高效液相色譜-串聯質譜法 測定雞肉中林可霉素殘留

王 祺，馬增輝，王莉佳，楊毅青

（山西省食品藥品檢驗所，山西太原 030031）

林可霉素是一種大環內酯類抗生素，價格低廉、抗菌能力強，可抑制細菌細胞的蛋白質合成[1]。飼料中添加林可霉素，可促進畜禽類動物的生長。為了保護消費者的健康，建立食品安全屏障，研究畜禽肉中林可霉素殘留檢測方法尤為重要。目前檢測方法有GC[2]、GC-MS[3]、LC-MS法[4]。GC法與GC-MS法檢出限高且需要衍生化反應，過程復雜；LC-MS法靈敏度高，檢出限低，但是用內標法定量，成本較高[5]。本研究選取代謝周期較短、林可霉素的殘留相對較多的雞肉為試驗材料，采用隨行回收試驗，參照 GB/T 20792—2006，采用外標法定量建立高效液相色譜-串聯質譜法檢測林可霉素殘留的方法。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

雞肉（購自某超市）；林可霉素（中國食品藥品檢定研究院，批號：130432，含量85.5%）；甲醇、乙腈、正己烷均為色譜純；甲酸銨、磷酸二氫鈉、氫氧化鈉、氯化鈉均為優級純；實驗室一級超純水。

1.2 儀器與設備

島津8050液相色譜-質譜串聯儀；粉碎機；渦旋混合器；離心機；氮氣濃縮儀；固相萃取裝置；OHAUS電子天平（精密度0.001 g）；PEP-2固相萃取柱（500 mg/6 mL）。

1.3 實驗方法

1.3.1 試樣提取方法及凈化

將樣品充分攪碎混勻，準確稱取試樣約5 g（精確至 0.01 g），置于50 mL離心管中，加入15.0 mL乙腈，于渦旋混合器上2 000 r/min振蕩10 min，以5 000 r/min的轉速離心5 min，取上清液于另一個離心管中，加入2.0 g氯化鈉和10.0 mL正己烷，2 000 r/min渦旋振蕩10 min，以 5 000 r/min的轉速離心10 min，吸取全部中間乙腈層于另一個離心管中用氮氣濃縮儀于55 ℃水浴中吹至近干。

用7 mL磷酸鹽緩沖液（0.1 mol/L；pH=8）分兩次溶解殘渣，使樣液以小于1.0 mL/min的流速通過固相萃取柱，樣液全部流出后，用10 mL水和5 mL甲醇＋水溶液（2＋3）洗柱，棄去全部流出液，固相萃取柱用真空泵抽干，再用10 mL甲醇洗脫于15 mL離心管中，55 ℃水浴用氮吹至近干，準確加入1.0 mL甲酸銨溶液（0.1 mmol/L）溶解殘渣，過 0.22 μm濾膜，待測定，按上述步驟制備空白樣品提取液。

1.3.2 標準溶液及工作曲線配制

（1）標準儲備溶液配制。準確稱取林可霉素13.90 mg，用甲醇溶解定容至10 mL容量瓶刻度，混勻，得濃度為 1.19 mg/mL標準儲備液，4 ℃保存。

（2）基質標準工作系列配制。吸取0.1 mL林可霉素標準儲備液置于10 mL容量瓶中，甲醇定容至刻度，混勻，得濃度為11.90 μg/mL標準中間液。吸取0.1 mL林可霉素中間液于10 mL容量瓶中，用甲醇溶解定容至刻度，混勻，得濃度為119 ng/mL的標準工作液。再精密吸取林可霉素標準工作液，樣品空白提取液稀釋成2.38 ng/mL、5.94 ng/mL、11.88 ng/mL、23.76 ng/mL和59.40 ng/mL濃度系列基質標準工作溶液。

1.3.3 液相色譜-質譜條件

（1）液相條件。色譜柱：YMC（1.9 μm×150 mm×2.1 mm）；柱溫：30 ℃；進樣量：10 μL；流動相由乙腈（A）和0.1 mmol/L甲酸銨溶液（B）組成，流速：0.3 mL/min。梯度洗脫程序為：0～3.0 min，5%A＋95%B；3.0～3.1 min，60%A＋40%B；3.1～6.1 min，95%A＋5%B；6.1～9.0 min，5%A＋95%B。

（2）質譜條件。離子源類型：ESI；離子源溫度：350 ℃； 霧化器流速：3.0 mL/min；干燥氣流速：10 mL/min；掃描方 式：正離子；掃描模式：MRM；質譜參數：Q1（m/z）：407.3；Q3（m/z）：126.2（定量）/359.1；CE（V）：27/17。

2 結果與分析

2.1 線性范圍及檢出限

以標準工作溶液濃度為橫坐標，以林可霉素測得峰面積為縱坐標，繪制標準曲線，得出標準曲線方程為 y=43 770.7x-16 110.8，相關系數R=0.999 7，表明線性關系良好，根據3倍信噪比計算，檢出限為1.0 μg/kg，滿足國家食品安全監督抽檢農產品中林可霉素要求檢出限 1.0 μg/kg，圖1為林可霉素1.0 μg/kg添加量質譜圖。

圖1 林可霉素1.0 μg/kg添加量質譜圖

2.2 方法回收率與重復性

取陰性樣品雞肉，添加檢出限、2倍檢出限、10倍檢出限3種濃度水平的林可霉素標準溶液進行加標回收試驗，其余操作同上述供試品溶液制備，每個濃度平行測定6次，計算加標回收率和重復性RSD，測得結果見表1。

表1 加標回收率及精密度試驗結果

2.3 精密度與穩定性試驗

選用基質標準工作液5.94 ng/mL連續進樣6次記錄峰面積，根據峰面積計算精密度，RSD為2.41%。同時24 h內每隔4 h測定一次，并記錄峰面積，根據峰面積計算穩定性，RSD為6.63%，表明方法穩定性良好。

3 結論

本研究建立的高效液相色譜-串聯質譜法檢測雞肉中林可霉素殘留的方法，林可霉素保留時間相對穩定，線性關系、重復性、回收率、精密度及穩定性等考察結果良好，能滿足實驗室對雞肉中林可霉素殘留檢測的需求，為研究畜禽肉中林可霉素殘留檢測提供依據。