘋果脫毒苗組培快繁技術

李元鵬 張英杰 張京偉 郭文姣 劉學慶 孫紀霞*

（1煙臺大學生命科學學院，煙臺 264005；2山東省煙臺市農業科學研究院，煙臺 265500）

在影響蘋果產量、品質和商品率的諸多因素中，蘋果病毒病是重要原因之一[1]，制約了蘋果產業的發展[2]。全球的蘋果病毒有40多種，且多為復合感染，目前尚無防治蘋果病毒病的有效藥劑，生產上應用脫毒苗木是最有效的方法。國內科研院所已通過莖尖法和微體嫁接法獲得了富士、嘎拉等蘋果品種的脫毒原種苗，并建立了脫毒蘋果品種保存圃。從脫毒苗保存圃剪取接穗，通過組織培養進行快速繁育，可在短時間內獲得大量脫毒種苗，現將脫毒苗組培快繁技術介紹如下。

1 初代培養

當脫毒品種1年生枝條新生芽長至2 cm左右時將其剪下，除去展開的新生葉片，置于流動的自來水下沖洗7 h，用75%(V/V)的酒精浸泡8 s，然后用0.1%的氯化汞（HgCl2）消毒處理10 min，最后用無菌水沖洗5次。將消毒后的莖尖接種到滅菌后的培養基上，配方為2/3MS+0.5 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA+30 g/L蔗糖+6 g/L瓊脂 （可再加500 mg/L PVP降低污染率），pH調至5.8后分裝到潔凈的培養瓶中，每瓶約50 mL。然后在121℃的高壓滅菌鍋中滅菌25 min。滅菌完成后，待培養基凝固，在超凈工作臺上接種莖尖，每瓶接種3～5個。接種完成后，置于溫度 26 ℃、光強 35 μmol·m-2·s-1、光照14 h/d的條件下培養15 d，期間除去褐化和污染的莖尖。

2 繼代培養

將初代培養獲得的生長良好的莖尖接種到MS+0.6 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA+30 g/L蔗糖+6 g/L瓊脂，pH為5.8的繼代培養基上，參照初代培養的操作分裝、滅菌。然后在超凈工作臺上接種，每瓶接種3株，培養環境與初代培養一致。若需獲得較多數量的不定芽，可以適當縮短光照時間[3]。

3 生根培養

選取生長健壯、株高3 cm左右的繼代培養植株，接種在1/2 MS+0.25 mg/L IBA+20 g/L蔗糖+6.8 g/L瓊脂，pH為5.8的的生根培養基上，每瓶接種3株，培養環境與初代培養一致。

4 煉苗及移栽

組培苗根系長度大于2 cm后，在使用60%遮陰網遮陰的溫室內，保持溫度20～25℃、相對濕度60%左右，煉苗10 d。然后打開瓶口，自然光下煉苗5 d。將附著在組培苗根部的培養基和雜質清洗干凈，用百菌清浸泡10 min，再用流水沖洗4 min，最后栽種在基質組成為蛭石∶草炭∶營養土為 2∶2∶1的苗床上。 移栽后7 d噴0.1%百菌靈，后期正常管理，30 d后統計成活情況。對于移栽后不易成活的品種，可采用水培煉苗，即將洗凈的株系置于含1／2霍格蘭德營養液的瓶中，自然光下帶瓶蓋煉苗2周，然后揭開瓶蓋置于全營養液的瓶中，每周更換1次營養液，自然光下煉苗5周后移栽。