高效液相色譜-串聯(lián)質譜法測定植物源性 食品中氯吡脲殘留量

方亞莉，李 越

（山西省食品藥品檢驗所，山西太原 030031）

氯吡脲，一般指氯吡苯脲，別稱膨果龍，是一種有機化合物，用作植物生長調節(jié)劑[1]，具有細胞分裂素活性，能促進細胞分裂、分化、器官形成，蛋白質合成，提高光合作用等，其生物活性較6-芐氨基嘌呤高10～100倍，能夠影響植物芽的發(fā)育、加速細胞有絲分裂、促進細胞增大和分化，防止果實和花的脫落，被廣泛用于農(nóng)業(yè)、園藝與果樹，促進植物生長、早熟、延緩作物后期葉片的衰老、增加產(chǎn)量。然而，氯吡脲的使用有一定的技術要求，正常使用條件下，可以促進果實增大、早熟、提高產(chǎn)量，如果過量使用或使用時期不當，可以引起果實畸形、裂果、掉果等藥害現(xiàn)象。目前，氯吡脲的檢測方法有液相色譜法[2]、液相色譜-串聯(lián)質譜法[3]，后者靈敏度高，檢出限低[4]。本研究選取橙子為試驗材料，采用隨行回收試驗，參照《食品安全國家標準 植物源性食品中氯吡脲殘留量的測定 液相色譜-質譜聯(lián)用法》 （GB 23200.110—2018）[5]，采用外標法定量，建立了橙子中氯吡脲殘留量檢測的高效液相色譜-串聯(lián)質譜法（LC-MS/MS）。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

橙子（購自某超市）；氯吡脲（BePure，批號：C0008732， 含量：999.7 μg/mL）；乙腈為色譜純；4 g無水硫酸鎂和1 g氯化鈉試劑包；50 mgPSA和150 mg無水硫酸鎂試劑包；實驗室一級超純水。

1.2 儀器與設備

8050液相色譜－質譜串聯(lián)儀（日本島津）；電子天平（美國奧豪斯，精密度0.001 g）；粉碎機（德國萊馳）；渦旋混合器（德國ZKA）；離心機（安徽中科中佳科學儀器公司）等。

1.3 試樣提取方法及凈化

稱取試樣10 g（精確到0.01 g），置于50 mL離心管中，加入10 mL乙腈，渦旋振蕩提取3 min，向離心管中加入 4 g無水硫酸鎂和1 g氯化鈉，渦旋1 min；然后4 000 r/min離心5 min，取1.5 mL上清液待凈化。將1.5 mL試樣上清液放入裝有50 mg PSA和150 mg無水硫酸鎂的2 mL離心管中，渦旋30 s，5 000 r/min離心5 min，取上清液過有機系濾膜，供液相色譜－串聯(lián)質譜儀檢測。

1.4 標準溶液及工作曲線配制

1.4.1 標準儲備溶液

準確吸取1.0 mL氯吡脲標準溶液，用乙腈溶解并定容至10 mL棕色容量瓶中，配制成濃度為99.97 μg/mL的氯吡脲標準儲備液。

1.4.2 標準工作溶液

準確吸取0.1 mL氯吡脲標準儲備液，用乙腈溶解并定容至10 mL棕色容量瓶中，配制成濃度為0.999 7 μg/mL的氯吡脲標準工作中間液。

1.4.3 基質標準工作系列的制備

稱取陰性空白基質樣品約10 g，按照1.3操作步驟提取、凈化制備。分別吸取氯吡脲標準工作中間液0 mL、0.01 mL、 0.05 mL、0.10 mL、0.20 mL和0.40 mL，用空白樣品基質溶液定容至1 mL，配制成系列標準溶液濃度分別為0 μg/mL、0.009 997 μg/mL、0.049 985 μg/mL、0.099 970 μg/mL、 0.199 940 μg/mL和0.399 880 μg/mL。

1.5 液相色譜-質譜條件

1.5.1 液相條件

色譜柱：YMC C18（1.9 μm，150 mm×2.1 mm）；柱溫：45 ℃；流速：0.2 mL/min；進樣量：10 μL；流動相：乙腈+0.2%甲酸溶液。梯度洗脫程序見表1。

表1 流動相梯度洗脫程序

1.5.2 質譜條件

離子源類型：ESI；離子源溫度：300 ℃；霧化器流速：3.0 mL/min；干燥氣流速：10 mL/min；掃描方式：正離子；掃描模式：MRM。質譜參數(shù)：Q1（m/z）：248；Q3（m/z）：129（定量）/93；碰撞能量CE（V）：16/34。

2 結果與分析

2.1 線性關系及檢出限

將配制的基質標準工作系列在1.5的儀器條件下測定，以標準系列溶液濃度為橫坐標，以目標物相應濃度點測得的峰面積為縱坐標，繪制標準曲線，得線性方程y=1.285 81×107x+21 392.6，相關系數(shù)R2=0.999 8，線性關系良好。根據(jù)10倍信噪比的峰響應值為定量限，得該方法定量限為0.01 mg/kg，滿足國家食品安全監(jiān)督抽檢植物源性食品中氯吡脲殘留量的要求。

2.2 方法回收率與重復性

取陰性樣品，添加定量限、限量值、10倍定量限3個濃度水平的氯吡脲標準溶液進行加標回收試驗，其余處理過程同1.3操作步驟中供試品溶液制備，每個濃度平行測定6次，計算加標回收率和重復性RSD，結果見表2。

表2 橙子加標回收率及精密度試驗結果

2.3 精密度與穩(wěn)定性試驗

選用濃度為0.049 985 μg/mL的橙子基質標準工作液連續(xù)進樣6次，記錄氯吡脲的峰面積，計算精密度得RSD為0.34%，符合《液相色譜-質譜聯(lián)用儀校準規(guī)范》 （JJF 1317-2011）[6]規(guī)定精密度RSD＜10%的要求。選用濃度為0.099 97 μg/mL的橙子基質標準工作液連續(xù)24 h重復上機測定，每隔4 h選取一組數(shù)據(jù)記錄峰面積，考察其穩(wěn)定性，計算RSD為5.27%，表明該方法穩(wěn)定性良好。

3 結論

本研究參照GB 23200.110—2018，建立了LC-MS/MS法測定橙子中氯吡脲殘留量的方法，該方法線性關系良好，重復性、回收率、精密度、穩(wěn)定性等符合相關標準要求，能夠滿足實驗室對橙子中氯吡脲殘留檢測的需求，可為食品檢驗檢測機構開展植物源性食品中氯吡脲殘留檢測提供參考。