高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定植物源性 食品中氯吡脲殘留量

方亞莉，李 越

（山西省食品藥品檢驗(yàn)所，山西太原 030031）

氯吡脲，一般指氯吡苯脲，別稱膨果龍，是一種有機(jī)化合物，用作植物生長調(diào)節(jié)劑[1]，具有細(xì)胞分裂素活性，能促進(jìn)細(xì)胞分裂、分化、器官形成，蛋白質(zhì)合成，提高光合作用等，其生物活性較6-芐氨基嘌呤高10～100倍，能夠影響植物芽的發(fā)育、加速細(xì)胞有絲分裂、促進(jìn)細(xì)胞增大和分化，防止果實(shí)和花的脫落，被廣泛用于農(nóng)業(yè)、園藝與果樹，促進(jìn)植物生長、早熟、延緩作物后期葉片的衰老、增加產(chǎn)量。然而，氯吡脲的使用有一定的技術(shù)要求，正常使用條件下，可以促進(jìn)果實(shí)增大、早熟、提高產(chǎn)量，如果過量使用或使用時(shí)期不當(dāng)，可以引起果實(shí)畸形、裂果、掉果等藥害現(xiàn)象。目前，氯吡脲的檢測(cè)方法有液相色譜法[2]、液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法[3]，后者靈敏度高，檢出限低[4]。本研究選取橙子為試驗(yàn)材料，采用隨行回收試驗(yàn)，參照《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 植物源性食品中氯吡脲殘留量的測(cè)定 液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法》 （GB 23200.110—2018）[5]，采用外標(biāo)法定量，建立了橙子中氯吡脲殘留量檢測(cè)的高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法（LC-MS/MS）。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

橙子（購自某超市）；氯吡脲（BePure，批號(hào)：C0008732， 含量：999.7 μg/mL）；乙腈為色譜純；4 g無水硫酸鎂和1 g氯化鈉試劑包；50 mgPSA和150 mg無水硫酸鎂試劑包；實(shí)驗(yàn)室一級(jí)超純水。

1.2 儀器與設(shè)備

8050液相色譜－質(zhì)譜串聯(lián)儀（日本島津）；電子天平（美國奧豪斯，精密度0.001 g）；粉碎機(jī)（德國萊馳）；渦旋混合器（德國ZKA）；離心機(jī)（安徽中科中佳科學(xué)儀器公司）等。

1.3 試樣提取方法及凈化

稱取試樣10 g（精確到0.01 g），置于50 mL離心管中，加入10 mL乙腈，渦旋振蕩提取3 min，向離心管中加入 4 g無水硫酸鎂和1 g氯化鈉，渦旋1 min；然后4 000 r/min離心5 min，取1.5 mL上清液待凈化。將1.5 mL試樣上清液放入裝有50 mg PSA和150 mg無水硫酸鎂的2 mL離心管中，渦旋30 s，5 000 r/min離心5 min，取上清液過有機(jī)系濾膜，供液相色譜－串聯(lián)質(zhì)譜儀檢測(cè)。

1.4 標(biāo)準(zhǔn)溶液及工作曲線配制

1.4.1 標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液

準(zhǔn)確吸取1.0 mL氯吡脲標(biāo)準(zhǔn)溶液，用乙腈溶解并定容至10 mL棕色容量瓶中，配制成濃度為99.97 μg/mL的氯吡脲標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。

1.4.2 標(biāo)準(zhǔn)工作溶液

準(zhǔn)確吸取0.1 mL氯吡脲標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，用乙腈溶解并定容至10 mL棕色容量瓶中，配制成濃度為0.999 7 μg/mL的氯吡脲標(biāo)準(zhǔn)工作中間液。

1.4.3 基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)工作系列的制備

稱取陰性空白基質(zhì)樣品約10 g，按照1.3操作步驟提取、凈化制備。分別吸取氯吡脲標(biāo)準(zhǔn)工作中間液0 mL、0.01 mL、 0.05 mL、0.10 mL、0.20 mL和0.40 mL，用空白樣品基質(zhì)溶液定容至1 mL，配制成系列標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度分別為0 μg/mL、0.009 997 μg/mL、0.049 985 μg/mL、0.099 970 μg/mL、 0.199 940 μg/mL和0.399 880 μg/mL。

1.5 液相色譜-質(zhì)譜條件

1.5.1 液相條件

色譜柱：YMC C18（1.9 μm，150 mm×2.1 mm）；柱溫：45 ℃；流速：0.2 mL/min；進(jìn)樣量：10 μL；流動(dòng)相：乙腈+0.2%甲酸溶液。梯度洗脫程序見表1。

表1 流動(dòng)相梯度洗脫程序

1.5.2 質(zhì)譜條件

離子源類型：ESI；離子源溫度：300 ℃；霧化器流速：3.0 mL/min；干燥氣流速：10 mL/min；掃描方式：正離子；掃描模式：MRM。質(zhì)譜參數(shù)：Q1（m/z）：248；Q3（m/z）：129（定量）/93；碰撞能量CE（V）：16/34。

2 結(jié)果與分析

2.1 線性關(guān)系及檢出限

將配制的基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)工作系列在1.5的儀器條件下測(cè)定，以標(biāo)準(zhǔn)系列溶液濃度為橫坐標(biāo)，以目標(biāo)物相應(yīng)濃度點(diǎn)測(cè)得的峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得線性方程y=1.285 81×107x+21 392.6，相關(guān)系數(shù)R2=0.999 8，線性關(guān)系良好。根據(jù)10倍信噪比的峰響應(yīng)值為定量限，得該方法定量限為0.01 mg/kg，滿足國家食品安全監(jiān)督抽檢植物源性食品中氯吡脲殘留量的要求。

2.2 方法回收率與重復(fù)性

取陰性樣品，添加定量限、限量值、10倍定量限3個(gè)濃度水平的氯吡脲標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行加標(biāo)回收試驗(yàn)，其余處理過程同1.3操作步驟中供試品溶液制備，每個(gè)濃度平行測(cè)定6次，計(jì)算加標(biāo)回收率和重復(fù)性RSD，結(jié)果見表2。

表2 橙子加標(biāo)回收率及精密度試驗(yàn)結(jié)果

2.3 精密度與穩(wěn)定性試驗(yàn)

選用濃度為0.049 985 μg/mL的橙子基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)工作液連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄氯吡脲的峰面積，計(jì)算精密度得RSD為0.34%，符合《液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀校準(zhǔn)規(guī)范》 （JJF 1317-2011）[6]規(guī)定精密度RSD＜10%的要求。選用濃度為0.099 97 μg/mL的橙子基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)工作液連續(xù)24 h重復(fù)上機(jī)測(cè)定，每隔4 h選取一組數(shù)據(jù)記錄峰面積，考察其穩(wěn)定性，計(jì)算RSD為5.27%，表明該方法穩(wěn)定性良好。

3 結(jié)論

本研究參照GB 23200.110—2018，建立了LC-MS/MS法測(cè)定橙子中氯吡脲殘留量的方法，該方法線性關(guān)系良好，重復(fù)性、回收率、精密度、穩(wěn)定性等符合相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)要求，能夠滿足實(shí)驗(yàn)室對(duì)橙子中氯吡脲殘留檢測(cè)的需求，可為食品檢驗(yàn)檢測(cè)機(jī)構(gòu)開展植物源性食品中氯吡脲殘留檢測(cè)提供參考。