HPLC測定碗托中脫氫乙酸含量的方法優化

王攀峰，薛曉偉，路亞靜

（1.山西省檢驗檢測中心(山西省標準計量技術研究院），山西太原 030032； 2.山西省科技資源與大型儀器開放共享中心，山西太原 030006)

民以食為天，食品安全問題一直備受關注，尤其是防腐劑的超標使用。脫氫乙酸及其鈉鹽，作為常用食品防腐劑代表，被廣泛應用于各類食品中。它在食物中的起效成分為脫氫乙酸DHA，別名“脫氫醋酸”，常溫為晶型粉末且難溶于水，故常以鈉鹽形態流通和使用[1]。但是，近年來脫氫乙酸的安全性受到了質疑，因為它可以很快地被人體吸收，然后迅速地分散在血液中，存在于各種器官中，并且抑制氧化酶，過量會危害人體健康[2]。在GB 2760—2014[3]中也對各類食品中的脫氫乙酸的添加量作了明確規定，以淀粉制品為例，脫氫乙酸及其鈉鹽作為食品添加劑使用時，其最大使用量以脫氫乙酸計，為1 000 mg/kg。

1 碗托中脫氫乙酸的使用現狀

味道鮮美、滑潤涼爽的碗托受到人們的最愛，它作為具有地方特色的即食類風味食品，在山西省具有廣泛的消費群體。特別是在夏季，銷售涼皮、碗托的攤點遍布街頭巷尾。目前市場對于此類產品的供應以小作坊、小加工點為主，這類企業在預防微生物污染和產品儲運條件上很難滿足規定的要求，為了延長產品保質期，部分廠家采取了在產品中添加脫氫乙酸的方式。它的毒性很低，同時可以抑制多種細菌的繁衍，防腐效果是苯甲酸鈉的2～10倍。為了提高防腐效果，很多業者存在超限量使用和盲目使用的情況。為此，檢測碗托中脫氫乙酸的含量尤為重要。

檢測脫氫乙酸含量的方法有紫外分光光度法、氣相色譜法、高效液相色譜法及離子色譜法[4]。國標GB 5009.121—2016[5]中測定淀粉制品中脫氫乙酸含量的方法是氣相色譜法，此方法過程復雜，實際用時重復性差，測量結果不準確，所以行業內常常采用高效液相色譜法[6]。國標法對淀粉制品的前處理復雜，且有拖尾現象，分離度不好，影響了檢測的準確性和時效性。針對碗托的制作方法，本文對前處理過程和色譜條件進行了優化，并作了方法學驗證。經過優化后的檢測方法，能快速地檢測出碗托中脫氫乙酸的含量，以便在食品安全監管中廣泛應用。

2 材料與方法

2.1 儀器與試劑

熱電U3000 高效液相色譜儀（DAD檢測器）；梅特勒XS204 電子天平；梅特勒-托利多MS105DU 電子天平；HC-3018高速離心機；FLUKO均質器；KQ-500DE超聲波清洗器；IKA?MS3漩渦混合器；脫氫乙酸（曼哈格，純度100.0%），甲醇（色譜級，迪馬）、乙酸銨（優級純）；純化水。檢測器：DAD檢測器；波長：293 nm；色譜柱：熱電C18色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流速：1 mL/min；柱溫：30 ℃；進樣量：10 μL

2.2 實驗方法

稱取均質后的樣品2 g（精確至0.001 g）于50 mL的塑料離心管內，加入20 mL提取液（甲醇∶水=1∶1），混勻，超聲提取25 min，然后以4 000 r/min離心5 min，收集上清液并用水定容到25 mL，過0.45 μm濾膜過濾后供高效液相色譜儀測定。

3 結果與分析

3.1 流動相比例

結果表明，流動相中甲醇的比例影響脫氫乙酸與雜峰的分離系數及色譜峰的拖尾程度，甲醇比例越低，分離效果越好，且能改善拖尾現象，但出峰時問相應地延長，以甲醇∶0.02 mol/L乙酸銨（5∶95）為流動相效果 最佳色譜圖見圖1。

圖1 色譜圖

3.2 線性考察

精確稱取10.08 mg脫氫乙酸標準品于10 mL容量瓶中，用1 mL氫氧化鈉（20 g/L）溶解，用水定容，得濃度為 1.008 mg/mL脫氫乙酸標準儲備液，此液體在4 ℃冰箱中保存，有效期3個月。配制標曲溶液，過0.45 μm濾膜，進行液相色譜分析，記錄色譜峰面積，并繪制標準工作曲線得線性方程y=0.535x-0.023（r=0.999 9）。

3.3 檢出限確定

稱取樣品加入濃度為10.08 μg/mL的標液0.4 mL，按2.2方法處理上機測試，色譜峰高度大于3倍噪音，故碗托樣品中脫氫乙酸檢出限為0.002 g/kg。

3.4 精密度試驗

稱取樣品中回收試驗一份，連續測定6次，記錄峰面積，計算RSD值為0.45%詳見表1。

表1 精密度結果

3.5 回收率試驗

稱取碗托樣品9份，第1、2、3份加入脫氫乙酸標準工作液（1.008 μg/mL）1 mL，第4、5、6份加入脫氫乙酸標準儲備液（1.008 mg/mL）0.50 mL，第7、8、9份加入脫氫乙酸標準儲備液（1.008 mg/mL）1.0 mL。回收率符合國家標準《實驗室質量控制規范食品理化檢驗》（GB/T 27404—2008）附錄F要求，具體見表2。

表2 回收率測定結果

3.6 碗托樣品實際檢測結果分析

分別從生活周邊的流動性攤販、有固定門面的餐館和大型商超采購各類碗托各10批，并用此方法做了檢測。發現流動性攤販所售的碗托中脫氫乙酸超標使用的情況非常嚴重，不合格率超60%；其次是有固定門面的餐館自制的碗托，不合格率為20%；大型商超采購的10批樣品中脫氫乙酸的含量均符合規定。

4 結論

本試驗根據碗托的制作方法，對前處理過程和色譜條件進行了優化，并進行方法學驗證，均滿足相關要求，有利于日常檢驗工作的開展，為后續各類食品中的脫氫乙酸檢測方法的改進提供了新的思路。