腺相關病毒載體優化的研究進展

翟貫星（綜述） 傅衛輝 徐建青 張曉燕（審校）

（復旦大學附屬公共衛生臨床中心 上海 201508）

腺相關病毒（adeno-associated virus，AAV）是感染人和一些其他靈長類動物的小型（20 nm）復制缺陷的非包膜病毒，屬于細小病毒科（Parvoviridae）。AAV 依賴與其他病毒（主要是腺病毒）共同感染進行復制，最初在腺病毒制劑的污染物中被發現，并因此得名[1-2］。 AAV 有9 種常見血清型（AAV 1～9），還 存 在AAV10、AAV-DJ、AAV-DJ/8 等血清型。AAV 基因組包含兩個開放閱讀框：Rep 與Cap（圖1）。AAV 病毒缺乏明顯的致病性，目前尚不清楚AAV 是否會引起疾病，但會引起非常溫和的免疫反應。

圖1 AAV 基因組Fig 1 Viral genome of AAV

AAV 能夠同時感染分裂和靜止期的細胞。AAV 載體基因組可以作為附加體存在于細胞內，在各種實驗環境中也觀察到了載體整合。某些情況下，整合對于AAV 載體的治療或實驗效果至關重要[3］，AAV 具有在人類19 號染色體上特定位點（稱為AAVS1）穩定整合到宿主細胞基因組中的能力[4-5］。AAV 穩定整合的特點使其比逆轉錄病毒更具可預測性。不同血清型的AAV 病毒也具有不同的組織親和性[6］。AAV 作為基因治療載體，通過在載體上移除Rep與Cap消除其整合能力，所需基因與啟動子一起插入反向末端重復序列（inverted terminal repeat，ITR）之間，該序列有助于單鏈載體DNA 被宿主細胞DNA 聚合酶復合物轉化為雙鏈后在細胞核中形成串聯體[7］。在未分裂細胞中，這些串聯體在宿主細胞生命周期中保持完整；在分裂細胞中，游離DNA 不隨宿主細胞DNA 復制，AAV 的DNA通過細胞分裂而丟失[8］。AAV 的DNA 隨 機整合到基因組的發生頻率很低[8］。AAV 具有非常低的免疫原性，僅限于中和抗體的產生，而不會誘導細胞毒性反應[9-11］。……